發(fā)布時間：2017-10-28 03:22

  本文關(guān)鍵詞：家蠶高蛋白血癥對脂肪體重塑及其功能的影響

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【摘要】：高蛋白血癥是臨床常見的嚴重代謝疾病。由于缺乏可靠的高蛋白血癥動物模型,相關(guān)發(fā)病機制探究還有諸多不明之處。本實驗室利用無脊椎模式動物家蠶構(gòu)建了高蛋白血癥疾病模型,發(fā)現(xiàn)了疾病模型家蠶的幼蟲-蛹變態(tài)期的出現(xiàn)了脂肪體重塑與生理功能障礙,為此,本文研究了高蛋白血癥影響家蠶脂肪體重塑的機制及其生理功能的影響。結(jié)果如下:1高蛋白血癥引起變態(tài)期家蠶脂肪體重塑異常本實驗室構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因突變體TBH家蠶是一個能夠正常繼代的輕癥高蛋白血癥遺傳品系,其后部絲腺合成的絲蛋白質(zhì)不能正常分泌至體外,導(dǎo)致幼蟲-蛹變態(tài)期絲腺退化釋放更多的蛋白至血淋巴,在蛹期出現(xiàn)1周左右的血淋巴蛋白濃度極度升高。我們另一種快速建立重癥高蛋白血癥家蠶(簡記為疾病模型,AM)的方法是在成熟幼蟲停止進食后,用低熔點石蠟封堵家蠶的吐絲孔,阻止其絲腺中儲存蛋白質(zhì)向體外分泌,導(dǎo)致整個蛹期血淋巴蛋白濃度一直維持在極高水平,并出現(xiàn)高致死現(xiàn)象。脂肪體活體形態(tài)觀察和細胞膜染色,以及組織切片染色結(jié)果顯示,輕癥TBH家蠶脂肪體開始解離較野生型提前,解離和重塑過程延長;重癥AM家蠶脂肪體開始解離時間較對照遲,解離過程顯著延長,重塑困難。qRT-PCR調(diào)查脂肪體重塑相關(guān)基因BmAtg6、BmAtg8和BmDronc的表達,發(fā)現(xiàn)在兩種模型家蠶的變態(tài)期脂肪體中,這3個基因的表達水平均顯著低于對照組。進一步的細胞溶酶體染色及細胞核DAPI染色實驗結(jié)果表明,兩種高蛋白血癥家蠶的脂肪體細胞出現(xiàn)了一定程度的自噬和凋亡障礙。2高蛋白血癥影響了變態(tài)期家蠶脂肪體生理功能HPLC測定結(jié)果顯示,高蛋白血癥家蠶脂肪體中多種游離氨基酸的含量出現(xiàn)了顯著變化,氨基酸轉(zhuǎn)化代謝相關(guān)的GPT、GOT酶活性也出現(xiàn)了異常。細胞氧化應(yīng)激水平調(diào)查結(jié)果顯示,高蛋白血癥家蠶脂肪體中ROS增多,催化ROS轉(zhuǎn)化為過氧化氫的SOD活性和分解過氧化氫的CAT活性,以及GST活性都顯著升高。變態(tài)期脂肪體合成Vg的水平調(diào)查結(jié)果顯示,高蛋白血癥家蠶脂肪體中的Vg基因轉(zhuǎn)錄水平顯著低于對照,暗示雌性生殖發(fā)育必需的Vg蛋白合成出現(xiàn)障礙;進一步的卵巢發(fā)育觀察結(jié)果顯示,高蛋白血癥家蠶的卵巢重量及性腺系數(shù)均顯著低于對照。TBH家蠶的成蟲以及輕癥AM家蠶(吐絲6 h后封堵吐絲孔)成蟲的產(chǎn)卵數(shù)減少,不受精卵增多。
【關(guān)鍵詞】：高蛋白血癥 疾病模型 脂肪體重塑 生理功能 生殖
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 文獻綜述11-26
• 1 高蛋白血癥及其動物模型11-15
• 1.1 高蛋白血癥11-12
• 1.2 高蛋白血癥動物模型12-15
• 2 家蠶脂肪體及其生理功能15-19
