本文關(guān)鍵詞：醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠血腦脊液屏障損傷的比較研究

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【摘要】：目的本研究旨在探討比較醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后對大鼠血腦脊液屏障的物理屏障功能和免疫監(jiān)視功能的損傷的不同,為不同類型的鉛中毒防治提供理論依據(jù)。方法SPF級SD雄性大鼠81只隨機分為對照組、醋酸鉛組(20mg/kg)和納米硫化鉛(nano-pbS)組(20mg/kg),每組27只。染毒方法為灌胃,染毒時間為9周。應(yīng)用Morris水迷宮檢測大鼠的學習與記憶功能;運用ELISA法檢測實驗大鼠血清以及腦脊液中白蛋白、白細胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)、CXCL10含量,并計算出腦脊液白蛋白指數(shù);激光共聚焦熒光免疫方法檢測脈絡(luò)叢胞質(zhì)附著蛋白-1(ZO-1)、閉合蛋白(Occludin)、血管內(nèi)皮表達粘附分子(ICAM-1)熒光表達分布;采用real-time PCR方法檢測實驗大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1、Occludin、IL-4、IFN-γ、CXCL10和ICAM-1的m RNA的表達;流式細胞術(shù)檢測實驗大鼠全血和腦脊液中CD4+T淋巴細胞的數(shù)量;應(yīng)用透射電鏡對實驗大鼠的脈絡(luò)叢組織上皮細胞的超微結(jié)構(gòu)進行觀察。結(jié)果1實驗大鼠的生長發(fā)育情況:在醋酸鉛與納米硫化鉛染毒期間,所有實驗大鼠體重未見明顯差異。2醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠學習記憶功能的影響:與對照組比較,醋酸鉛與納米硫化鉛染毒后,第四天,兩染毒組大鼠的逃逸潛伏期均延長,納米硫化鉛組比醋酸鉛組延長32.89%(P0.05),兩個染毒組大鼠穿越平臺的次數(shù)均有所下降(P0.05),組間比較無顯著差異。3醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠血清及腦脊液中白蛋白、IL-4、IFN-γ、CXCL10含量的影響:醋酸鉛組和納米硫化鉛組而腦脊液中白蛋白含量較對照組分別升高25.18%和47.70%,納米硫化鉛組比醋酸鉛組升高17.98%(P0.05),兩組腦脊液白蛋白指數(shù)均較對照組升高,且納米硫化鉛組升高更明顯(P0.05);與對照組比較,醋酸鉛組與納米硫化鉛組細胞因子IL-4、IFN-γ的含量增加,CXCL10含量降低。其中,醋酸鉛組與納米硫化鉛組血清中細胞因子IL-4、IFN-γ含量較對照組分別升高[72.13%、93.56%]和[54.61%、43.50%],CXCL10含量分別降低了43.11%和53.44%(P0.05),但納米鉛組與醋酸鉛組比較無明顯不同。腦脊液中,醋酸鉛組與納米硫化鉛組細胞因子IL-4、IFN-γ和CXCL10與血清中變化趨勢相同。其中,納米硫化鉛組腦脊液中IL-4比醋酸鉛組低13.60%,IFN-γ含量比醋酸鉛組升高205.06%(P0.05)。4醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1、Occludin、ICAM-1和CD4+T淋巴細胞分布的影響:對照組大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1呈連續(xù)線狀環(huán)形分布,熒光較強。醋酸鉛組、納米硫化鉛組大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1熒光減弱,分布呈不連續(xù)性,納米硫化鉛組較醋酸鉛組更為顯著;醋酸鉛組、納米硫化鉛組大鼠脈絡(luò)叢緊密連接蛋白Occludin邊緣熒光與對照組比較減弱。納米硫化鉛組比醋酸鉛組表達下降幅度大;對照組中,ICAM-1的熒光呈不連續(xù)性,醋酸鉛與納米硫化鉛組脈絡(luò)叢中ICAM-1的熒光強度均較對照組增強,納米硫化鉛組更明顯。5醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1、Occludin、IL-4、IFN-γ、CXCL10和ICAM-1的m RNA的表達的影響:與對照組比較,醋酸鉛組與納米硫化鉛組緊密連接蛋白ZO-1、Occludin m RNA相對表達量均呈下降趨勢(P0.05),納米硫化鉛組緊密連接蛋白ZO-1、Occludin m RNA相對表達量比醋酸鉛組分別下降了59.37%,11.90%(P0.05);與對照組比較,醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后,脈絡(luò)叢中ICAM-1、IL-4、IFN-γ的m RNA的表達結(jié)果升高,醋酸鉛與納米硫化鉛組CXCL10蛋白的m RNA的表達結(jié)果較對照組降低,納米硫化鉛組的ICAM-1、IL-4和CXCL10的m RNA的表達分別比醋酸鉛組高31.19%、72.57%和42.86%,IFN-γm RNA的表達比醋酸鉛組降低21.63%(P0.05)。6醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠血液及腦脊液中CD4+T淋巴細胞數(shù)量的影響流:醋酸鉛組大鼠全血中CD4+T淋巴細胞以及醋酸鉛組與納米硫化鉛組腦脊液中CD4+T淋巴細胞比例均較對照組增加(P0.05)。7醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠脈絡(luò)叢超微結(jié)構(gòu)的影響:觀察發(fā)現(xiàn)對照組脈絡(luò)叢組織微絨毛濃密,排列緊密;線粒體形態(tài)正常;細胞之間的緊密連接結(jié)構(gòu)呈完整性,清晰可見。而醋酸鉛組與納米硫化鉛染毒組脈絡(luò)叢組織微絨毛缺失稀少,排列雜亂無序;線粒體呈腫大及空泡樣改變,且納米硫化鉛組線粒體形態(tài)有異常;細胞間緊密連接局部模糊不清,但醋酸鉛與納米硫化鉛組微絨毛無明顯差異。結(jié)論醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后可導致大鼠學習和記憶功能下降,血腦脊液屏障的物理屏障功能和免疫功能受到損傷,且納米硫化鉛損傷更重。
【關(guān)鍵詞】：納米硫化鉛 血腦脊液屏障 免疫監(jiān)視
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R595.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 引言12-15
