本文關(guān)鍵詞：TL1A活化滑膜成纖維細(xì)胞在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中作用的研究

  更多相關(guān)文章： 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 TL1A 滑膜成纖維細(xì)胞 IL-6 腫瘤壞死因子受體

【摘要】：目的:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是以滑膜增生為特點(diǎn),引起鄰近的軟骨組織和骨結(jié)構(gòu)進(jìn)行性破壞的慢性炎癥浸潤(rùn)的多發(fā)性關(guān)節(jié)炎�；檐浌枪┙o營(yíng)養(yǎng),為關(guān)節(jié)提供潤(rùn)滑液�；ひr里層由滑膜襯里層細(xì)胞構(gòu)成,滑膜襯里層細(xì)胞被稱為滑膜細(xì)胞,由巨噬細(xì)胞樣和成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)構(gòu)成。盡管T、B淋巴細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞都參與了RA的發(fā)病機(jī)制,但滑膜成纖維細(xì)胞在該疾病中發(fā)揮重要的作用�；ひr里中FLS分泌的多種細(xì)胞因子能夠加劇關(guān)節(jié)局部炎癥反應(yīng)導(dǎo)致軟骨組織受到侵蝕。既往研究表明,腫瘤壞死因子(TNF)與其相應(yīng)受體結(jié)合后能夠啟動(dòng)RA中炎癥的級(jí)聯(lián)反應(yīng),在組織損傷和骨質(zhì)破壞中發(fā)揮了重要作用。腫瘤壞死因子樣配體1A(TL1A)屬于腫瘤壞死因子超家族成員,有研究發(fā)現(xiàn),TL1A與RA的活動(dòng)度密切相關(guān)。TNF-α和IL-β刺激RA患者FLS能夠產(chǎn)生TL1A,TL1A與其受體DR3結(jié)合后能夠誘導(dǎo)多種炎癥因子的生成和釋放,從而放大炎癥效應(yīng)。目前,大部分關(guān)于TL1A在RA中的體外研究都是以T細(xì)胞為靶點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)TL1A刺激FLS后產(chǎn)生炎癥因子的檢測(cè)分析以及對(duì)TL1A作用于FLS的機(jī)制研究,進(jìn)一步探討RA中,TL1A在FLS中的作用,為TL1A在該疾病中的功能提供了一定的理論依據(jù)。方法:(1)收集RA患者以及健康對(duì)照血清,通過(guò)ELISA方法檢測(cè)血清中TL1A的表達(dá);(2)體外培養(yǎng)RA患者FLS,TL1A處理細(xì)胞后檢測(cè)細(xì)胞中相關(guān)炎癥因子m RNA的水平,ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基上清中的炎性因子濃度;(3)TL1A刺激細(xì)胞前,用信號(hào)通路抑制劑處理細(xì)胞,通過(guò)對(duì)刺激后產(chǎn)生炎性因子表達(dá)水平的檢測(cè),研究TL1A作用于FLS后所活化的信號(hào)通路;(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)FLS表面TL1A受體DR3,由于結(jié)果陰性,為證明TL1A如何作用于FLS,加入TNF受體拮抗劑處理細(xì)胞2小時(shí),隨后以TL1A刺激,通過(guò)對(duì)刺激后所產(chǎn)生的炎性因子表達(dá)水平的檢測(cè),研究TL1A與FLS作用的機(jī)制;(5)TL1A刺激FLS后棄去培養(yǎng)基洗凈殘留刺激劑,加入健康對(duì)照PBMC共培養(yǎng)3天,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Th17的分群情況;(6)蛋白芯片檢測(cè)3株經(jīng)TL1A處理48小時(shí)前后FLS培養(yǎng)基上清細(xì)胞因子水平,分析研究TL1A刺激FLS后所產(chǎn)生的細(xì)胞因子在RA中的用作。結(jié)果:(1)ELISA檢測(cè)RA組與正常對(duì)照組血清中TL1A表達(dá)水平,RA組TL1A水平顯著高于正常對(duì)照組(P0.05)。