發(fā)布時間：2017-12-27 04:02

  本文關(guān)鍵詞：5-Aza-CdR對胰島β細胞株中miR-375甲基化及表達水平的研究　出處：《石河子大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： 2型糖尿病 mi R-375 DNA去甲基化 MALDI-TOF MS

【摘要】：目的:探討5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)對小鼠胰島β細胞株(MIN6)中mi R-375基因DNA甲基化及其表達的影響。方法:(1)用不同濃度的5-Aza-Cd R處理MIN6細胞,陰性對照組不加藥,根據(jù)處理的劑量分為0umol/L組、0.08umol/L組、0.4umol/L組、2umol/L組、10umol/L組、50umol/L組,分別作用24h、48h、72h用MTT比色法檢測細胞的生長抑制情況。(2)采用基質(zhì)輔助激光解析電離時間飛行質(zhì)譜儀(MALDI-TOF MS)檢測不同濃度5-Aza-Cd R處理24h、48h、72h的MIN6細胞株及未經(jīng)藥物處理的NIH3T3細胞株mi R-375基因DNA甲基化狀態(tài)。(3)運用q RT-PCR檢測NIH3T3細胞及5-Aza-Cd R(50umol/L)處理MIN6細胞24h、48h、72h后mi R-375的表達情況。結(jié)果:(1)5-Aza-Cd R對MIN6細胞有抑制作用,2umol/L組5-Aza-Cd R作用24h、48h、72h與其余各濃度組比較OD值均有差異(P0.05),且各時間段間比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)MIN6細胞經(jīng)不同濃度5-Aza-Cd R處理24h、48h、72h,檢測各組細胞中mi R-375基因DNA呈高甲基化狀態(tài),其中50umol/L組mi R-375平均甲基化率均低于其它濃度組。(3)MIN6細胞經(jīng)50 umol/L組5-Aza-Cd R處理24h、48h、72h后,檢測各組mi R-375的表達與0umol/L組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),且mi R-375的表達均高于0umol/L組。(4)NIH3T3細胞組mi R-375的表達比MIN6細胞組高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:(1)5-Aza-Cd R能夠抑制MIN6細胞的增殖。(2)相對于NIH3T3細胞,MIN6細胞中mi R-375基因DNA啟動子區(qū)呈高甲基化狀態(tài),低表達。(3)50umol/L濃度的5-Aza-Cd R能使MIN6細胞中mi R-375基因DNA去甲基化、激活mi R-375的表達,其甲基化與表達呈負相關(guān)。
[Abstract]:Objective: To investigate the effect of 5- aza -2 '5-Aza-2 -deoxycytidine (5-Aza-CdR) on MI R-375 gene DNA methylation and its expression in mouse islet beta cell line (MIN6). Methods: (1) 5-Aza-Cd with different concentration of R treated MIN6 cells, negative control group and no drug treatment, according to the dose divided into 0umol/L group, 0.08umol/L group, 0.4umol/L group, 2umol/L group, 10umol/L group, 50umol/L group, 24h, 48h and 72h respectively by MTT inhibition assay, cell growth. (2) matrix assisted laser desorption ionization time flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) was used to detect MIN6 methylation status of MI R-375 gene in 24h cells, 48h 72h MIN6 cells and NIH3T3 cells treated with different concentrations of 5-Aza-Cd R. (3) the expression of MI R-375 after 24h, 48h and 72h in MIN6 cells was detected by NIH3T3 cells and 5-Aza-Cd R (50umol/L) using Q RT-PCR. Results: (1) 5-Aza-Cd R has inhibitory effect on MIN6 cells, 2umol/L group 5-Aza-Cd R role of 24h, 48h, 72h and the rest of the concentration group (P0.05), difference of OD value were statistically significant and the time difference between (P0.05). (2) MIN6 cells were treated with different concentrations of 5-Aza-Cd R for 24h, 48h and 72h. The MI R-375 gene DNA in each group was hypermethylation, and the average methylation rate of MI group in 50umol/L group was lower than that in other concentration groups. (3) after treatment of 24h, 48h and 72h by 5-Aza-Cd R in 50 umol/L group, the expression of MI R-375 in MIN6 cells was significantly different from that in 0umol/L group (P0.05), and the expression of R-375 was higher than that in group C. (4) the expression of MI R-375 in the NIH3T3 cell group was higher than that in the MIN6 cell group, and the difference was statistically significant (P0.05). Conclusion: (1) 5-Aza-Cd R can inhibit the proliferation of MIN6 cells. (2) compared with NIH3T3 cells, the DNA promoter region of the MI R-375 gene in MIN6 cells showed high methylation status and low expression. (3) the 5-Aza-Cd R of 50umol/L concentration can demethylation of the MI R-375 gene DNA in MIN6 cells and activate the expression of MI R-375, and the methylation and expression are negatively correlated.
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1

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本文編號：1340138