本文關(guān)鍵詞：下丘腦CB1R及內(nèi)源性大麻素水解酶參與T2DM雄性獼猴HPA軸功能調(diào)節(jié)

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【摘要】：[目的]下丘腦-垂體-腎上腺(hypothalamo-pituitary-adrenal,HPA)軸作為機體能量代謝的調(diào)節(jié)中樞,在2型糖尿病發(fā)生過程中起重要作用。下丘腦內(nèi)分布有大量大麻素受體,大麻素系統(tǒng)可廣泛調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的功能。目前關(guān)于大麻素系統(tǒng)對HPA軸的作用研究較少,因此大麻素系統(tǒng)對HPA軸的作用在2型糖尿病發(fā)病機制中的研究具有重要價值。本文選擇經(jīng)高脂飲食誘導(dǎo)24月,成功建立的2型糖尿病及糖尿病前期川西亞種雄性獼猴,研究其下丘腦、垂體及腎上腺脂肪酸酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase, FAAH)、單酰甘油酯酶(monoglycerol lipase, MAGL)、大麻素1型受體(cannabinoid 1 receptor, CB1R)、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體(corticotropin releasing hormone receptor 1, CRHR1)、促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone, ACTH)、促腎上腺皮質(zhì)激素受體(adrenocorticotropic hormone receptor, ACTHR)、糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoids receptor, GR)及糖皮質(zhì)激素的表達變化,據(jù)此探討2型糖尿病進程中,(1)HPA軸功能變化；(2)內(nèi)源性大麻素受體及水解酶在HPA軸中的作用。[方法]將15只川西亞種雄性獼猴,根據(jù)空腹血糖水平及2小時餐后血糖分為健康組(5只),糖尿病前期組(5只)及顯性糖尿病組(5只)。經(jīng)麻醉處死后,取下丘腦、垂體及腎上腺固定或低溫凍存。HE染色檢測組織病理變化,免疫組織化學(xué)SABC藍色顯色法檢測蛋白質(zhì)表達分布及水平,蛋白質(zhì)印跡法檢測蛋白質(zhì)表達量,實時熒光定量PCR檢測基因相對表達量,免疫酶聯(lián)吸附實驗檢測腎上腺皮質(zhì)醇水平。[結(jié)果]組織形態(tài)學(xué)觀察顯示,從健康到糖尿病前期再到顯性糖尿病的獼猴出現(xiàn)下丘腦室旁核神經(jīng)元萎縮,顯性糖尿病獼猴神經(jīng)垂體形成較多少量均質(zhì)紅染團塊,腺垂體嗜酸性細胞增多,腎上腺束狀帶細胞呈漸進性腫脹的病變特征。免疫組化染色結(jié)果顯示：各組獼猴下丘腦室旁核均分布有CRH、CB、FAAH及MAGL,CRHR1分布于各組獼猴神經(jīng)垂體,ACTH分布于各組獼猴腺垂體,各組獼猴腎上腺束狀帶分布有ACTHR,GR分布于糖尿病前期及顯性期獼猴下丘腦室旁核及腺垂體：從健康、前期到顯性,下丘腦室旁核CRH積分光密度值逐漸減少(P0.05),神經(jīng)垂體CRHR1積分光密度值先降低后升高(P0.01),腺垂體ACTH積分光密度值先下降后恢復(fù)至健康水平(P0.01),腎上腺束狀帶ACTHR積分光密度值呈逐漸升高的趨勢(P0.05),下丘腦室旁核及腺垂體GR積分光密度值逐漸降低(P0.05),下丘腦室旁核CB1R積分光密度值逐漸降低(P0.01), FAAH表達逐漸增多(P0.05), MAGL表達逐漸增多(P0.05)。蛋白質(zhì)印跡統(tǒng)計結(jié)果顯示：從健康、前期到顯性,下丘腦CRH及GR蛋白質(zhì)相對表達量逐漸減少(P0.05),而垂體ACTH、腎上腺ACTHR逐漸增多(P0.05),垂體CRHR1呈先減少后增多的趨勢(P0.01),下丘腦CB1R蛋白質(zhì)相對表達量逐漸減少(P0.01),下丘腦FAAH及MAGL逐漸增多(P0.01)。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示：從健康、前期到顯性,下丘腦CRH基因相對表達量逐漸減少(P0.01),垂體CRHR1基因相對表達量先降低后升高(P0.01),垂體ACTH基因(POMC)相對表達量呈顯著升高趨勢(P0.05),腎上腺ACTHR基因(MC2R)相對表達量呈逐漸降低趨勢(P0.01),皮質(zhì)醇合成限速酶11β-羥基類固醇脫氫酶基因(CYP11B1)相對表達量逐漸升高P0.05),下丘腦及垂體GR基因(NR3CD相對表達量呈逐漸下降趨勢(P0.05)；CB1R基因(CNR1)相對表達量在糖尿病前期顯著下調(diào),顯性期則進一步下調(diào)(P0.05); FAAH (FAAH)先減少后增多(P0.05), MAGL (MGLL)相對表達量逐漸增多(P0.01)。免疫酶聯(lián)吸附試驗結(jié)果顯示,腎上腺皮質(zhì)醇含量從健康到前期及顯性期逐漸升高(P0.01)。[結(jié)論]從健康、前期到顯性,HPA軸分泌功能逐漸增強,糖皮質(zhì)激素負反饋對HPA軸的抑制作用減弱。同時,CB1R表達逐漸減少,大麻素水解酶表達逐漸增多,表示在2型糖尿病發(fā)生過程中,減弱了CB1R及大麻素水解酶對HPA軸分泌功能的抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：2型糖尿病 下丘腦-垂體-腎上腺軸 大麻素1型受體 內(nèi)源性大麻素水解酶 獼猴
