本文關(guān)鍵詞：TAK1信號(hào)通路在高糖誘導(dǎo)骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞激活中的作用　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶1 巨噬細(xì)胞活化 高糖 炎癥

【摘要】：背景與目的患糖尿病人數(shù)逐年增加,糖尿病腎病(DN)的發(fā)病率也隨之升高。目前普遍認(rèn)為糖尿病腎病是一種慢性低度炎癥性疾病,巨噬細(xì)胞在DN發(fā)生發(fā)展中起重要作用,而靜止的巨噬細(xì)胞對(duì)腎臟無(wú)損傷作用,只有活化的巨噬細(xì)胞才能發(fā)揮促炎性損傷及促纖維化作用。然而巨噬細(xì)胞活化的分子機(jī)制目前尚不清楚。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶1(TGF-βactivated kinase-1,TAK1)屬于絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶(mitogen activated protein kinase kinase kinase,MAP3K)家族成員,是MAPKs和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路共同上游信號(hào)分子,能介導(dǎo)多條炎癥通路激活,發(fā)揮促炎效應(yīng)。然而在高糖條件下TAK1信號(hào)通路是否介導(dǎo)骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞(bone marrow derived macrophages,BMDM)活化尚未見報(bào)道。本研究通過(guò)觀察高濃度葡萄糖刺激及不同濃度TAK1特異性抑制劑5Z-7-oxozeaenol作用下,細(xì)胞上清液中腫瘤壞死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、單核細(xì)胞趨化因子(MCP)-1分泌情況及磷酸化(p)-TAK1、TAK1結(jié)合蛋白(TAK1binding protein,TAB1)、p-JNK、NF-κB p65蛋白表達(dá)變化,探討高糖刺激巨噬細(xì)胞活化及炎癥因子分泌增加是否由TAK1信號(hào)通路部分介導(dǎo)。方法1.小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞(BMDM)的分離、培養(yǎng)。2.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)鑒定BMDM純度。3.采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度5Z-7-oxozeaenol(10-1000nmol/L)的細(xì)胞毒性。4.應(yīng)用Transwell小室構(gòu)建巨噬細(xì)胞和系膜細(xì)胞共培養(yǎng)模型。5.實(shí)驗(yàn)分組:按培養(yǎng)方式分為巨噬細(xì)胞和系膜細(xì)胞共培養(yǎng)、巨噬細(xì)胞單培養(yǎng)2種,每種培養(yǎng)方式按培養(yǎng)條件分7組:(1)抑制劑對(duì)照組(OZ300);(2)滲透壓對(duì)照組(mannitol control,MC);(3)正常對(duì)照組(normal control,NC);(4)高糖組(high glucose,HG);(5)高糖+30n M抑制劑組(HG+OZ30);(6)高糖+100n M抑制劑組(HG+OZ100);(7)高糖+300n M抑制劑組(HG+OZ300)。6.采用免疫熒光雙染法檢測(cè)M1巨噬細(xì)胞表型標(biāo)志誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(i NOS)的表達(dá)。7.采用ELISA法檢測(cè)單培養(yǎng)和共培養(yǎng)模型中各組細(xì)胞上清液TNF-α、IL-1β、MCP-1含量變化。8.應(yīng)用Western印跡技術(shù)檢測(cè)高糖刺激不同時(shí)間點(diǎn)單培養(yǎng)巨噬細(xì)胞p-TAK1、TAB1、p-JNK、NF-κB p65蛋白表達(dá)變化及不同濃度5Z-7-oxozeaenol抑制作用。9.通過(guò)激光共聚焦技術(shù)檢測(cè)TAK1抑制劑對(duì)高糖刺激巨噬細(xì)胞NF-κB p65核轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果1.經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMDM純度達(dá)99.36%。2.本實(shí)驗(yàn)觀察范圍內(nèi)5Z-7-oxozeaenol濃度(30-300nmol/L)對(duì)高糖誘導(dǎo)的BMDM活性均無(wú)影響(P均㧐0.05),給予1000nmol/L的5Z-7-oxozeaenol干預(yù)可使BMDM活性降低(P㩳0.05)。3.高糖組巨噬細(xì)胞表型標(biāo)志i NOS熒光強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組,抑制劑干預(yù)組i NOS熒光強(qiáng)度較高糖組明顯減弱。4.高糖刺激下,單培養(yǎng)和共培養(yǎng)細(xì)胞上清液中TNF-α、IL-1β、MCP-1含量均較對(duì)照組升高(P均0.05),巨噬細(xì)胞與系膜細(xì)胞共培養(yǎng)模型組上清液中TNF-α、IL-1β、MCP-1含量較BMDM單培養(yǎng)組升高(P0.05)。與高糖組比較,TAK1抑制劑呈濃度依賴性降低各組上清液中炎癥因子含量(P0.05)。5.在BMDM單培養(yǎng)條件下,與對(duì)照組比較,高糖刺激巨噬細(xì)胞p-TAK1、TAB1、p-JNK、NF-κB p65蛋白表達(dá)水平均上調(diào)(P均0.05),抑制劑組5Z-7-oxozeaenol呈濃度依賴性降低巨噬細(xì)胞p-TAK1、TAB1、p-JNK、NF-κB p65蛋白表達(dá)量(P0.05)。6.通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察到高糖刺激能誘導(dǎo)BMDM胞漿中NF-κB p65亞基入核,300nmol/L的5Z-7-oxozeaenol干預(yù)可明顯抑制NF-κB p65核轉(zhuǎn)移。結(jié)論1.高糖刺激可上調(diào)i NOS表達(dá),誘導(dǎo)骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞(BMDM)向M1型巨噬細(xì)胞活化。2.TAK1可能通過(guò)激活下游JNK和NF-κB信號(hào)通路,從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞向促炎表型極化。3.高糖刺激可誘導(dǎo)BMDM分泌TNF-α、IL-1β和MCP-1,而巨噬細(xì)胞與系膜細(xì)胞共培養(yǎng)能進(jìn)一步促進(jìn)這些炎癥因子的分泌,加重炎癥反應(yīng)。4.TAK1特異性抑制劑5Z-7-oxozeaenol能抑制TAK1/JNK和TAK1/NF-κB通路激活,降低高糖條件下M1型巨噬細(xì)胞活化,并減少炎癥因子TNF-α、IL-1β和趨化因子MCP-1的產(chǎn)生,從而減輕炎癥反應(yīng)。
[Abstract]:Background and objective: diabetes has increased the number of diabetic nephropathy (DN), the incidence rate is also increased. It is generally believed that the diabetic nephropathy is a chronic inflammation disease, macrophages play an important role in the pathogenesis of DN, but still no damage to kidney macrophages, activated macrophages can only exert pro-inflammatory damage and profibrotic effect. However, the molecular mechanism of macrophage activation is unclear. Transforming growth factor activated kinase 1 (TGF- beta activated kinase-1, TAK1) belong to the mitogen activated protein kinase (mitogen activated protein kinase kinase kinase, MAP3K) family members, MAPKs and nuclear factor kappa B (nuclear factor-kappa B NF-, K B) pathways upstream signal molecule mediated by multiple inflammatory pathways activation play a proinflammatory effect. However, in high glucose conditions TAK1 signaling pathway Is mediated by bone marrow macrophages (bone marrow derived macrophages, BMDM) activation has