本文關(guān)鍵詞：TL1A活化滑膜成纖維細胞在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制中作用的研究

  更多相關(guān)文章： 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 TL1A 滑膜成纖維細胞 IL-6 腫瘤壞死因子受體

【摘要】：目的:類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是以滑膜增生為特點,引起鄰近的軟骨組織和骨結(jié)構(gòu)進行性破壞的慢性炎癥浸潤的多發(fā)性關(guān)節(jié)炎。滑膜為軟骨供給營養(yǎng),為關(guān)節(jié)提供潤滑液。滑膜襯里層由滑膜襯里層細胞構(gòu)成,滑膜襯里層細胞被稱為滑膜細胞,由巨噬細胞樣和成纖維細胞樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)構(gòu)成。盡管T、B淋巴細胞以及巨噬細胞都參與了RA的發(fā)病機制,但滑膜成纖維細胞在該疾病中發(fā)揮重要的作用。滑膜襯里中FLS分泌的多種細胞因子能夠加劇關(guān)節(jié)局部炎癥反應(yīng)導(dǎo)致軟骨組織受到侵蝕。既往研究表明,腫瘤壞死因子(TNF)與其相應(yīng)受體結(jié)合后能夠啟動RA中炎癥的級聯(lián)反應(yīng),在組織損傷和骨質(zhì)破壞中發(fā)揮了重要作用。腫瘤壞死因子樣配體1A(TL1A)屬于腫瘤壞死因子超家族成員,有研究發(fā)現(xiàn),TL1A與RA的活動度密切相關(guān)。TNF-α和IL-β刺激RA患者FLS能夠產(chǎn)生TL1A,TL1A與其受體DR3結(jié)合后能夠誘導(dǎo)多種炎癥因子的生成和釋放,從而放大炎癥效應(yīng)。目前,大部分關(guān)于TL1A在RA中的體外研究都是以T細胞為靶點。本實驗通過對TL1A刺激FLS后產(chǎn)生炎癥因子的檢測分析以及對TL1A作用于FLS的機制研究,進一步探討RA中,TL1A在FLS中的作用,為TL1A在該疾病中的功能提供了一定的理論依據(jù)。方法:(1)收集RA患者以及健康對照血清,通過ELISA方法檢測血清中TL1A的表達;(2)體外培養(yǎng)RA患者FLS,TL1A處理細胞后檢測細胞中相關(guān)炎癥因子m RNA的水平,ELISA檢測細胞培養(yǎng)基上清中的炎性因子濃度;(3)TL1A刺激細胞前,用信號通路抑制劑處理細胞,通過對刺激后產(chǎn)生炎性因子表達水平的檢測,研究TL1A作用于FLS后所活化的信號通路;(4)流式細胞術(shù)檢測FLS表面TL1A受體DR3,由于結(jié)果陰性,為證明TL1A如何作用于FLS,加入TNF受體拮抗劑處理細胞2小時,隨后以TL1A刺激,通過對刺激后所產(chǎn)生的炎性因子表達水平的檢測,研究TL1A與FLS作用的機制;(5)TL1A刺激FLS后棄去培養(yǎng)基洗凈殘留刺激劑,加入健康對照PBMC共培養(yǎng)3天,流式細胞術(shù)檢測Th17的分群情況;(6)蛋白芯片檢測3株經(jīng)TL1A處理48小時前后FLS培養(yǎng)基上清細胞因子水平,分析研究TL1A刺激FLS后所產(chǎn)生的細胞因子在RA中的用作。結(jié)果:(1)ELISA檢測RA組與正常對照組血清中TL1A表達水平,RA組TL1A水平顯著高于正常對照組(P0.05)。(2)應(yīng)用RT-PCR和ELISA檢測TL1A刺激FLS不同時間點(0,6,24,48 h)FLS產(chǎn)生炎性因子的表達情況。TL1A刺激FLS 6h后提取m RNA,RT-PCR結(jié)果顯示刺激后IL-6和PGE2表達水平顯著升高(P0.05),ELISA檢測IL-6表達水平結(jié)果顯示隨著刺激時間的延長,IL-6水平逐漸升高以48h最為顯著(P0.05),PGE2的水平并未隨時間延長表現(xiàn)明顯趨勢,TL1A刺激組相較于未處理其水平都顯著升高(P0.05)。(3)在分別加入NF-κB、JNK抑制劑組中,TL1A刺激FLS產(chǎn)生IL-6水平相比未加入抑制劑直接刺激組顯著降低(P0.05)。TL1A刺激后FLS產(chǎn)生IL-6需通過NF-κB以及JNK的活化。(4)FLS中未能檢測到DR3的表達。(5)拮抗TNF受體1、2后加入TL1A刺激,結(jié)果顯示拮抗TNFR2后IL-6和PGE2水平顯著降低(P0.05)。TL1A能夠與FLS表面的TNFR2結(jié)合發(fā)揮作用。(6)PBMC與TL1A刺激后的FLS共培養(yǎng),PBMC中Th17比例顯著上升(P0.05)。(7)TL1A刺激FLS后培養(yǎng)基中大量趨化因子因子及生長因子水平升高。結(jié)論:(1)TL1A促進RA FLS產(chǎn)生IL-6通過NF-κB和JNK的激活。(2)TL1A通過與TNFR2結(jié)合作用于FLS促進IL-6的分泌。(3)TL1A促進RA FLS產(chǎn)生IL-6進一步上調(diào)Th17。
【關(guān)鍵詞】：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 TL1A 滑膜成纖維細胞 IL-6 腫瘤壞死因子受體
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R593.22
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-23
• 1. 材料14-16
• 1.1 實驗儀器14
• 1.2 主要試劑14-15
• 1.3 試驗用主要試劑的配制15-16
• 1.4 其他試劑及材料16
• 2. 方法16-22
• 2.1 RA患者外周血血清的提取16
• 2.2 外周血單個核細胞的分離16-17
• 2.3 滑膜成纖維細胞的提取17
• 2.4 細胞培養(yǎng)17-18
• 2.5 細胞處理18-19
• 2.6 RA-PCR檢測19-20
• 2.7 ELISA檢測培養(yǎng)液中炎性因子水平20-21
• 2.8 流式檢測21-22
• 2.9 蛋白芯片分析22
• 3. 統(tǒng)計學(xué)分析22-23
• 結(jié)果23-32
• 1. RA患者血清中TL1A水平增高23-24
• 2. TL1A刺激RA FLS分泌IL-6 和PGE224-26
• 3. TL1A通過NFκB、JNK信號通路刺激RA FLS促進IL-6分泌26-27
• 4. RA FLS中不表達DR327
• 5. TL1A與TNFR2結(jié)合作用于RA FLS促進IL-6 分泌27-28
• 6. TL1A促進RA FLS分泌IL-6 上調(diào)PBMC中Th17比例28-29
• 7. 蛋白芯片分析29-32
• 討論32-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-43
• 綜述43-54
• 參考文獻49-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況54-55
• 致謝55-56

