本文關(guān)鍵詞：10-羥基喜樹(shù)堿對(duì)RA滑膜成纖維細(xì)胞的抑制作用

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【摘要】：背景及目的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,R.A)是一種慢性的炎癥性疾病,以滑膜異常增殖、關(guān)節(jié)破壞及滑膜免疫細(xì)胞浸潤(rùn)為主要特征,包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞等。該病主要表現(xiàn)在關(guān)節(jié)受累上,最終可造成關(guān)節(jié)破壞、畸形,肢體活動(dòng)障礙,為家庭及社會(huì)增加了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和心理負(fù)擔(dān)。故早期的發(fā)現(xiàn)并及時(shí)的治療、控制疾病的進(jìn)展,成為重中之重。人類經(jīng)過(guò)多年對(duì)RA臨床表現(xiàn)的了解,及對(duì)其發(fā)病機(jī)制的探索,明白了RA具有類似于“局部惡性腫瘤”的增生性和破壞性的特點(diǎn),T淋巴細(xì)胞、滑膜成纖維細(xì)胞(Fibroblast-like Synoviocytes,FLS)異常的增殖這一特點(diǎn)是這一病變根本。盡管對(duì)該病的發(fā)病機(jī)理有了一定的了解,仍不能滿足目前的醫(yī)療需求。長(zhǎng)期以來(lái),甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)主要作為RA治療的首選藥物,但一部分患者不能耐受MTX,因其具有明顯的胃腸道反應(yīng)(如惡心、嘔吐)、肝功能損害、骨髓抑制等,給RA的治療帶來(lái)了困難。因此非常有必要尋找一種有效的、經(jīng)濟(jì)的、毒副作用小的藥物來(lái)替代MTX,亦或是與其作用相當(dāng)。10-羥基喜樹(shù)堿(10-Hydroxycamptot.hecine,10-HCPT)是一種普遍應(yīng)用于多種惡性腫瘤的抗腫瘤藥物。經(jīng)臨床驗(yàn)證,效果較為明確,毒副作用較少。我們前期從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及體外實(shí)驗(yàn)兩方面均證實(shí),在RA中,10-HCPT對(duì)T淋.巴細(xì)胞的功能具有明顯的抑制作用。從抑制細(xì)胞增殖方面來(lái)說(shuō),10-HCPT或許可以成為治療RA的藥物。本研究從FLSs方面著手,探討10-HCPT對(duì)體外培養(yǎng)的FLSs增殖及功能的抑制作用,.為10-HCPT成為治療RA的有效藥物提供理論基礎(chǔ)。方法1.收集北京大學(xué)人民醫(yī)院行關(guān)節(jié)置換術(shù)或滑膜切除術(shù)的RA患者的關(guān)節(jié)滑膜組織,進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。2.分組:分別用不同濃度10-HCPT、MTX處理細(xì)胞,采用MTX作為陽(yáng)性對(duì)照組,不加藥物組作為空白對(duì)照組。3.檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制情況采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法。設(shè)置不同的時(shí)間梯度、不同濃度梯度,對(duì)比10-HCPT與MTX抑制FLSs增殖的情況。4.檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況采用流式細(xì)胞術(shù)法。不同的時(shí)間梯度、不同濃度梯度,對(duì)比10-HCPT與MTX對(duì)FLSs誘導(dǎo)凋亡的情況。5.酶聯(lián)免疫吸附方法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)不同的作用時(shí)間,不同濃度的FLSs分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平。6.逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)檢測(cè)不同的作用時(shí)間,不同濃度的FLSs表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶3-m RNA(matrix metalloproteinase,MMP3;Messenger Ribonucleic Acid,m RNA)的水平。7.應(yīng)用SPSS16.0、Flowjo軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果1.10-HCPT可明顯抑制RA-FLSs的增殖,其抑制作用與MTX作用相當(dāng)(劑量0.1μɡ/ml、1.0μɡ/ml,作用時(shí)間24h,P0.05)。與MTX相比,隨著劑量的增大(5.0μɡ/ml、10.0μɡ/ml),作用時(shí)間的延長(zhǎng)(48h、72h),10-HCPT的抑制作用更強(qiáng)(P0.05)。2.10-HCPT具有較MTX更強(qiáng)的誘導(dǎo)FLSs凋亡的作用,隨著劑量增大,誘導(dǎo)凋亡作用隨之增強(qiáng)(P0.05)。3.用不同濃度10-HCPT及MTX處理FLSs后,VEGF表達(dá)量高低不同。與空白對(duì)照組相比,10-HCPT高、低濃度組VEGF表達(dá)量均顯著降低(P0.05),MTX高、低濃度組則無(wú)明顯差異(P0.05)。10-HCPT高、低濃度組與MTX低濃度組比較,VEGF表達(dá)量顯著降低(P0.05)。10-HCPT高濃度組與MTX高濃度組比較,VEGF表達(dá)量顯著降低(P0.05)。4.與空白對(duì)照組比較,不同濃度的10-HCPT及MTX組,MMP3 m RNA表達(dá)水平均降低。其中兩種藥物的高濃度組與對(duì)照組比較,MMP3 m RNA表達(dá)顯著降低(P0.01)。與10-HCPT低濃度組比較,10-HCPT及MTX高濃度組MMP3m RNA表達(dá)均降低(P0.01)。結(jié)論1.10-HCPT具有顯著的抑制FLSs增殖、誘導(dǎo)其凋亡、抑制細(xì)胞分泌VEGF、抑制細(xì)胞表達(dá)MMP3 m RNA的作用。2.10-HCPT在RA治療方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：10-羥基喜樹(shù)堿 甲氨蝶呤 RA 滑膜成纖維細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R593.22
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 中英文縮略詞對(duì)照表11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-18
• 結(jié)果18-25
• 討論25-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 綜述 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制及生物制劑的研究進(jìn)展34-54
• 參考文獻(xiàn)46-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷54-55
• 致謝55-56

