本文關(guān)鍵詞：家蠶高蛋白血癥對脂肪體重塑及其功能的影響

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【摘要】：高蛋白血癥是臨床常見的嚴(yán)重代謝疾病。由于缺乏可靠的高蛋白血癥動物模型,相關(guān)發(fā)病機(jī)制探究還有諸多不明之處。本實(shí)驗(yàn)室利用無脊椎模式動物家蠶構(gòu)建了高蛋白血癥疾病模型,發(fā)現(xiàn)了疾病模型家蠶的幼蟲-蛹變態(tài)期的出現(xiàn)了脂肪體重塑與生理功能障礙,為此,本文研究了高蛋白血癥影響家蠶脂肪體重塑的機(jī)制及其生理功能的影響。結(jié)果如下:1高蛋白血癥引起變態(tài)期家蠶脂肪體重塑異常本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因突變體TBH家蠶是一個(gè)能夠正常繼代的輕癥高蛋白血癥遺傳品系,其后部絲腺合成的絲蛋白質(zhì)不能正常分泌至體外,導(dǎo)致幼蟲-蛹變態(tài)期絲腺退化釋放更多的蛋白至血淋巴,在蛹期出現(xiàn)1周左右的血淋巴蛋白濃度極度升高。我們另一種快速建立重癥高蛋白血癥家蠶(簡記為疾病模型,AM)的方法是在成熟幼蟲停止進(jìn)食后,用低熔點(diǎn)石蠟封堵家蠶的吐絲孔,阻止其絲腺中儲存蛋白質(zhì)向體外分泌,導(dǎo)致整個(gè)蛹期血淋巴蛋白濃度一直維持在極高水平,并出現(xiàn)高致死現(xiàn)象。脂肪體活體形態(tài)觀察和細(xì)胞膜染色,以及組織切片染色結(jié)果顯示,輕癥TBH家蠶脂肪體開始解離較野生型提前,解離和重塑過程延長;重癥AM家蠶脂肪體開始解離時(shí)間較對照遲,解離過程顯著延長,重塑困難。qRT-PCR調(diào)查脂肪體重塑相關(guān)基因BmAtg6、BmAtg8和BmDronc的表達(dá),發(fā)現(xiàn)在兩種模型家蠶的變態(tài)期脂肪體中,這3個(gè)基因的表達(dá)水平均顯著低于對照組。進(jìn)一步的細(xì)胞溶酶體染色及細(xì)胞核DAPI染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,兩種高蛋白血癥家蠶的脂肪體細(xì)胞出現(xiàn)了一定程度的自噬和凋亡障礙。2高蛋白血癥影響了變態(tài)期家蠶脂肪體生理功能HPLC測定結(jié)果顯示,高蛋白血癥家蠶脂肪體中多種游離氨基酸的含量出現(xiàn)了顯著變化,氨基酸轉(zhuǎn)化代謝相關(guān)的GPT、GOT酶活性也出現(xiàn)了異常。細(xì)胞氧化應(yīng)激水平調(diào)查結(jié)果顯示,高蛋白血癥家蠶脂肪體中ROS增多,催化ROS轉(zhuǎn)化為過氧化氫的SOD活性和分解過氧化氫的CAT活性,以及GST活性都顯著升高。變態(tài)期脂肪體合成Vg的水平調(diào)查結(jié)果顯示,高蛋白血癥家蠶脂肪體中的Vg基因轉(zhuǎn)錄水平顯著低于對照,暗示雌性生殖發(fā)育必需的Vg蛋白合成出現(xiàn)障礙;進(jìn)一步的卵巢發(fā)育觀察結(jié)果顯示,高蛋白血癥家蠶的卵巢重量及性腺系數(shù)均顯著低于對照。TBH家蠶的成蟲以及輕癥AM家蠶(吐絲6 h后封堵吐絲孔)成蟲的產(chǎn)卵數(shù)減少,不受精卵增多。
【關(guān)鍵詞】：高蛋白血癥 疾病模型 脂肪體重塑 生理功能 生殖
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-26
• 1 高蛋白血癥及其動物模型11-15
• 1.1 高蛋白血癥11-12
• 1.2 高蛋白血癥動物模型12-15
• 2 家蠶脂肪體及其生理功能15-19
• 2.1 家蠶脂肪體抗氧化應(yīng)激相關(guān)物質(zhì)15-17