• 第1章 醋酸鉛與納米硫化鉛對血腦脊液屏障的物理屏障功能的損傷研究15-29
• 1.1 材料與方法15-21
• 1.1.1 實驗動物15
• 1.1.2 主要儀器與試劑15-16
• 1.1.3 主要實驗用液的配制16
• 1.1.4 實驗動物的分組與處理16-17
• 1.1.5 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對實驗大鼠生長發(fā)育的影響17
• 1.1.6 醋酸鉛與納米硫化鉛對大鼠學習記憶的影響17
• 1.1.7 ELISA法測定血清和腦脊液中白蛋白含量17-18
• 1.1.8 熒光免疫激光共聚焦方法檢測緊密連接蛋白熒光分布表達18-19
• 1.1.9 real time-PCR檢測脈絡(luò)叢緊密連接蛋白mRNA表達19-20
• 1.1.10 電鏡下觀察大鼠CP上皮細胞的超微結(jié)構(gòu)20-21
• 1.1.11 統(tǒng)計方法21
• 1.2 結(jié)果21-25
• 1.2.1 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后大鼠生長發(fā)育的情況21
• 1.2.2 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后大鼠學習和記憶功能的變化21-22
• 1.2.3 醋酸鉛與納米硫化鉛鉛暴露對腦脊液和血清中白蛋白的影響22
• 1.2.4 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對脈絡(luò)叢中ZO-1 與Occludin熒光表達分布的影響22-23
• 1.2.5 醋酸鉛與納米鉛暴露對大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1 與Occludin的mRNA表達的影響23-24
• 1.2.6 醋酸鉛與納米鉛暴露后脈絡(luò)叢上皮細胞超微結(jié)構(gòu)的變化24-25
• 1.3 討論25-28
• 1.3.1 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠生長發(fā)育的影響25
• 1.3.2 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠學習和記憶功能的損傷25-26
• 1.3.3 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對血腦脊液屏障通透性的損傷26
• 1.3.4 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對脈絡(luò)叢緊密連接蛋白ZO-1、Occludin的蛋白含量和mRNA表達的影響26-27
• 1.3.5 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對脈絡(luò)叢上皮細胞超微結(jié)構(gòu)的影響27-28
• 1.4 結(jié)論28-29
• 第2章 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對血腦脊液屏障的免疫監(jiān)視功能的損傷研究29-38
• 2.1 材料與方法29-31
• 2.1.1 主要儀器與試劑29-30
• 2.1.2 實驗動物及處理30
• 2.1.3 流式細胞術(shù)檢測全血及腦脊液中CD4~+ T淋巴細胞數(shù)量30-31
• 2.1.4 ELISA法檢測大鼠血清及腦脊液中IL-4、IFN-γ及CXCL10含量31
• 2.1.5 激光共聚焦檢測大鼠脈絡(luò)叢中ICAM-1 的熒光表達分布31
• 2.1.6 real-time PCR檢測IL-4、IFN-γ、CXCL10及ICAM-1 mRNA的含量31
• 2.1.7 統(tǒng)計方法31
• 2.2 結(jié)果31-35
• 2.2.1 醋酸鉛與納米硫化鉛染毒對血液及腦脊液中CD4~+ T淋巴細胞數(shù)量的影響31-33
• 2.2.2 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后血清及腦脊液中IL-4、IFN-γ及CXCL10含量變化33
• 2.2.3 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對脈絡(luò)叢中ICAM-1 熒光分布表達的影響33-34
• 2.2.4 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對脈絡(luò)叢中IL-4、IFN-γ、CXCL10、ICAM-1 mRNA表達的影響34-35
• 2.3 討論35-37
• 2.3.1 醋酸鉛與納米硫化鉛染毒對全血、脈絡(luò)叢及腦脊液中CD4~+ T淋巴細胞數(shù)量的影響35-36
• 2.3.2 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對血清及腦脊液中IL-4、IFN-γ及CXCL10蛋白含量的及其在脈絡(luò)叢中mRNA表達的影響36-37
• 2.3.3 醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對脈絡(luò)叢中ICAM-1 熒光分布表達以及ICAM-1 mRNA表達的影響37
• 2.4 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-41
• 第3章 綜述 納米硫化鉛的毒性機制研究41-51
• 3.1 納米硫化鉛的特性及應(yīng)用41-42
• 3.1.1 納米硫化鉛的接觸途徑41
• 3.1.2 經(jīng)呼吸道接觸41-42
• 3.1.3 經(jīng)消化道、皮膚接觸42
• 3.2 納米硫化鉛毒性機制的研究42-47
• 3.2.1 納米硫化鉛導致氧化損傷及炎癥反應(yīng)43-45
• 3.2.2 納米硫化鉛對神經(jīng)遞質(zhì)的影響45
• 3.2.3 納米硫化鉛對生殖系統(tǒng)的損傷45-46
• 3.2.4 納米硫化鉛對元素代謝的影響46-47
• 3.2.5 納米硫化鉛對神經(jīng)元胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)的影響47
• 3.3 結(jié)語47
• 參考文獻47-51
• 結(jié)論51-52
• 致謝52-53
• 導師簡介53-54
• 作者簡介54-55
• 學位論文數(shù)據(jù)集55

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