本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定表達(dá)小鼠PNPLA7的Huh7細(xì)胞系的構(gòu)建

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【摘要】：目的 :構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)小鼠PNPLA7-Flag蛋白的人類肝癌細(xì)胞Huh7細(xì)胞系,觀察小鼠PNPLA7在Huh7細(xì)胞中的過表達(dá)以及對(duì)Huh7細(xì)胞脂質(zhì)含量的影響。方法:構(gòu)建p CMV6-PNPLA7-Flag真核表達(dá)載體,應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將該質(zhì)粒導(dǎo)入Huh7細(xì)胞,隨后通過G418篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系,運(yùn)用Western blot方法檢測(cè)PNPLA7蛋白表達(dá);并通過油酸處理及油紅染色觀察過表達(dá)PNPLA7蛋白對(duì)Huh7細(xì)胞中脂質(zhì)含量的影響。結(jié)果:成功獲得2株穩(wěn)定過表達(dá)PNPLA7-Flag的Huh7細(xì)胞系;Huh7細(xì)胞中過表達(dá)PNPLA7蛋白,在油酸處理后細(xì)胞內(nèi)脂滴含量減少。結(jié)論:穩(wěn)定表達(dá)小鼠PNPLA7的Huh7細(xì)胞系構(gòu)建成功;小鼠PNPLA7在Huh7細(xì)胞中的表達(dá)會(huì)引起細(xì)胞中脂質(zhì)含量減少,從而為后續(xù)研究PNPLA7蛋白在脂代謝通路的功能及機(jī)制提供可靠的細(xì)胞模型。
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)系江蘇省功能基因組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31271268,81471079)
【分類號(hào)】：R589
【正文快照】： 脂肪組織主要用于儲(chǔ)存能量,在全身脂肪穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn),脂肪組織也是重要的內(nèi)分泌器官,可以分泌多種脂肪因子來調(diào)節(jié)機(jī)體能量代謝平衡,如瘦素、脂聯(lián)素、抵抗素等[1]。哺乳動(dòng)物體內(nèi)存在兩種脂肪組織:白色脂肪組織(white adipocyte tissue,WAT)和棕色脂肪組織(b，

本文編號(hào)：1268949