本文關(guān)鍵詞：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向甲狀旁腺細(xì)胞定向分化的體外研究

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【摘要】：目的:通過(guò)用甲狀旁腺細(xì)胞培養(yǎng)液體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),促使BMSCs向甲狀旁腺細(xì)胞定向分化。為BMSCs應(yīng)用于臨床治療甲狀旁腺功能減退癥奠定理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:(1)SD大鼠甲狀旁腺細(xì)胞的分離、培養(yǎng)選取體重約150g±20g健康雄性SD大鼠,取其甲狀旁腺,漂洗、剪碎、消化后,接種于培養(yǎng)瓶中,用RPMI 1640培養(yǎng)液中(含15%FBS)培養(yǎng)。(2)SD大鼠甲狀旁腺細(xì)胞培養(yǎng)液的制備選取第3代、融合率達(dá)80%的SD大鼠甲狀旁腺細(xì)胞,洗滌后換DMEM-F12培養(yǎng)液(含15%FBS),每天收集細(xì)胞培養(yǎng)液。將培養(yǎng)液離心后取上清經(jīng)0.22um的微孔濾膜過(guò)濾,凍存?zhèn)溆�。使用前�?:2(v/v)比例與DMEM-F12培養(yǎng)液(含15%FBS)混合。(3)SD大鼠BMSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定選取1周齡的健康雄性SD大鼠,無(wú)菌下取股骨及脛骨。采用全骨髓貼壁培養(yǎng)篩選法獲取SD大鼠BMSCs。取第3代SD大鼠BMSCs,加入CD45、CD90、CD29、CD11b補(bǔ)體抗體,流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè),對(duì)SD大鼠BMSCs進(jìn)行鑒定。(4)SD大鼠BMSCs的分化、鑒定用甲狀旁腺細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)SD大鼠BMSCs,設(shè)實(shí)驗(yàn)組及陽(yáng)性對(duì)照組。分別于7d、14d、21d和28 d后收集細(xì)胞,通過(guò)Western Blot、RT-PCR方法檢測(cè)甲狀旁腺細(xì)胞表面標(biāo)志物(PTH、CASR、GCM2)的表達(dá)。結(jié)果:(1)鏡下觀察到形態(tài)均一的SD大鼠甲狀旁腺細(xì)胞。(2)能夠穩(wěn)定傳代且均一性良好的SD大鼠BMSCs。流式細(xì)胞儀檢測(cè)第3代SD大鼠BMSCs的純度高達(dá)95%以上。(3)SD大鼠甲狀旁腺細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)的SD大鼠BMSCs,分化為類(lèi)甲狀旁腺細(xì)胞,WB及RT-PCR可以檢測(cè)到甲狀旁腺細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá),且其表達(dá)的量隨著培養(yǎng)液培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增高。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功證實(shí),用SD大鼠甲狀旁腺細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)SD大鼠BMSCs,可以誘導(dǎo)SD大鼠BMSCs向甲狀旁腺細(xì)胞分化。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R582.2

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