(2)應(yīng)用RT-PCR和ELISA檢測(cè)TL1A刺激FLS不同時(shí)間點(diǎn)(0,6,24,48 h)FLS產(chǎn)生炎性因子的表達(dá)情況。TL1A刺激FLS 6h后提取m RNA,RT-PCR結(jié)果顯示刺激后IL-6和PGE2表達(dá)水平顯著升高(P0.05),ELISA檢測(cè)IL-6表達(dá)水平結(jié)果顯示隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng),IL-6水平逐漸升高以48h最為顯著(P0.05),PGE2的水平并未隨時(shí)間延長(zhǎng)表現(xiàn)明顯趨勢(shì),TL1A刺激組相較于未處理其水平都顯著升高(P0.05)。(3)在分別加入NF-κB、JNK抑制劑組中,TL1A刺激FLS產(chǎn)生IL-6水平相比未加入抑制劑直接刺激組顯著降低(P0.05)。TL1A刺激后FLS產(chǎn)生IL-6需通過(guò)NF-κB以及JNK的活化。(4)FLS中未能檢測(cè)到DR3的表達(dá)。(5)拮抗TNF受體1、2后加入TL1A刺激,結(jié)果顯示拮抗TNFR2后IL-6和PGE2水平顯著降低(P0.05)。TL1A能夠與FLS表面的TNFR2結(jié)合發(fā)揮作用。(6)PBMC與TL1A刺激后的FLS共培養(yǎng),PBMC中Th17比例顯著上升(P0.05)。(7)TL1A刺激FLS后培養(yǎng)基中大量趨化因子因子及生長(zhǎng)因子水平升高。結(jié)論:(1)TL1A促進(jìn)RA FLS產(chǎn)生IL-6通過(guò)NF-κB和JNK的激活。(2)TL1A通過(guò)與TNFR2結(jié)合作用于FLS促進(jìn)IL-6的分泌。(3)TL1A促進(jìn)RA FLS產(chǎn)生IL-6進(jìn)一步上調(diào)Th17。
【關(guān)鍵詞】：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 TL1A 滑膜成纖維細(xì)胞 IL-6 腫瘤壞死因子受體
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R593.22
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-23
• 1. 材料14-16
• 1.1 實(shí)驗(yàn)儀器14
• 1.2 主要試劑14-15
• 1.3 試驗(yàn)用主要試劑的配制15-16
• 1.4 其他試劑及材料16
• 2. 方法16-22
• 2.1 RA患者外周血血清的提取16
• 2.2 外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離16-17
• 2.3 滑膜成纖維細(xì)胞的提取17
• 2.4 細(xì)胞培養(yǎng)17-18
• 2.5 細(xì)胞處理18-19
• 2.6 RA-PCR檢測(cè)19-20
• 2.7 ELISA檢測(cè)培養(yǎng)液中炎性因子水平20-21
• 2.8 流式檢測(cè)21-22
• 2.9 蛋白芯片分析22
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22-23
• 結(jié)果23-32
• 1. RA患者血清中TL1A水平增高23-24
• 2. TL1A刺激RA FLS分泌IL-6 和PGE224-26
• 3. TL1A通過(guò)NFκB、JNK信號(hào)通路刺激RA FLS促進(jìn)IL-6分泌26-27
• 4. RA FLS中不表達(dá)DR327
• 5. TL1A與TNFR2結(jié)合作用于RA FLS促進(jìn)IL-6 分泌27-28
• 6. TL1A促進(jìn)RA FLS分泌IL-6 上調(diào)PBMC中Th17比例28-29
• 7. 蛋白芯片分析29-32
• 討論32-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-43
• 綜述43-54
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況54-55
• 致謝55-56

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本文編號(hào)：1124552