本文關(guān)鍵詞：維生素D改善超負(fù)荷誘導(dǎo)的老年大鼠骨骼肌肥大及其機(jī)制的探討

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【摘要】：研究目的:隨增齡而出現(xiàn)的肌肉萎縮、力量下降等問題已成為影響老年人生活質(zhì)量的重要因素。大量研究報(bào)道衰老過程中肌肉流失與維生素D缺乏呈正相關(guān),那么是否維生素D補(bǔ)充能夠延緩或改善老齡肌肉的丟失?本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探討維生素D對(duì)衰老個(gè)體骨骼肌肥大過程的影響及在骨骼肌細(xì)胞中發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的可能機(jī)制進(jìn)行探討。研究方法:動(dòng)物實(shí)驗(yàn):以20只雄性SD大鼠(24月齡)為研究對(duì)象。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,手術(shù)建立骨骼肌肥大模型(Over-load),切斷左后肢腓腸肌遠(yuǎn)端肌腱,另一側(cè)行假手術(shù)。手術(shù)后分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組每天灌胃1000IU/kg的Vitamin D,對(duì)照組灌胃等量soybean oil。持續(xù)一周后取材,液氮速凍冷藏待測(cè)。酶聯(lián)免疫檢測(cè)血清25(OH)D含量和骨骼肌中VDR的水平;Western blotting技術(shù)檢測(cè)mTOR、p70s6k蛋白表達(dá)及磷酸化水平。細(xì)胞實(shí)驗(yàn):以C2C12細(xì)胞為研究對(duì)象,C2C12細(xì)胞首先在生長(zhǎng)培養(yǎng)液(10%胎牛血清、90%DMEM、100IU/1ml雙抗)培養(yǎng)至培養(yǎng)皿面積的70%。然后用分化培養(yǎng)液(2%馬血清、98%DMEM、100IU/1ml雙抗)分化培養(yǎng)7天(其中分化前后分別測(cè)一次總抗氧化能力),每天更換培養(yǎng)液并觀察。分為牽拉組和非牽拉組,維生素D干預(yù)的牽拉組和非牽拉組,運(yùn)用機(jī)械牽拉和100nm/ML維生素D干預(yù)3天,收集細(xì)胞提取總蛋白。Western blotting技術(shù)檢測(cè)pi3k、AKt、mTOR、p70s6k、rp S6、ERK1/2、e EF2、TNF-a蛋白質(zhì)表達(dá)及磷酸化水平。研究結(jié)果:動(dòng)物實(shí)驗(yàn):1、超負(fù)荷手術(shù)側(cè)(Ovld)跖肌較假手術(shù)側(cè)(sham)均顯著增加(p0.05)。維生素D補(bǔ)充顯著增加了ovld側(cè)跖肌質(zhì)量(p0.05),但sham側(cè)肌肉沒有顯著性變化。2、大鼠血清25(OH)D酶聯(lián)免疫結(jié)果顯示,補(bǔ)充維生素D顯著提高大鼠血清25OHD水平(p0.05)。3、維生素D補(bǔ)充組,ovld側(cè)肌細(xì)胞VDR顯著高于sham側(cè)(p0.05)。而安慰劑組,左右側(cè)肌細(xì)胞中則無顯著性差異,即維生素D補(bǔ)充提高了ovld側(cè)肌肉中VDR的表達(dá)。4、Western blotting結(jié)果顯示Ovld模型均促進(jìn)p-mTOR/mTOR、p-rpS6/rpS6比值的增加,但僅在維生素D補(bǔ)充組有顯著性差異(p0.05)。與安慰劑相比,維生素D顯著促進(jìn)手術(shù)Ovld側(cè)肌細(xì)胞中p-mTOR/mTOR、p-rp S6/rp S6的表達(dá)(p0.05),而對(duì)sham側(cè)無顯著影響。細(xì)胞實(shí)驗(yàn):1、C2C12細(xì)胞在馬血清饑餓分化處理以后細(xì)胞總抗氧化能力顯著下降(p0.05),細(xì)胞出現(xiàn)衰老特征。2、在維生素D的干預(yù)下C2C12細(xì)胞內(nèi)TNF-a蛋白的表達(dá)水平顯著下降(p0.05)。3、機(jī)械牽拉刺激和維生素D補(bǔ)充共同作用下C2C12細(xì)胞中PI3K的表達(dá)增強(qiáng),AKt、mTOR、p70s6k、rps6、e EF2、ERK1/2蛋白的磷酸化水平顯著升高(p0.05)。研究結(jié)論:維生素D補(bǔ)充進(jìn)一步增強(qiáng)了超負(fù)荷誘導(dǎo)的老年大鼠骨骼肌肥大效果�？赡艿臋C(jī)制是維生素D通過改善衰老肌細(xì)胞的炎癥因子水平,以及促進(jìn)老齡大鼠骨骼肌VDR的表達(dá)和蛋白質(zhì)合成相關(guān)信號(hào)蛋白的表達(dá)發(fā)揮了作用。
【學(xué)位授予單位】：上海體育學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R685;R591.44
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本文編號(hào)：1198233