not been reported. This study through the observation of high glucose stimulation and the effects of different concentrations of TAK1 specific inhibitor 5Z-7-oxozeaenol and tumor necrosis factor in the supernatant (TNF) - alpha, interleukin (IL) -1 beta, monocyte chemotactic factor (MCP) -1 secretion and phosphorylation of -TAK1 (P), TAK1 binding protein (TAK1binding, p-JNK, protein, TAB1) expression of NF- kappa B p65 protein, on glucose stimulated macrophage activation and inflammatory cytokines secretion is mediated in part by TAK1 signaling pathway. Methods 1. mouse bone marrow-derived macrophages (BMDM) separation.2. training, flow cytometry was used to identify BMDM purity of.3. with different concentration of 5Z-7-oxozeaenol was detected by CCK-8 (10-1000nmol/L) on the cytotoxicity of.4. application of Transwell small chamber construction and mesangial cells were macrophages Training model of.5. experimental groups: according to the training mode is divided into co cultured macrophages and macrophages cultured mesangial cells, single 2 kinds, each kind of culture by way of culture conditions were divided into 7 groups: control group (1) inhibitor (OZ300); (2) osmotic pressure control group (mannitol control, MC); (3) normal the control group (normal, control, NC); (4) high glucose group (high glucose, HG); (5) high glucose +30n M inhibitor group (HG+OZ30); (6) high glucose +100n M inhibitor group (HG+OZ100); (7) high glucose +300n M inhibitor group (HG+OZ300) immunofluorescence double staining of M1 macrophages phenotype of inducible nitric oxide synthase by.6. (I NOS) on the expression of.7. was detected by ELISA single and co cultured supernatant of cells in each group of TNF- alpha, IL-1 beta model, the change of the content of MCP-1.8. using Western blot of high glucose at different time points of single cultured macrophage p-TAK1, TAB1, p-JNK, and expression of NF- K B p65 protein Effects of different concentrations of 5Z-7-oxozeaenol inhibited.9. by confocal laser technology to detect TAK1 inhibitors on glucose stimulated macrophage NF- kappa B p65 nuclear transfer. Results 1. the purity of BMDM cells was detected by flow cytometry as 99.36%.2. we observed the concentration range of 5Z-7-oxozeaenol (30-300nmol/L) had no effect on high glucose induced BMDM activity (P? 0.05) 5Z-7-oxozeaenol, give intervention 1000nmol/L can make the activity of BMDM decreased (P? 0.05).3. high glucose group macrophage phenotype marker I NOS fluorescence intensity was significantly higher than the control group, I inhibitor group, NOS fluorescence intensity high sugar group significantly reduced.4. stimulated by high glucose, single and co cultured in the supernatant of TNF- alpha, IL-1 beta, MCP-1 the content were higher than those in control group (P 0.05), TNF- alpha, model group was co cultured with macrophages and mesangial cells of IL-1 beta, MCP-1 content is BMDM single culture group (P0.05) and high rise. Sugar group, TAK1 inhibitor showed a concentration dependent decrease inflammatory cytokine content in supernatant were measured by.5. BMDM (P0.05) in single culture conditions, compared with the control group, high glucose stimulated p-TAK1, TAB1, p-JNK, expression of NF- kappa B p65 protein levels were up-regulated (P 0.05), 5Z-7-oxozeaenol inhibitor group in a concentration dependent manner. Reduce TAB1, macrophage p-TAK1, p-JNK expression of NF- kappa B protein p65 (P0.05).6. by laser confocal microscopy to high glucose induced BMDM cytoplasmic NF- kappa B subunit p65 in the nucleus, 300nmol/L 5Z-7-oxozeaenol intervention can significantly inhibit the NF- kappa B p65 nuclear translocation. Conclusion high glucose stimulated expression of 1. upregulation of I NOS induced bone marrow-derived macrophages (BMDM) activation to M1 macrophages.2.TAK1 may activate downstream JNK and NF- B signaling pathway, which promotes macrophage to proinflammatory phenotype polarization.3. high glucose can induce the secretion of BMDM TNF- alpha, IL-1 beta and MCP-1, and mesangial cells were co cultured with macrophages can further promote the secretion of these cytokines, aggravate the inflammatory response of.4.TAK1 specific inhibitor 5Z-7-oxozeaenol can inhibit TAK1/JNK and TAK1/NF- K B activation, reduce the activation of M1 macrophages under high glucose condition, and reduce the inflammatory factor TNF- alpha, IL-1 beta and chemotaxis factor MCP-1, in order to reduce inflammation.

