發(fā)布時間：2017-10-31 17:20

  本文關鍵詞：10-羥基喜樹堿對RA滑膜成纖維細胞的抑制作用

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【摘要】：背景及目的類風濕關節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,R.A)是一種慢性的炎癥性疾病,以滑膜異常增殖、關節(jié)破壞及滑膜免疫細胞浸潤為主要特征,包括淋巴細胞、巨噬細胞、樹突細胞等。該病主要表現在關節(jié)受累上,最終可造成關節(jié)破壞、畸形,肢體活動障礙,為家庭及社會增加了沉重的經濟負擔和心理負擔。故早期的發(fā)現并及時的治療、控制疾病的進展,成為重中之重。人類經過多年對RA臨床表現的了解,及對其發(fā)病機制的探索,明白了RA具有類似于“局部惡性腫瘤”的增生性和破壞性的特點,T淋巴細胞、滑膜成纖維細胞(Fibroblast-like Synoviocytes,FLS)異常的增殖這一特點是這一病變根本。盡管對該病的發(fā)病機理有了一定的了解,仍不能滿足目前的醫(yī)療需求。長期以來,甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)主要作為RA治療的首選藥物,但一部分患者不能耐受MTX,因其具有明顯的胃腸道反應(如惡心、嘔吐)、肝功能損害、骨髓抑制等,給RA的治療帶來了困難。因此非常有必要尋找一種有效的、經濟的、毒副作用小的藥物來替代MTX,亦或是與其作用相當。10-羥基喜樹堿(10-Hydroxycamptot.hecine,10-HCPT)是一種普遍應用于多種惡性腫瘤的抗腫瘤藥物。經臨床驗證,效果較為明確,毒副作用較少。我們前期從動物實驗及體外實驗兩方面均證實,在RA中,10-HCPT對T淋.巴細胞的功能具有明顯的抑制作用。從抑制細胞增殖方面來說,10-HCPT或許可以成為治療RA的藥物。本研究從FLSs方面著手,探討10-HCPT對體外培養(yǎng)的FLSs增殖及功能的抑制作用,.為10-HCPT成為治療RA的有效藥物提供理論基礎。方法1.收集北京大學人民醫(yī)院行關節(jié)置換術或滑膜切除術的RA患者的關節(jié)滑膜組織,進行細胞培養(yǎng)。2.分組:分別用不同濃度10-HCPT、MTX處理細胞,采用MTX作為陽性對照組,不加藥物組作為空白對照組。3.檢測細胞增殖抑制情況采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法。設置不同的時間梯度、不同濃度梯度,對比10-HCPT與MTX抑制FLSs增殖的情況。4.檢測細胞凋亡情況采用流式細胞術法。不同的時間梯度、不同濃度梯度,對比10-HCPT與MTX對FLSs誘導凋亡的情況。5.酶聯(lián)免疫吸附方法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測不同的作用時間,不同濃度的FLSs分泌血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平。6.逆轉錄聚合酶鏈法(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)檢測不同的作用時間,不同濃度的FLSs表達基質金屬蛋白酶3-m RNA(matrix metalloproteinase,MMP3;Messenger Ribonucleic Acid,m RNA)的水平。7.應用SPSS16.0、Flowjo軟件進行統(tǒng)計分析。結果1.10-HCPT可明顯抑制RA-FLSs的增殖,其抑制作用與MTX作用相當(劑量0.1μɡ/ml、1.0μɡ/ml,作用時間24h,P0.05)。與MTX相比,隨著劑量的增大(5.0μɡ/ml、10.0μɡ/ml),作用時間的延長(48h、72h),10-HCPT的抑制作用更強(P0.05)。2.10-HCPT具有較MTX更強的誘導FLSs凋亡的作用,隨著劑量增大,誘導凋亡作用隨之增強(P0.05)。3.用不同濃度10-HCPT及MTX處理FLSs后,VEGF表達量高低不同。與空白對照組相比,10-HCPT高、低濃度組VEGF表達量均顯著降低(P0.05),MTX高、低濃度組則無明顯差異(P0.05)。10-HCPT高、低濃度組與MTX低濃度組比較,VEGF表達量顯著降低(P0.05)。10-HCPT高濃度組與MTX高濃度組比較,VEGF表達量顯著降低(P0.05)。4.與空白對照組比較,不同濃度的10-HCPT及MTX組,MMP3 m RNA表達水平均降低。其中兩種藥物的高濃度組與對照組比較,MMP3 m RNA表達顯著降低(P0.01)。與10-HCPT低濃度組比較,10-HCPT及MTX高濃度組MMP3m RNA表達均降低(P0.01)。結論1.10-HCPT具有顯著的抑制FLSs增殖、誘導其凋亡、抑制細胞分泌VEGF、抑制細胞表達MMP3 m RNA的作用。2.10-HCPT在RA治療方面具有潛在的應用價值。
【關鍵詞】：10-羥基喜樹堿 甲氨蝶呤 RA 滑膜成纖維細胞
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R593.22
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 中英文縮略詞對照表11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-18
• 結果18-25
• 討論25-29
• 結論29-30
• 參考文獻30-34
• 綜述 類風濕關節(jié)炎發(fā)病機制及生物制劑的研究進展34-54
• 參考文獻46-54
• 個人簡歷54-55
• 致謝55-56

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