本文關(guān)鍵詞：促紅細(xì)胞生成素對(duì)高糖誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

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【摘要】：目的：研究促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin, EPO)對(duì)高糖誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響,以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在其中的作用。方法：分離新生SD大鼠心肌細(xì)胞,采用α-actin抗體進(jìn)行免疫組化鑒定心肌細(xì)胞；培養(yǎng)心肌細(xì)胞72小時(shí)后用高糖誘導(dǎo)心肌細(xì)胞,以甘露醇組作為高滲對(duì)照,用不同濃度EPO(5U/ml、10U/ml、20U/ml、40U/ml)預(yù)處理心肌細(xì)胞48h后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率,選取EPO最佳干預(yù)濃度；并用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-苯基丁酸(4-phenylbutyrate acid,PBA)進(jìn)行干預(yù)來探討EPO抑制心肌細(xì)胞凋亡的相關(guān)機(jī)制：將實(shí)驗(yàn)分成五組即正常糖(NG)、高糖(HG)、4-苯基丁酸+高糖(PBA)、EPO+正常糖(EPO+NG)、EPO+高糖組(EPO+HG),流式細(xì)胞儀測(cè)各組凋亡率,用激光共聚焦顯微鏡分別檢測(cè)各組心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子的平均熒光強(qiáng)度,通過Real-time PCR檢測(cè)各組EPOR、GRP78.Serca2a的mRNA表達(dá)變化,Western Blotting檢測(cè)各組EPOR、GRP78、Serca2a的蛋白表達(dá)。結(jié)果：細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)后可見單個(gè)細(xì)胞自發(fā)性搏動(dòng),采用α-actin抗體免疫組化鑒定為心肌細(xì)胞。高糖誘導(dǎo)后心肌細(xì)胞凋亡率明顯高于正常糖組[(41.36±10.49)%vs(16.08±3.97)%,P0.05]; 5U/ml、10U/ml、20U/ml、 40U/ml EPO預(yù)處理高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞后,可見其凋亡率分別為(36.59±19.94)%,(29.63±16.4)%,(20.97±10.55)%及(24.08±8.30)%,選20U8ml的EPO作為最佳干預(yù)濃度。甘露醇組較正常糖組凋亡率無差異(P0.05),PBA組凋亡率較HG組降低(P0.05)。與NG組比較,HG組鈣離子熒光強(qiáng)度增強(qiáng)(P0.05),EPOR.Serca2a的mRNA及蛋白表達(dá)降低,GRP78mRNA及蛋白表達(dá)升高(P0.05),EPO+NG組鈣離子熒光強(qiáng)度,EPOR、Serca2a mRNA及GRP78mRNA及蛋白表達(dá)無差異(P0.05)；與HG組比較,PBA組和EPO+HG組鈣離子熒光強(qiáng)度降低,EPOR、Serca2a的mRNA及蛋白表達(dá)升高,GRP78mRNA及蛋白表達(dá)降低(P0.05); PBA組與EPO+HG組比較凋亡率,鈣離子熒光強(qiáng)度,EPOR、Serca2a mRNA及GRP78mRNA及蛋白表達(dá)無差異(P0.05)。結(jié)論：1.高糖可通過誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及鈣穩(wěn)態(tài)失衡引發(fā)心肌細(xì)胞凋亡；2.促紅細(xì)胞生成素能夠抑制高糖誘導(dǎo)心肌細(xì)胞的凋亡,其作用機(jī)制可能與抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān),通過抑制心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激增強(qiáng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣內(nèi)流蛋白表達(dá),維持細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡而降低心肌細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R542.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 馬寶新;李花;吳綏生;;促紅細(xì)胞生成素衍生物抗糖尿病大鼠心肌細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2015年01期

2 李夢(mèng);戴德哉;于鋒;戴茵;;糖尿病心肌病的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)病變機(jī)制及六味地黃湯的治療作用[J];中藥藥理與臨床;2013年02期

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本文編號(hào)：1194635