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;豚鼠巨噬細(xì)胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細(xì)胞毒作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1976年04期

2 鄧俠進(jìn);;巨噬細(xì)胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1979年02期

3 陸天才;;疾病對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];煤礦醫(yī)學(xué);1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細(xì)胞的簡(jiǎn)單方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

5 謝志堅(jiān);巨噬細(xì)胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年06期

6 饒艷;運(yùn)動(dòng)及神經(jīng)內(nèi)分泌對(duì)巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學(xué);2002年05期

7 朱金元;;吸煙對(duì)肺巨噬細(xì)胞的影響[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

8 張俊峰;過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細(xì)胞系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年03期

9 韋錦學(xué);顧軍;;巨噬細(xì)胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學(xué);2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2008年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細(xì)胞激活作用的研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國(guó)明;周輝;;巨噬細(xì)胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對(duì)于淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細(xì)胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細(xì)胞的分泌功能[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標(biāo)記巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學(xué)術(shù)會(huì)論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國(guó)胃癌學(xué)術(shù)會(huì)議暨第二屆陽(yáng)光長(zhǎng)城腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達(dá);;PDT誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞NO合成的影響[A];第七屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞(THP-1重細(xì)胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達(dá)的影響[A];浙江省免疫學(xué)會(huì)第五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細(xì)胞未必皆“惡人”[N];健康報(bào);2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細(xì)胞治癱瘓[N];科技日?qǐng)?bào);2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時(shí)報(bào);2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報(bào);2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國(guó)食品質(zhì)量報(bào);2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細(xì)胞泡沫化抑制劑研究快步進(jìn)行[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補(bǔ)硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報(bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 周赤燕;巨噬細(xì)胞MsrA對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細(xì)胞增殖和炎癥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

4 孟濤;異丙酚對(duì)心臟收縮功能的抑制作用及其對(duì)巨噬細(xì)胞分泌功能調(diào)節(jié)的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細(xì)胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 蔣興偉;Tim-3對(duì)巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細(xì)胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動(dòng)脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化效應(yīng)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對(duì)實(shí)驗(yàn)性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細(xì)胞因子表達(dá)及分型的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 曹爽;高糖對(duì)巨噬細(xì)胞TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細(xì)胞荷瘤小鼠抑制巨噬細(xì)胞CCL5分泌的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 李美玲;雙酚A對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化的作用及機(jī)制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

，

本文編號(hào)：1394609