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 奚正德,李寧麗,張雁云,張冬青,臧敬五;滑膜成纖維細胞在關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用[J];自然雜志;2004年04期

2 肖楚吟;潘云峰;郭興華;蔡道章;;滑膜成纖維細胞的原代培養(yǎng)及生物特性[J];中國醫(yī)學(xué)工程;2010年02期

3 丁娟;王志軍;董曉薇;張淑雅;蘆曉紅;趙薇;;RA滑膜成纖維細胞的原代培養(yǎng)及鑒定[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2012年36期

4 周振華;徐衛(wèi)東;吳岳嵩;;滑膜成纖維細胞與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)研究的進展[J];中華關(guān)節(jié)外科雜志(電子版);2008年06期

5 柏干蘋;周麗娜;賀偉峰;羅高興;陳烯偉;易紹萱;胡曉紅;石東文;陳光興;方勇飛;吳軍;;人骨關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞差異蛋白質(zhì)譜初步分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年11期

6 柯慶喜;張志偉;趙付前;何玲鴿;陳章權(quán);;腫瘤壞死因子-α對人滑膜成纖維細胞白細胞介素-37表達的影響[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2013年05期

7 柏干蘋;周麗娜;賀偉峰;羅高興;陳烯偉;陳光興;胡曉紅;石東文;方勇飛;吳軍;;S100A4,A10在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞中的表達及意義[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年07期

8 侯亞楠;郭禮和;;滑膜成纖維細胞在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的作用[J];細胞生物學(xué)雜志;2009年02期

