發(fā)布時(shí)間：2017-10-15 22:00

  本文關(guān)鍵詞：百草枯中毒小鼠腦損害后NGF、NOS免疫組化表達(dá)及環(huán)孢素A的治療作用研究

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【摘要】：目的:通過給C57BL/6小鼠腹腔注射一定劑量的20%的百草枯農(nóng)藥,讓小鼠處于慢性百草枯中毒的環(huán)境中,小鼠會(huì)逐步的出現(xiàn)一系列腦損害的癥狀,并進(jìn)一步檢測(cè)免疫組化抗體如神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、一氧化氮合酶(NOS)等在不同組小鼠腦組織中的表達(dá),進(jìn)而探討百草枯是否對(duì)小鼠腦組織有損害,并研究環(huán)孢素A對(duì)百草枯所致的小鼠腦中毒的治療作用。方法:選擇C57BL/6種類小鼠6周左右大小,一共30只,隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組又分為實(shí)驗(yàn)組Ⅰ和實(shí)驗(yàn)組Ⅱ:對(duì)照組小鼠(10只),實(shí)驗(yàn)組Ⅰ小鼠(10只),實(shí)驗(yàn)組Ⅱ小鼠(10只);分別給對(duì)照組小鼠腹腔注射10mg/Kg的生理鹽水、給實(shí)驗(yàn)組(實(shí)驗(yàn)組Ⅰ和實(shí)驗(yàn)組Ⅱ)小鼠腹腔注射10mg/Kg的濃度為20%百草枯水溶液,每周腹腔注射兩次,選擇在每周一和每周四的上午,一共連續(xù)腹腔注射時(shí)長(zhǎng)為2個(gè)月(8周)左右的時(shí)間。三組小鼠放在同樣的條件下飼養(yǎng),在三組小鼠連續(xù)腹腔注射百草枯2個(gè)月后,再給實(shí)驗(yàn)組Ⅱ的小鼠腹腔注射5mg/kg的環(huán)孢素A溶液,此時(shí),對(duì)于對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組Ⅰ的小鼠暫時(shí)不做任何處理。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,動(dòng)態(tài)觀察并測(cè)試不同組的小鼠在一般形態(tài)、行動(dòng)、毛發(fā)上的變化,并測(cè)定小鼠在行為學(xué)的變化和差異(小鼠的水迷宮實(shí)驗(yàn))。最后同時(shí)處死三組小鼠,加以解剖,將三組小鼠的腦組織取出并進(jìn)行固定、脫水、石蠟包埋、切片、染色等并研究和對(duì)比NGF、NOS等免疫組化在不同組小鼠腦組織的表達(dá)。結(jié)果:1、實(shí)驗(yàn)組Ⅰ和實(shí)驗(yàn)組Ⅱ的C57BL/6小鼠在百草枯連續(xù)腹腔給藥過程中,逐步出現(xiàn)輕微震顫、動(dòng)作僵硬,毛發(fā)顏色變黃、變稀疏、運(yùn)動(dòng)遲緩、運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)、躲避刺激能力減弱、豎毛等表現(xiàn)。而對(duì)照組小鼠關(guān)于這方面的表現(xiàn)在給百草枯的前后時(shí)間里并沒有明顯的變化。2、實(shí)驗(yàn)組Ⅰ和實(shí)驗(yàn)組Ⅱ的小鼠較對(duì)照組小鼠在“水迷宮實(shí)驗(yàn)”中穿過平臺(tái)次數(shù)明顯減少。實(shí)驗(yàn)組Ⅱ的小鼠在腹腔注射環(huán)孢素A之后,其在行為學(xué)上癥狀沒有得到明顯的改善,較實(shí)驗(yàn)組Ⅰ小鼠差異無明顯差異。3、實(shí)驗(yàn)組Ⅰ的小鼠腦組織NGF、NOS免疫組化染色表達(dá)強(qiáng)陽性,主要分布和表達(dá)在大腦皮層和紋狀體等處;實(shí)驗(yàn)組Ⅱ的小鼠腦組織NGF、NOS對(duì)比實(shí)驗(yàn)組Ⅰ的小鼠表達(dá)有所減少,表達(dá)的部位與實(shí)驗(yàn)組Ⅰ大致相同。4、檢測(cè)發(fā)現(xiàn)對(duì)照組小鼠腦組織在大腦皮層和紋狀體處NGF、NOS免疫組化也有一定程度的表達(dá),但表達(dá)的量明顯少于實(shí)驗(yàn)室Ⅰ和實(shí)驗(yàn)組Ⅱ的小鼠。結(jié)論:1、模擬一個(gè)慢性的、低濃度的百草枯中毒的環(huán)境,同時(shí)讓C57BL/6小鼠置身于此環(huán)境中,小鼠逐步會(huì)出現(xiàn)動(dòng)作和四肢輕微的震顫、僵硬,毛發(fā)顏色變黃、變稀疏、運(yùn)動(dòng)遲緩、運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)、躲避刺激能力減弱等表現(xiàn)、且通過對(duì)小鼠行為學(xué)進(jìn)行客觀的檢測(cè),可以發(fā)現(xiàn)小鼠在行為學(xué)上可以產(chǎn)生明顯的差異,非常的類似臨床上患有帕金森病患者的臨床癥狀,因此我們可以認(rèn)為慢性的低劑量的百草枯可以引起小鼠腦組織發(fā)生損傷。2、實(shí)驗(yàn)組Ⅱ的NGF、NOS陽性細(xì)胞數(shù)大于實(shí)驗(yàn)組Ⅰ和對(duì)照組,說明環(huán)孢素A對(duì)百草枯中毒小鼠腦損害有一定治療作用。3、經(jīng)腹腔注射環(huán)孢素A治療的實(shí)驗(yàn)組Ⅱ的小鼠,發(fā)現(xiàn)其腦組織的NGF、NOS表達(dá)較實(shí)驗(yàn)組Ⅰ明顯減少,這說明環(huán)孢素A對(duì)于百草枯在腦內(nèi)造成損害有一定程度的抑制作用,由此可以推測(cè)環(huán)孢素A可能對(duì)帕金森病的治療有一定的意義。但實(shí)驗(yàn)組Ⅱ和實(shí)驗(yàn)組Ⅰ的小鼠行在為學(xué)上的改變沒有明顯的差異,因此認(rèn)為5mg/kg劑量的環(huán)孢素A并沒有明顯改善百草枯損傷小鼠腦損害的癥狀。
【關(guān)鍵詞】：百草枯 腦損害 神經(jīng)生長(zhǎng)因子 一氧化氮合酶
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R595.4
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-17
• 研究材料和方法17-22
• 1 百草枯腦損害的研究17-20
• 1.1 材料、試劑和儀器17
• 1.2 誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生帕金森癥狀17-18
• 1.3 小鼠腦組織HE切片染色制作18-20
• 2 小鼠腦組織NGF、NOS抗體的免疫組化染色20-22
• 2.1 材料、試劑和儀器20
• 2.2 免疫組化步驟（SABC 法）20-22
• 結(jié)果22-35
• 討論35-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 綜述 百草枯誘導(dǎo)小鼠帕金森病動(dòng)物模型發(fā)病機(jī)制的研究49-56
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：1038917