本文關鍵詞：骨橋蛋白（OPN）及其整合素受體αvβ3在糖尿病合并高度近視豚鼠視網(wǎng)膜中的表達研究

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【摘要】：目的:本項研究探討高度近視對糖尿病視網(wǎng)膜病變中骨橋蛋白(OPN)及整合素αvβ3受體的表達水平的影響,以推斷高度近視對糖尿病視網(wǎng)膜病變的影響機制,及其臨床應用的意義。通過建立糖尿病合并形覺剝奪性高度近視豚鼠模型,利用免疫組織化學染色法對視網(wǎng)膜組織中骨橋蛋白(OPN)及整合素αvβ3受體的表達情況進行檢測。方法:建立四組豚鼠模型,分別為正常對照組、高度近視組、糖尿病組、糖尿病合并高度近視組。選取出生1周齡英國種健康單色豚鼠50只,雌雄不限,排除眼部疾病和先天性屈光不正個體。數(shù)字表法隨機分為4組,正常對照組8只,余三組每組14只,嚴格按照實驗豚鼠飼養(yǎng)條件適應性喂養(yǎng)一周后開始造模。Ⅰ組為正常對照組,常規(guī)飼養(yǎng)20周,第8周時左下腹腔注射空白檸檬酸緩沖液;Ⅱ組為形覺剝奪性高度近視組,采用無創(chuàng)遮蓋法遮蓋右眼20周誘導形覺剝奪性近視,第8周時左下腹腔等量注射空白檸檬酸緩沖液;Ⅲ組為糖尿病組,飼養(yǎng)8周時空腹24h后左下腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)280 mg/kg誘發(fā)糖尿病;Ⅳ組為形覺剝脫性高度近視合并糖尿病組,采用無創(chuàng)遮蓋法遮蓋右眼20周誘導形覺剝奪性近視,第8周時空腹24h后左下腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)280 mg/kg誘發(fā)糖尿病。Ⅱ組和Ⅳ組以帶狀光檢影屈光度≥-6.00D為形覺剝奪性高度近視成模標準,Ⅲ和Ⅳ組耳緣靜脈采血,測空腹血糖≥16.5mmol/L為糖尿病成模標準,血糖未達標準,按180mg/kg補充劑量注射。繼續(xù)觀察喂養(yǎng)至血糖成模后12周,棄去未達成模標準及死亡豚鼠。每組隨機選擇8只作為實驗研究對象。灌注法摘取豚鼠眼球標本,制作石蠟切片分別進行HE染色、免疫組化染色,光鏡下觀察視網(wǎng)膜組織細胞形態(tài),計數(shù)OPN和整合素αvβ3陽性染色細胞比率,最后收集所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。結果:1.無糖尿病組(Ⅰ組、Ⅱ組)體重水平明顯較有糖尿病組(Ⅲ組、Ⅳ組)體重高,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。無糖尿病組(Ⅰ組、Ⅱ組)空腹血糖水平明顯較有糖尿病組(Ⅲ組、Ⅳ組)空腹血糖低,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.無近視組(Ⅰ組、Ⅲ組)眼軸長度明顯較有近視組(Ⅱ組、Ⅳ組)短,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。無近視組(Ⅰ組、Ⅲ組)明顯較有近視組(Ⅱ組、Ⅳ組)低,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.免疫組化染色觀察OPN及其整合素受體αvβ3呈胞漿表達,染色呈棕黃色顆粒,主要位于內核層、內叢狀層、神經(jīng)節(jié)細胞層,有糖尿病組(Ⅲ組、Ⅳ組)骨橋蛋白和整合素αvβ3表達明顯高于無糖尿病組(Ⅰ組、Ⅱ組),且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。其中Ⅲ組的OPN陽性表達率高于Ⅳ組,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Ⅲ組的整合素αvβ3陽性表達率略高于Ⅳ組,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)4.HE染色觀察各組視網(wǎng)膜組織形態(tài),Ⅰ組視網(wǎng)膜組織細胞數(shù)目、形態(tài)、排列、及厚度均正常,Ⅱ組鞏膜、視網(wǎng)膜厚度變薄,胞間隙擴大,Ⅲ組視網(wǎng)膜細胞層變薄,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層排列不規(guī)則,細胞變形,胞間隙增大,部分細胞變性壞死,視網(wǎng)膜組織出現(xiàn)斷裂。Ⅳ組視網(wǎng)膜變薄,神經(jīng)節(jié)細胞層排列不規(guī)則,細胞變形,視網(wǎng)膜組織斷裂。結論:1.在糖尿病與糖尿病合并近視時,視網(wǎng)膜結構發(fā)生改變,尤其以神經(jīng)節(jié)細胞層變化明顯。2.無創(chuàng)面罩遮蓋法遮擋8周聯(lián)合腹腔一次性注射STZ 280mg/kg可以成功建立形覺剝奪性近視合并糖尿病豚鼠模型,其中糖尿病模型接近人類I型糖尿病特點。3.OPN在糖尿病合并高度近視豚鼠視網(wǎng)膜組織中的表達較其在糖尿病模型表達低,形覺剝奪性高度近視有可能通過降低眼內OPN的表達,阻礙糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)展。4.形覺剝奪性高度近視是糖尿病視網(wǎng)膜病變的保護因素。
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R774.1

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本文編號：1247202