9 姜林娣;王漢洲;郭津生;趙鳳娣;薛如意;王吉耀;;RNA干擾技術(shù)抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維細胞COX-2合成[J];復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年02期

10 柏干蘋;周麗娜;賀偉峰;羅高興;陳烯偉;陳光興;胡曉紅;石東文;方勇飛;吳軍;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜成纖維細胞的差異蛋白質(zhì)譜分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔡恒星;李穎杰;龍星;;不同濃度透明質(zhì)酸對滑膜成纖維細胞粘附和增殖的影響[A];第八屆全國顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會論文匯編[C];2011年

2 聶英坤;于慧敏;張鳳山;;紫草素對RA滑膜成纖維細胞COX-2表達的影響[A];全國第八屆中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 賈俊峰;朱平;;滑膜成纖維細胞骨侵蝕體外培養(yǎng)體系的建立及應(yīng)用[A];第17次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

4 聶英坤;于慧敏;王振宇;;紫草素對RA滑膜成纖維細胞COX-2表達的影響[A];全國第十一屆中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

5 吳振彪;朱平;盧寧;史戰(zhàn)國;樊春梅;王彥宏;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜成纖維細胞與單核細胞混合培養(yǎng)后基質(zhì)金屬蛋白酶合成能力[A];第十屆全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2005年

6 舒強;李興福;侯懷水;李棟;劉花香;;艾拉莫德對關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞特性的影響[A];全國自身免疫性疾病專題研討會暨第十一次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

7 張麗君;李博;謝燕;張春容;何偉珍;徐珊;葉志中;莊俊漢;;IL-1β對滑膜成纖維細胞炎癥因子表達的影響[A];2009中國中西醫(yī)結(jié)合系統(tǒng)性紅斑狼瘡研究學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2009年

8 李茹;張曉蘋;王世瑤;穆榮;栗占國;;miR-146a對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜成纖維細胞的抑制作用研究[A];全國臨床免疫檢驗研討會暨第六屆全國臨床免疫學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

9 趙文君;崔爽爽;邢國勝;于順祿;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞對T淋巴細胞生物學(xué)行為的干預(yù)作用[A];第十九屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2012年

10 鄭一寧;梅軼芳;李宏穎;魏雪敏;韓玉艷;于惠銘;張志毅;;三氧化二砷調(diào)控類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞促血管生成作用的分子機制[A];第17次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 張艷君;交叉韌帶損傷后滑膜成纖維細胞中賴氨酰氧化酶和基質(zhì)金屬蛋白酶表達的研究[D];重慶大學(xué);2013年

2 姜林娣;RNA干擾抑制COX-2合成以及對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑成纖維細胞生物學(xué)活性的影響研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

3 王建光;類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

4 張婷;p53在滑膜成纖維細胞炎癥和增生中的作用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

5 柏干蘋;正常人與關(guān)節(jié)炎患者血漿、滑膜細胞的差異蛋白質(zhì)組分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 竇鵬程;四種藥物對骨關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞分泌IL-1β、MMP-13、PGE2的影響[D];中南大學(xué);2012年

7 朱寶玉;滑膜成纖維細胞中促炎因子IL-6、VEGF影響骨關(guān)節(jié)炎病情進展的實驗研究[D];中南大學(xué);2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王菁;C反應(yīng)蛋白在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用機制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 孔靜靜;TLR4對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑膜成纖維細胞分泌IL-1β、TNF-α的影響[D];山東大學(xué);2015年

3 趙曉峰;三水白虎湯抑制滑膜成纖維細胞遷移的體外研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

4 藺娜;脂聯(lián)素對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞遷移及侵襲特性影響的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

5 李炳彤;脂聯(lián)素亞型及濃度對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞促炎作用的影響[D];吉林大學(xué);2016年

6 任麗麗;10-羥基喜樹堿對RA滑膜成纖維細胞的抑制作用[D];鄭州大學(xué);2016年

7 高皖皎;扁蒴藤素抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞增殖及其機制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

8 馬梓健;TL1A活化滑膜成纖維細胞在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機制中作用的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2016年

9 許永權(quán);骨性關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因MCF2L與滑膜成纖維細胞凋亡及炎癥反應(yīng)的關(guān)系研究[D];中南大學(xué);2014年

10 陳巖;HMGB1-LPS復(fù)合物促進滑膜成纖維細胞向類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞表型的轉(zhuǎn)變[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

，

本文編號：1124552