發(fā)布時(shí)間：2017-10-11 13:32

  本文關(guān)鍵詞：胰島素樣生長(zhǎng)因子2對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖、分化和葡萄糖攝取的影響

  更多相關(guān)文章： 胰島素樣生長(zhǎng)因子2 3T3-L1前脂肪細(xì)胞 增殖 分化 葡萄糖攝取

【摘要】：目的:胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF2)是在細(xì)胞分裂時(shí)廣泛表達(dá)的多肽激素。盡管胰島素樣生長(zhǎng)因子在血清中豐富存在,但與胰島素和胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF1)比較,對(duì)于IGF2的生理及病理作用的研究是有限的。IGF2調(diào)節(jié)胎兒的生長(zhǎng)和分化,但在成人中的作用知之甚少。有證據(jù)表明IGF2主要在骨骼肌、脂肪組織、骨骼和卵巢中發(fā)揮作用。IGF2表達(dá)的改變可在代謝狀態(tài)、肥胖、糖尿病和多囊卵巢綜合征中觀察到。本研究擬觀察IGF2對(duì)前脂肪細(xì)胞3T3-L1增殖、分化以及對(duì)葡萄糖攝取功能的影響,并初步探討其影響3T3-L1作用的可能分子機(jī)制。方法:①用ELISA試劑盒檢測(cè)社區(qū)代謝綜合征患者和非代謝綜合征對(duì)照人群血清樣本以及實(shí)時(shí)熒光定量qPCR檢測(cè)高脂喂養(yǎng)肥胖模型小鼠和普通喂養(yǎng)對(duì)照小鼠不同組織樣本中IGF2的表達(dá)情況。②培養(yǎng) 3T3-L1 前脂肪細(xì)胞,按 Ong/m1、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml 的 IGF2濃度梯度進(jìn)行干預(yù),以Promega公司的CellTiter 96(?)AQueous單溶液檢測(cè)系統(tǒng)(MTS)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。③ 培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞,按不同濃度梯度IGF2進(jìn)行干預(yù),用Annexin V-FITC法及Hoechst33258染色法檢測(cè)不同濃度IGF2對(duì)3T3-L1細(xì)胞凋亡能力的影響。④采用含胰島素、地塞米松與IBMX的分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化3T3-L1細(xì)胞,并用不同濃度的IGF2進(jìn)行細(xì)胞處理,用油紅O染色法分析脂肪細(xì)胞的分化程度。⑤分別采用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)平均熒光強(qiáng)度觀察不同濃度IGF2對(duì)3T3-L1誘導(dǎo)分化細(xì)胞對(duì)于熒光標(biāo)記2-脫氧葡萄糖(2-NBDG)的攝取能力。⑥利用實(shí)時(shí)熒光定量qRT-PCR的方法對(duì)不同濃度IGF2處理誘導(dǎo)分化3T3-L1細(xì)胞后維持分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(PPARy、CEBPβ等)、脂代謝關(guān)鍵酶(LPL、FAS等)及脂因子(Leptin、Adiponectin等)基因mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),利用Western Blot方法檢測(cè)經(jīng)典胰島素信號(hào)通路Akt及p-Akt蛋白的表達(dá)變化,以尋找IGF2影響3T3-L1細(xì)胞增殖分化的可能調(diào)控基因。結(jié)果:①社區(qū)代謝綜合征患者血清中IGF2表達(dá)水平較非代謝綜合征對(duì)照人群顯著升高;IGF2在正常小鼠肌肉及脂肪來(lái)源的組織中存在較高水平表達(dá);成功構(gòu)建高脂喂養(yǎng)肥胖模型小鼠,顯示IGF2在肥胖小鼠白色脂肪組織中表達(dá)較普通喂養(yǎng)對(duì)照小鼠升高;②用不同濃度梯度的IGF2(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)分別處理前脂肪細(xì)胞3T3-L1后,用MTS系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,發(fā)現(xiàn)隨著IGF2作用時(shí)間的延長(zhǎng)和使用濃度的升高,MTS在490nm處的吸光度呈上升趨勢(shì),提示其增殖能力增強(qiáng);③不同濃度梯度IGF2干預(yù)3T3-L1細(xì)胞后,分別用Annexin V-FITC法及Hoechst33258染色法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IGF2對(duì)3T3-L1細(xì)胞凋亡能力無(wú)明顯影響;④ 采用傳統(tǒng)雞尾酒法白色誘導(dǎo)分化3T3-L1細(xì)胞后,用不同濃度的IGF2進(jìn)行細(xì)胞處理,用油紅O染色法分析脂肪細(xì)胞的分化程度顯示高濃度的IGF2可以增加3T3-L1細(xì)胞的分化程度,100ng/ml濃度IGF2處理組細(xì)胞的體積大小和脂滴形態(tài)較對(duì)照組(0ng/ml)大;⑤無(wú)論是流式細(xì)胞儀的定量檢測(cè)還是熒光顯微鏡的拍攝,結(jié)果都顯示隨著IGF2處理濃度的升高,3T3-L1誘導(dǎo)分化細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取增加(與0ng/mlIGF2對(duì)照組相比,10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlIGF2組熒光強(qiáng)度分別增加11.6%、22%、24.8%);⑥實(shí)時(shí)熒光定量qRT-PCR檢測(cè)顯示IGF2處理誘導(dǎo)分化3T3-L1細(xì)胞后PPARγ、PGC1α、LPL等基因mRNA水平表達(dá)上調(diào),而Leptin表達(dá)卻有一定程度下降;Western Blot方法檢測(cè)則發(fā)現(xiàn)隨著IGF2處理濃度升高,經(jīng)典胰島素信號(hào)通路中p-Akt蛋白表達(dá)升高。結(jié)論:IGF2在社區(qū)代謝綜合征患者血清樣本中較非代謝綜合征對(duì)照人群高表達(dá),且在高脂喂養(yǎng)肥胖模型小鼠白色脂肪組織中較普通喂養(yǎng)對(duì)照小鼠高表達(dá)。IGF2可呈時(shí)間和濃度梯度促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖和分化,但不影響其凋亡;隨著IGF2處理濃度的升高,3T3-L1細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取能力增加,其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)控糖脂代謝及分化相關(guān)基因的表達(dá)引起,同時(shí)影響下游經(jīng)典胰島素信號(hào)通路。
【關(guān)鍵詞】：胰島素樣生長(zhǎng)因子2 3T3-L1前脂肪細(xì)胞 增殖 分化 葡萄糖攝取
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R58
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 縮略詞表12-14
• 1 前言14-16
• 2 材料和方法16-37
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-20
• 2.2 溶液配置20-22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法22-37
• 3 結(jié)果37-51
• 3.1 IGF2的表達(dá)譜分析37-41
• 3.2 IGF2促進(jìn)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化41-46
• 3.3 IGF2增加3T3-L1誘導(dǎo)分化脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取46-48
• 3.4 IGF2對(duì)糖脂代謝相關(guān)基因表達(dá)變化及胰島素信號(hào)通路的影響48-51
• 4 討論51-54
• 5 總結(jié)54-55
• 6 展望55-56
• 7 參考文獻(xiàn)56-59
• 綜述 胰島素樣生長(zhǎng)因子-2:在代謝和內(nèi)分泌疾病中的作用59-76
• 參考文獻(xiàn)69-76
• 作者簡(jiǎn)介76
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文76

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7 張旭U，

本文編號(hào)：1012805