• 2.2 家蠶脂肪體組織內(nèi)氨基酸轉(zhuǎn)化代謝相關(guān)酶類17-18
• 2.3 家蠶脂肪體的卵黃原蛋白合成與轉(zhuǎn)運(yùn)18-19
• 3 家蠶脂肪體的重塑19-26
• 3.1 家蠶脂肪體組織的解離20-22
• 3.2 家蠶脂肪體細(xì)胞的程序性死亡22-25
• 3.3 家蠶脂肪體細(xì)胞的分化及組織再生25-26
• 第二章 研究內(nèi)容與方法26-47
• 1 研究目的和意義26
• 2 研究內(nèi)容26
• 3 技術(shù)路線26-27
• 4 實(shí)驗(yàn)材料27-30
• 4.1 實(shí)驗(yàn)動物27-28
• 4.2 高蛋白血癥家蠶建模處理28-30
• 5 主要試劑及試劑盒30-32
• 6 主要儀器設(shè)備32-33
• 7 實(shí)驗(yàn)方法33-47
• 7.1 組織切片及其HE染色33-34
• 7.2 新鮮組織壓片觀察34
• 7.3 細(xì)胞膜染色34
• 7.4 溶酶體染色34-35
• 7.5 DAPI染色35
• 7.6 組織總RNA提取35-36
• 7.7 RNA消化36
• 7.8 RNA的反轉(zhuǎn)錄36-37
• 7.9 實(shí)時(shí)定量PCR37-38
• 7.10 脂肪體組織氨基酸的HPLC測定38-40
• 7.11 ROS染色40-41
• 7.12 BCA法測定蛋白濃度41
• 7.13 酶活性測定41-45
• 7.14 蠶卵計(jì)數(shù)及不受精率統(tǒng)計(jì)45-46
• 7.15 性腺成熟系數(shù)調(diào)查46-47
• 第三章 結(jié)果與分析47-71
• 1 高蛋白血癥引起脂肪體重塑異常47-55
• 1.1 高蛋白血癥突變體家蠶TBH的脂肪體重塑47-50
• 1.2 封堵吐絲孔家蠶的脂肪體重塑50-55
• 2 高蛋白血癥家蠶脂肪體重塑異常的分子機(jī)制55-61
• 2.1 伴隨TBH家蠶脂肪體重塑異常的PCD信號通路調(diào)控變化55-58
• 2.2 高蛋白血重癥家蠶脂肪體重塑異常的分子機(jī)制58-61
• 3 高蛋白血癥對家蠶脂肪體游離氨基酸代謝的影響61-65
• 3.1 高蛋白血癥對家蠶脂肪體的游離氨基酸含量影響61-63
• 3.2 高蛋白血癥對脂肪體中氨基酸轉(zhuǎn)化代謝相關(guān)酶活性的影響63-65
• 4 高蛋白血癥對脂肪體氧化應(yīng)激水平的影響65-66
• 5 高蛋白血癥通過影響脂肪體的蛋白質(zhì)合成影響生殖66-71
• 5.1 高蛋白血癥影響了雌性家蠶的產(chǎn)卵66-68
• 5.2 高蛋白血癥危害了家蠶的卵巢發(fā)育68-69
• 5.3 高蛋白血癥降低了家蠶脂肪體的Vg基因表達(dá)水平69-71
• 第四章 結(jié)論與展望71-73
• 1 結(jié)論71
• 2 論文創(chuàng)新點(diǎn)71-72
• 3 后續(xù)研究展望與建議72-73
• 參考文獻(xiàn)73-84
• 附錄84-87
• 附錄1 文中主要縮略詞表84-85
• 附錄2 家蠶(Bm)脂肪體中游離氨基酸含量85-87
• 研究生期間參與項(xiàng)目與成果87-89
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文87
• 攻讀學(xué)位期間參與申請發(fā)明專利87
• 攻讀學(xué)位期間參與項(xiàng)目87-89
• 致謝89-91

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1 王玉龍;家蠶高蛋白血癥對脂肪體重塑及其功能的影響[D];蘇州大學(xué);2016年

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本文編號：1106452