本文關(guān)鍵詞：通過激光拉曼光譜系統(tǒng)無損區(qū)分大鼠原代胰島α、β、δ及pp細(xì)胞

  更多相關(guān)文章： 拉曼光譜 胰島細(xì)胞 主成分分析-線性判別分析 區(qū)分

【摘要】：目的：可見光與細(xì)胞內(nèi)分子作用發(fā)生拉曼散射。通過分析拉曼散射光譜,可獲得細(xì)胞的“分子指紋”。將其用于不同種類細(xì)胞的辨識(shí)、分選是目前單細(xì)胞拉曼光譜研究的前沿領(lǐng)域。然而,四類胰島內(nèi)分泌細(xì)胞的分離及純化仍是個(gè)難題,故本實(shí)驗(yàn)將拉曼光譜技術(shù)引入大鼠原代胰島α、β、δ及pp細(xì)胞的分離及純化中,探討并比較該方法與傳統(tǒng)方法在區(qū)分四種胰島細(xì)胞方面的優(yōu)劣,以期為大鼠原代胰島細(xì)胞的純化提供一種新的手段。方法：以Sprague-Dawley大鼠為動(dòng)物模型,提取原代胰島并消化成胰島細(xì)胞混合細(xì)胞懸液,種植于細(xì)胞定位格子培養(yǎng)皿中,過夜培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁穩(wěn)定,收集細(xì)胞定位格子培養(yǎng)皿中大鼠胰島細(xì)胞的拉曼光譜、坐標(biāo)及照片,然后分別以胰高血糖素、胰島素、生長(zhǎng)抑素及胰多肽作為一抗分批次對(duì)細(xì)胞爬片進(jìn)行免疫組化染色,根據(jù)免疫組化結(jié)果結(jié)合培養(yǎng)皿坐標(biāo)定位確定培養(yǎng)皿中每個(gè)胰島細(xì)胞的分類,并根據(jù)細(xì)胞種類將細(xì)胞光譜及細(xì)胞直徑等數(shù)據(jù)分為4組,即α細(xì)胞組、β細(xì)胞組、δ細(xì)胞組及pp細(xì)胞組。四類細(xì)胞拉曼光譜特征峰及面積差異采用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì),采用主成分分析聯(lián)合線性判別分析法對(duì)四種胰島細(xì)胞拉曼光譜進(jìn)行分析以計(jì)算光譜對(duì)胰島細(xì)胞的區(qū)分正確率,用線性判別分析法對(duì)以細(xì)胞大小區(qū)分細(xì)胞種類進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。此外,采用MTT法及胰島素分泌試驗(yàn)法比較拉曼光譜采集數(shù)據(jù)后的細(xì)胞群體與細(xì)胞培養(yǎng)箱中的細(xì)胞群體活性的差異,采用吖啶橙/碘化丙啶雙染法比較兩組細(xì)胞活性率。結(jié)果：貼壁生長(zhǎng)的胰島p細(xì)胞面積較其他胰島細(xì)胞大,四種細(xì)胞之間面積的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)；然而單純利用面積對(duì)四種胰島細(xì)胞進(jìn)行分類,正確區(qū)分率僅為38.3%。四種胰島細(xì)胞的拉曼光譜既有共同的特征峰也存在差異顯著的波峰,即二者有不同的“細(xì)胞分子指紋”,方差分析結(jié)果顯示在530 cm-1、725 cm-1、785 cm-1、828 cm-1、852 cm-1、893 cm-1、 937 cm-1、947 cm-1、1002 cm-1、1053 cm-1、1091cm-1、1128 cm-1、1209 cm-1、 1255 cm-1、1301cm-1、1342 cm-1、1575 cm-1、1615cm-1以及1665 cm-1處四種細(xì)胞波峰強(qiáng)度有顯著差異；且將該特點(diǎn)結(jié)合主成分分析聯(lián)合線性判別分析的方法對(duì)胰島α、β、δ及pp細(xì)胞進(jìn)行分類,正確率為98.6%,經(jīng)交叉驗(yàn)證其正確分類率為93.6%；且細(xì)胞活性鑒定實(shí)驗(yàn)表明該實(shí)驗(yàn)條件下細(xì)胞活性與培養(yǎng)箱中細(xì)胞活性相當(dāng),MTT結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組吸光度A值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.194),細(xì)胞在高糖刺激下胰島素分泌效率相當(dāng)(p=0.567),細(xì)胞凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.452)。結(jié)論：1.胰島p細(xì)胞較其他類別的胰島細(xì)胞更大,然而僅僅依靠細(xì)胞大小對(duì)細(xì)胞種類進(jìn)行區(qū)分,準(zhǔn)確率較低；2.四類胰島細(xì)胞具有不同的拉曼分子指紋；3.激光拉曼光譜結(jié)合主成分分析聯(lián)合線性判別分析法可以成為快速、無損區(qū)分胰島α、β、δ及pp細(xì)胞的有效方法。4.經(jīng)拉曼探測(cè)后胰島細(xì)胞活性仍保持良好。
【關(guān)鍵詞】：拉曼光譜 胰島細(xì)胞 主成分分析-線性判別分析 區(qū)分
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.1
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 英文縮略表5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-15
• 1 材料和試劑15-17
• 2 實(shí)驗(yàn)方法17-28
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-36
• 4 討論36-39
• 5 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述 原代族島α、β、δ及PP細(xì)胞的區(qū)分方法43-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 致謝56-57
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文57

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本文編號(hào)：1074517