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1 奚正德,李寧麗,張雁云,張冬青,臧敬五;滑膜成纖維細(xì)胞在關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用[J];自然雜志;2004年04期

2 肖楚吟;潘云峰;郭興華;蔡道章;;滑膜成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)及生物特性[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)工程;2010年02期

3 丁娟;王志軍;董曉薇;張淑雅;蘆曉紅;趙薇;;RA滑膜成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年36期

4 周振華;徐衛(wèi)東;吳岳嵩;;滑膜成纖維細(xì)胞與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)研究的進(jìn)展[J];中華關(guān)節(jié)外科雜志(電子版);2008年06期

5 柏干蘋;周麗娜;賀偉峰;羅高興;陳烯偉;易紹萱;胡曉紅;石東文;陳光興;方勇飛;吳軍;;人骨關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞差異蛋白質(zhì)譜初步分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年11期

6 柯慶喜;張志偉;趙付前;何玲鴿;陳章權(quán);;腫瘤壞死因子-α對(duì)人滑膜成纖維細(xì)胞白細(xì)胞介素-37表達(dá)的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2013年05期

7 柏干蘋;周麗娜;賀偉峰;羅高興;陳烯偉;陳光興;胡曉紅;石東文;方勇飛;吳軍;;S100A4,A10在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年07期

8 侯亞楠;郭禮和;;滑膜成纖維細(xì)胞在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的作用[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2009年02期

9 姜林娣;王漢洲;郭津生;趙鳳娣;薛如意;王吉耀;;RNA干擾技術(shù)抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維細(xì)胞COX-2合成[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年02期

10 柏干蘋;周麗娜;賀偉峰;羅高興;陳烯偉;陳光興;胡曉紅;石東文;方勇飛;吳軍;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜成纖維細(xì)胞的差異蛋白質(zhì)譜分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔡恒星;李穎杰;龍星;;不同濃度透明質(zhì)酸對(duì)滑膜成纖維細(xì)胞粘附和增殖的影響[A];第八屆全國(guó)顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2011年

