發(fā)布時(shí)間：2017-12-03 03:05

  本文關(guān)鍵詞：骨橋蛋白（OPN）及其整合素受體αvβ3在糖尿病合并高度近視豚鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)研究

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【摘要】：目的:本項(xiàng)研究探討高度近視對糖尿病視網(wǎng)膜病變中骨橋蛋白(OPN)及整合素αvβ3受體的表達(dá)水平的影響,以推斷高度近視對糖尿病視網(wǎng)膜病變的影響機(jī)制,及其臨床應(yīng)用的意義。通過建立糖尿病合并形覺剝奪性高度近視豚鼠模型,利用免疫組織化學(xué)染色法對視網(wǎng)膜組織中骨橋蛋白(OPN)及整合素αvβ3受體的表達(dá)情況進(jìn)行檢測。方法:建立四組豚鼠模型,分別為正常對照組、高度近視組、糖尿病組、糖尿病合并高度近視組。選取出生1周齡英國種健康單色豚鼠50只,雌雄不限,排除眼部疾病和先天性屈光不正個(gè)體。數(shù)字表法隨機(jī)分為4組,正常對照組8只,余三組每組14只,嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)豚鼠飼養(yǎng)條件適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開始造模。Ⅰ組為正常對照組,常規(guī)飼養(yǎng)20周,第8周時(shí)左下腹腔注射空白檸檬酸緩沖液;Ⅱ組為形覺剝奪性高度近視組,采用無創(chuàng)遮蓋法遮蓋右眼20周誘導(dǎo)形覺剝奪性近視,第8周時(shí)左下腹腔等量注射空白檸檬酸緩沖液;Ⅲ組為糖尿病組,飼養(yǎng)8周時(shí)空腹24h后左下腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)280 mg/kg誘發(fā)糖尿病;Ⅳ組為形覺剝脫性高度近視合并糖尿病組,采用無創(chuàng)遮蓋法遮蓋右眼20周誘導(dǎo)形覺剝奪性近視,第8周時(shí)空腹24h后左下腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)280 mg/kg誘發(fā)糖尿病。Ⅱ組和Ⅳ組以帶狀光檢影屈光度≥-6.00D為形覺剝奪性高度近視成模標(biāo)準(zhǔn),Ⅲ和Ⅳ組耳緣靜脈采血,測空腹血糖≥16.5mmol/L為糖尿病成模標(biāo)準(zhǔn),血糖未達(dá)標(biāo)準(zhǔn),按180mg/kg補(bǔ)充劑量注射。繼續(xù)觀察喂養(yǎng)至血糖成模后12周,棄去未達(dá)成模標(biāo)準(zhǔn)及死亡豚鼠。每組隨機(jī)選擇8只作為實(shí)驗(yàn)研究對象。灌注法摘取豚鼠眼球標(biāo)本,制作石蠟切片分別進(jìn)行HE染色、免疫組化染色,光鏡下觀察視網(wǎng)膜組織細(xì)胞形態(tài),計(jì)數(shù)OPN和整合素αvβ3陽性染色細(xì)胞比率,最后收集所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1.無糖尿病組(Ⅰ組、Ⅱ組)體重水平明顯較有糖尿病組(Ⅲ組、Ⅳ組)體重高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。無糖尿病組(Ⅰ組、Ⅱ組)空腹血糖水平明顯較有糖尿病組(Ⅲ組、Ⅳ組)空腹血糖低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.無近視組(Ⅰ組、Ⅲ組)眼軸長度明顯較有近視組(Ⅱ組、Ⅳ組)短,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。無近視組(Ⅰ組、Ⅲ組)明顯較有近視組(Ⅱ組、Ⅳ組)低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.免疫組化染色觀察OPN及其整合素受體αvβ3呈胞漿表達(dá),染色呈棕黃色顆粒,主要位于內(nèi)核層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層,有糖尿病組(Ⅲ組、Ⅳ組)骨橋蛋白和整合素αvβ3表達(dá)明顯高于無糖尿病組(Ⅰ組、Ⅱ組),且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其中Ⅲ組的OPN陽性表達(dá)率高于Ⅳ組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Ⅲ組的整合素αvβ3陽性表達(dá)率略高于Ⅳ組,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)4.HE染色觀察各組視網(wǎng)膜組織形態(tài),Ⅰ組視網(wǎng)膜組織細(xì)胞數(shù)目、形態(tài)、排列、及厚度均正常,Ⅱ組鞏膜、視網(wǎng)膜厚度變薄,胞間隙擴(kuò)大,Ⅲ組視網(wǎng)膜細(xì)胞層變薄,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層排列不規(guī)則,細(xì)胞變形,胞間隙增大,部分細(xì)胞變性壞死,視網(wǎng)膜組織出現(xiàn)斷裂。Ⅳ組視網(wǎng)膜變薄,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層排列不規(guī)則,細(xì)胞變形,視網(wǎng)膜組織斷裂。結(jié)論:1.在糖尿病與糖尿病合并近視時(shí),視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,尤其以神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層變化明顯。2.無創(chuàng)面罩遮蓋法遮擋8周聯(lián)合腹腔一次性注射STZ 280mg/kg可以成功建立形覺剝奪性近視合并糖尿病豚鼠模型,其中糖尿病模型接近人類I型糖尿病特點(diǎn)。3.OPN在糖尿病合并高度近視豚鼠視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)較其在糖尿病模型表達(dá)低,形覺剝奪性高度近視有可能通過降低眼內(nèi)OPN的表達(dá),阻礙糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)展。4.形覺剝奪性高度近視是糖尿病視網(wǎng)膜病變的保護(hù)因素。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1

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7 李，

本文編號(hào)：1247202