本文關(guān)鍵詞：miR-27a介導(dǎo)利拉魯肽抑制H9C2大鼠心肌細(xì)胞纖維化作用的研究　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:糖尿病患病率逐年增加,據(jù)國際糖尿病聯(lián)合會最新數(shù)據(jù)顯示2015年全世界有4.15億20-79歲之間的糖尿病患者,而到2040年這一數(shù)字將上升到6.42億。糖尿病是一種全身性疾病,繼發(fā)于糖尿病的心血管并發(fā)癥發(fā)病率高,其中心肌纖維化是導(dǎo)致糖尿病患者心室重構(gòu)的重要原因。心肌纖維化目前尚無有效的治療方法,所以預(yù)防及控制其進(jìn)展尤為重要。利拉魯肽屬于GLP-1受體激動(dòng)劑,除降糖作用外還有減重、調(diào)脂及心血管保護(hù)等作用。近期研究顯示利拉魯肽還具有抗纖維化作用,課題組前期研究發(fā)現(xiàn)利拉魯肽具有減輕糖尿病大鼠心肌及肺組織纖維化的作用,在H9C2大鼠心肌細(xì)胞中利拉魯肽可降低Micro RNA27a(mi R-27a)表達(dá)。Micro RNAs(mi RNAs)是轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)的一類非編碼小RNAs,在細(xì)胞及生長過程中有重要的調(diào)節(jié)作用,并與人類和動(dòng)物的多種疾病有關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)mi R-27a在肝、肺等許多器官中具有促纖維化作用,并與心力衰竭及心肌肥大有關(guān)。本研究旨在體外觀察mi R-27a表達(dá)對H9C2大鼠心肌細(xì)胞纖維化的影響,高糖狀態(tài)下心肌細(xì)胞mi R-27a表達(dá)變化及利拉魯肽是否通過降低mi R-27a表達(dá)抑制H9C2大鼠心肌細(xì)胞纖維化,從而為心肌纖維化預(yù)防及控制提供新靶點(diǎn)。方法:1.將H9C2大鼠心肌細(xì)胞分為6組:對照組,脂質(zhì)體lipo2000組(lipo2000組),轉(zhuǎn)染mi R-27a mimics低濃度組(mi R-27a mimics低濃度組),轉(zhuǎn)染mi R-27a mimics低濃度陰性對照組(mi R-27a mimics低濃度N.C組),轉(zhuǎn)染mi R-27a mimics高濃度組(mi R-27a mimics高濃度組),轉(zhuǎn)染mi R-27a mimics高濃度陰性對照組(mi R-27a mimics高濃度N.C組),其中低濃度組分別轉(zhuǎn)染mi R-27a mimics及N.C各150 pmol,高濃度組分別轉(zhuǎn)染mi R-27a mimics及N.C各300 pmol,轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。2.將H9C2大鼠心肌細(xì)胞分為8組:低糖組(LG組),高糖組(HG組),高糖+mi R-27a mimics組(mimics組),高糖+mi R-27a inhibitor組(inhibitor組),高糖+mi R-27a mimics N.C組(mimics N.C組),高糖+mi R-27a inhibitor N.C組(inhibitor N.C組),高糖+lipo2000組(lipo組),高滲組(HO組)。mi R-27a mimics及N.C和mi R-27a inhibitor及N.C轉(zhuǎn)染濃度為300 pmol,轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。3.將H9C2大鼠心肌細(xì)胞分為6組:對照組,利拉魯肽組,利拉魯肽+lipo2000組,利拉魯肽+mi R-27a mimics組,利拉魯肽+mi R-27a mimics N.C組,mi R-27a mimics組。其中mi R-27a mimics及N.C轉(zhuǎn)染濃度為300 pmol,利拉魯肽濃度為1000 nmol/L(1000 n M),含利拉魯肽組于轉(zhuǎn)染前24小時(shí)給予1000 n M利拉魯肽提前干預(yù),轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。收集細(xì)胞后用熒光定量PCR檢測各組mi R-27a表達(dá)水平,細(xì)胞免疫熒光染色觀察細(xì)胞內(nèi)膠原蛋白I表達(dá)情況。用Western Blotting方法檢測與心肌纖維化相關(guān)因子:過氧化酶活化增值受γ(PPARγ)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)、結(jié)締組織生長因子(CTGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)表達(dá)變化。結(jié)果:1.熒光定量PCR結(jié)果顯示mi R-27a mimics低濃度組及高濃度組較對照組mi R-27a表達(dá)水平增高,且高濃度組較低濃度組mi R-27a表達(dá)水平進(jìn)一步增高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。對照組與lipo2000組、mi R-27a mimics低濃度N.C組和高濃度N.C組mi R-27a表達(dá)水平無差異。2.熒光定量PCR結(jié)果示高糖組較低糖組mi R-27a表達(dá)水平增高,高糖+mi R-27a mimics組增高更顯著(p0.05)。而高糖+mi R-27a inhibitor組較低糖組mi R-27a表達(dá)水平降低(p0.05)。高糖組與高糖+lipo2000組,高糖+mi R-27a mimics N.C組,高糖+mi R-27a inhibitor N.C組mi R-27a表達(dá)水平無差異,低糖組與高滲組mi R-27a表達(dá)水平無差異。3.Western Blotting結(jié)果顯示,高糖組和高糖+mi R-27a mimics較低糖組PPARγ蛋白表達(dá)水平降低,TGF-β1、MMP-9和CTGF蛋白表達(dá)水平增高,且高糖+mi R-27a mimics組蛋白表達(dá)變化更顯著,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。高糖+mi R-27a inhibitor組較低糖組蛋白表達(dá)呈反向變化(p0.05)。高糖組與高糖+lipo2000組,高糖+mi R-27a mimics N.C組,高糖+mi R-27a inhibitor N.C組蛋白表達(dá)水平無差異,低糖組與高滲組蛋白表達(dá)水平無差異。4.用利拉魯肽1000 n M提前干預(yù)后,利拉魯肽組、利拉魯肽+lipo2000組及利拉魯肽+mi R-27a mimics N.C組mi R-27a表達(dá)水平較對照組下降,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。利拉魯肽+mi R-27a mimics組與mi R-27a mimics組mi R-27a表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但較其余四組明顯增加(p0.05)。5.細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果示細(xì)胞內(nèi)膠原蛋白I表達(dá)水平與細(xì)胞內(nèi)mi R-27a表達(dá)水平一致,隨著細(xì)胞內(nèi)mi R-27a表達(dá)水平增加,細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度增加。結(jié)論:1.mi R-27a可促進(jìn)心肌細(xì)胞纖維化并呈濃度依賴性。2.高糖狀態(tài)下心肌細(xì)胞mi R-27a表達(dá)增加,mi R-27a可調(diào)節(jié)PPARγ、TGF-β1、MMP-9和CTGF蛋白表達(dá)促進(jìn)心肌細(xì)胞纖維化。3.利拉魯肽能降低mi R-27a表達(dá),從而抑制心肌細(xì)胞纖維化。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2

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