2 聶英坤;于慧敏;張鳳山;;紫草素對(duì)RA滑膜成纖維細(xì)胞COX-2表達(dá)的影響[A];全國(guó)第八屆中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

3 賈俊峰;朱平;;滑膜成纖維細(xì)胞骨侵蝕體外培養(yǎng)體系的建立及應(yīng)用[A];第17次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

4 聶英坤;于慧敏;王振宇;;紫草素對(duì)RA滑膜成纖維細(xì)胞COX-2表達(dá)的影響[A];全國(guó)第十一屆中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

5 吳振彪;朱平;盧寧;史戰(zhàn)國(guó);樊春梅;王彥宏;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜成纖維細(xì)胞與單核細(xì)胞混合培養(yǎng)后基質(zhì)金屬蛋白酶合成能力[A];第十屆全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

6 舒強(qiáng);李興福;侯懷水;李棟;劉花香;;艾拉莫德對(duì)關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞特性的影響[A];全國(guó)自身免疫性疾病專題研討會(huì)暨第十一次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

7 張麗君;李博;謝燕;張春容;何偉珍;徐珊;葉志中;莊俊漢;;IL-1β對(duì)滑膜成纖維細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響[A];2009中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合系統(tǒng)性紅斑狼瘡研究學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2009年

8 李茹;張曉蘋;王世瑤;穆榮;栗占國(guó);;miR-146a對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜成纖維細(xì)胞的抑制作用研究[A];全國(guó)臨床免疫檢驗(yàn)研討會(huì)暨第六屆全國(guó)臨床免疫學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

9 趙文君;崔爽爽;邢國(guó)勝;于順祿;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞生物學(xué)行為的干預(yù)作用[A];第十九屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2012年

10 鄭一寧;梅軼芳;李宏穎;魏雪敏;韓玉艷;于惠銘;張志毅;;三氧化二砷調(diào)控類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞促血管生成作用的分子機(jī)制[A];第17次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 張艷君;交叉韌帶損傷后滑膜成纖維細(xì)胞中賴氨酰氧化酶和基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的研究[D];重慶大學(xué);2013年

2 姜林娣;RNA干擾抑制COX-2合成以及對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑成纖維細(xì)胞生物學(xué)活性的影響研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

3 王建光;類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

4 張婷;p53在滑膜成纖維細(xì)胞炎癥和增生中的作用[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

5 柏干蘋;正常人與關(guān)節(jié)炎患者血漿、滑膜細(xì)胞的差異蛋白質(zhì)組分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

6 竇鵬程;四種藥物對(duì)骨關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞分泌IL-1β、MMP-13、PGE2的影響[D];中南大學(xué);2012年

7 朱寶玉;滑膜成纖維細(xì)胞中促炎因子IL-6、VEGF影響骨關(guān)節(jié)炎病情進(jìn)展的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2009年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李炳彤;脂聯(lián)素亞型及濃度對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞促炎作用的影響[D];吉林大學(xué);2016年

2 任麗麗;10-羥基喜樹(shù)堿對(duì)RA滑膜成纖維細(xì)胞的抑制作用[D];鄭州大學(xué);2016年

3 高皖皎;扁蒴藤素抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞增殖及其機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

4 趙曉峰;三水白虎湯抑制滑膜成纖維細(xì)胞遷移的體外研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

5 許永權(quán);骨性關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因MCF2L與滑膜成纖維細(xì)胞凋亡及炎癥反應(yīng)的關(guān)系研究[D];中南大學(xué);2014年

6 陳巖;HMGB1-LPS復(fù)合物促進(jìn)滑膜成纖維細(xì)胞向類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞表型的轉(zhuǎn)變[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 唐福興;TLR4/NF-κB信號(hào)通路對(duì)人膝骨關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞骨橋蛋白表達(dá)的影響[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2014年

8 王菁;C反應(yīng)蛋白在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病中的作用機(jī)制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

9 賀t$雯;HMGB1與LPS協(xié)同激活類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶的分子機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 孔靜靜;TLR4對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的大鼠顳下頜關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞分泌IL-1β、TNF-α的影響[D];山東大學(xué);2015年

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