• 2.1 家蠶脂肪體抗氧化應(yīng)激相關(guān)物質(zhì)15-17
• 2.2 家蠶脂肪體組織內(nèi)氨基酸轉(zhuǎn)化代謝相關(guān)酶類17-18
• 2.3 家蠶脂肪體的卵黃原蛋白合成與轉(zhuǎn)運18-19
• 3 家蠶脂肪體的重塑19-26
• 3.1 家蠶脂肪體組織的解離20-22
• 3.2 家蠶脂肪體細胞的程序性死亡22-25
• 3.3 家蠶脂肪體細胞的分化及組織再生25-26
• 第二章 研究內(nèi)容與方法26-47
• 1 研究目的和意義26
• 2 研究內(nèi)容26
• 3 技術(shù)路線26-27
• 4 實驗材料27-30
• 4.1 實驗動物27-28
• 4.2 高蛋白血癥家蠶建模處理28-30
• 5 主要試劑及試劑盒30-32
• 6 主要儀器設(shè)備32-33
• 7 實驗方法33-47
• 7.1 組織切片及其HE染色33-34
• 7.2 新鮮組織壓片觀察34
• 7.3 細胞膜染色34
• 7.4 溶酶體染色34-35
• 7.5 DAPI染色35
• 7.6 組織總RNA提取35-36
• 7.7 RNA消化36
• 7.8 RNA的反轉(zhuǎn)錄36-37
• 7.9 實時定量PCR37-38
• 7.10 脂肪體組織氨基酸的HPLC測定38-40
• 7.11 ROS染色40-41
• 7.12 BCA法測定蛋白濃度41
• 7.13 酶活性測定41-45
• 7.14 蠶卵計數(shù)及不受精率統(tǒng)計45-46
• 7.15 性腺成熟系數(shù)調(diào)查46-47
• 第三章 結(jié)果與分析47-71
• 1 高蛋白血癥引起脂肪體重塑異常47-55
• 1.1 高蛋白血癥突變體家蠶TBH的脂肪體重塑47-50
• 1.2 封堵吐絲孔家蠶的脂肪體重塑50-55
• 2 高蛋白血癥家蠶脂肪體重塑異常的分子機制55-61
• 2.1 伴隨TBH家蠶脂肪體重塑異常的PCD信號通路調(diào)控變化55-58
• 2.2 高蛋白血重癥家蠶脂肪體重塑異常的分子機制58-61
• 3 高蛋白血癥對家蠶脂肪體游離氨基酸代謝的影響61-65
• 3.1 高蛋白血癥對家蠶脂肪體的游離氨基酸含量影響61-63
• 3.2 高蛋白血癥對脂肪體中氨基酸轉(zhuǎn)化代謝相關(guān)酶活性的影響63-65
• 4 高蛋白血癥對脂肪體氧化應(yīng)激水平的影響65-66
• 5 高蛋白血癥通過影響脂肪體的蛋白質(zhì)合成影響生殖66-71
• 5.1 高蛋白血癥影響了雌性家蠶的產(chǎn)卵66-68
• 5.2 高蛋白血癥危害了家蠶的卵巢發(fā)育68-69
• 5.3 高蛋白血癥降低了家蠶脂肪體的Vg基因表達水平69-71
• 第四章 結(jié)論與展望71-73
• 1 結(jié)論71
• 2 論文創(chuàng)新點71-72
• 3 后續(xù)研究展望與建議72-73
• 參考文獻73-84
• 附錄84-87
• 附錄1 文中主要縮略詞表84-85
• 附錄2 家蠶(Bm)脂肪體中游離氨基酸含量85-87
• 研究生期間參與項目與成果87-89
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文87
• 攻讀學(xué)位期間參與申請發(fā)明專利87
• 攻讀學(xué)位期間參與項目87-89
• 致謝89-91

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本文編號：1106452