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 縮略詞表9-14
• 1 文獻綜述14-27
• 1.1 糖尿病概況及發(fā)病機理14-15
• 1.2 糖尿病診斷標準及治療方法15-16
• 1.2.1 糖尿病診斷標準15
• 1.2.2 糖尿病治療藥物及措施15-16
• 1.3 2型糖尿病動物模型16-17
• 1.4 下丘腦-垂體-腎上腺軸17-21
• 1.4.1 下丘腦-垂體-腎上腺軸分泌特點17-19
• 1.4.2 下丘腦-垂體-腎上腺軸功能紊亂與2型糖尿病19-21
• 1.5 內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)21-25
• 1.5.1 大麻素與內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)21-23
• 1.5.2 內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)在2型糖尿病發(fā)病過程中的變化23-25
• 1.6 內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)參與HPA軸調(diào)控與糖尿病的發(fā)生25-27
• 2 選題意義27
• 實驗部分27-59
• 1 實驗材料27-31
• 1.1 實驗動物27-28
• 1.2 實驗儀器28-29
• 1.3 耗材與試劑29-30
• 1.4 部分溶液配制30-31
• 2 實驗方法31-39
• 2.1 樣品采集31-32
• 2.2 免疫組織化學(xué)檢測CRH、CRHR1、ACTH、ACTHR、GR、CB1R、FAAH及MAGL組織分布32-33
• 2.2.1 下丘腦、垂體及腎上腺石蠟切片制作32
• 2.2.2 免疫組織化學(xué)SABC法32
• 2.2.3 顯微攝影、圖像分析及數(shù)據(jù)處理32-33
• 2.3 蛋白質(zhì)印跡法檢測CRH、CRHR1、ACTH、ACTHR、GR、CB1R、FAAH及MAGL蛋白表達量33-35
• 2.3.1 組織蛋白提取33
• 2.3.2 BCA蛋白質(zhì)濃度測定33
• 2.3.3 蛋白質(zhì)電泳33-34
• 2.3.4 免疫印跡34
• 2.3.5 數(shù)據(jù)分析34-35
• 2.4 實時熒光定量PCR檢測CRH、POMC、CYP11B1、CRHR1、MC2R、NR3C1、CNR1、FAAH及MGLL的基因表達量35-37
• 2.4.1 引物設(shè)計及用品處理35
• 2.4.2 總RNA提取35-36
• 2.4.3 總RNA純度和完整性檢測36
• 2.4.4 去除基因組DNA及反轉(zhuǎn)錄36-37
• 2.4.5 Real-Time PCR37
• 2.5 免疫酶聯(lián)吸附實驗檢測腎上腺皮質(zhì)醇含量37-38
• 2.5.1 樣品處理37-38
• 2.5.2 腎上腺皮質(zhì)醇含量檢測38
• 2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析38-39
• 3 實驗結(jié)果39-54
• 3.1 下丘腦-垂體-腎上腺病理變化39-42
• 3.2 下丘腦-垂體-腎上腺軸分泌功能變化42-50
• 3.2.1 CRH、CRHR1、ACTH、ACTHR及GR免疫組織化學(xué)染色結(jié)果42-46
• 3.2.2 CRH、CRHR1、ACTH、ACTHR及GR蛋白質(zhì)印跡檢測結(jié)果46
• 3.2.3 CRH、POMC、CYP11B1、CRHR1、MC2R及NR3C1熒光定量PCR檢測結(jié)果46-49
• 3.2.4 腎上腺皮質(zhì)醇濃度變化ELISA檢測結(jié)果49-50
• 3.3 下丘腦內(nèi)源性大麻素受體及大麻素水解酶表達變化50-54
• 3.3.1 CB1R、FAAH及MAGL免疫組織化學(xué)染色50-51
• 3.3.2 CB1R、FAAH及MAGL蛋白質(zhì)印跡檢測結(jié)果51-52
• 3.3.3 CNR1、FAAH及MGLL熒光定量PCR檢測結(jié)果52-54
• 4 討論54-57
• 4.1 糖尿病獼猴下丘腦-垂體-腎上腺軸激素及受體變化54-55
• 4.2 糖尿病獼猴下丘腦大麻素受體及內(nèi)源性大麻素水解酶變化55-56
• 4.3 糖尿病發(fā)病過程中內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)與HPA軸紊亂的關(guān)系56-57
• 5 結(jié)論與創(chuàng)新點57-59
• 5.1 結(jié)論57-58
• 5.2 創(chuàng)新點58-59
• 參考文獻59-70
• 致謝70-71
• 攻讀學(xué)位期間第一作者身份發(fā)表的學(xué)術(shù)論文71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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6 劉文潔;賈正平;羅曉紅;周s，

本文編號：1036438