本文關鍵詞：胰島素樣生長因子2對3T3-L1前脂肪細胞增殖、分化和葡萄糖攝取的影響

  更多相關文章： 胰島素樣生長因子2 3T3-L1前脂肪細胞 增殖 分化 葡萄糖攝取

【摘要】：目的:胰島素樣生長因子2(IGF2)是在細胞分裂時廣泛表達的多肽激素。盡管胰島素樣生長因子在血清中豐富存在,但與胰島素和胰島素樣生長因子1(IGF1)比較,對于IGF2的生理及病理作用的研究是有限的。IGF2調節(jié)胎兒的生長和分化,但在成人中的作用知之甚少。有證據表明IGF2主要在骨骼肌、脂肪組織、骨骼和卵巢中發(fā)揮作用。IGF2表達的改變可在代謝狀態(tài)、肥胖、糖尿病和多囊卵巢綜合征中觀察到。本研究擬觀察IGF2對前脂肪細胞3T3-L1增殖、分化以及對葡萄糖攝取功能的影響,并初步探討其影響3T3-L1作用的可能分子機制。方法:①用ELISA試劑盒檢測社區(qū)代謝綜合征患者和非代謝綜合征對照人群血清樣本以及實時熒光定量qPCR檢測高脂喂養(yǎng)肥胖模型小鼠和普通喂養(yǎng)對照小鼠不同組織樣本中IGF2的表達情況。②培養(yǎng) 3T3-L1 前脂肪細胞,按 Ong/m1、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml 的 IGF2濃度梯度進行干預,以Promega公司的CellTiter 96(?)AQueous單溶液檢測系統(tǒng)(MTS)檢測細胞增殖能力。③ 培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細胞,按不同濃度梯度IGF2進行干預,用Annexin V-FITC法及Hoechst33258染色法檢測不同濃度IGF2對3T3-L1細胞凋亡能力的影響。④采用含胰島素、地塞米松與IBMX的分化培養(yǎng)基誘導分化3T3-L1細胞,并用不同濃度的IGF2進行細胞處理,用油紅O染色法分析脂肪細胞的分化程度。⑤分別采用熒光顯微鏡和流式細胞儀定量檢測平均熒光強度觀察不同濃度IGF2對3T3-L1誘導分化細胞對于熒光標記2-脫氧葡萄糖(2-NBDG)的攝取能力。⑥利用實時熒光定量qRT-PCR的方法對不同濃度IGF2處理誘導分化3T3-L1細胞后維持分化相關轉錄因子(PPARy、CEBPβ等)、脂代謝關鍵酶(LPL、FAS等)及脂因子(Leptin、Adiponectin等)基因mRNA表達水平進行檢測,利用Western Blot方法檢測經典胰島素信號通路Akt及p-Akt蛋白的表達變化,以尋找IGF2影響3T3-L1細胞增殖分化的可能調控基因。結果:①社區(qū)代謝綜合征患者血清中IGF2表達水平較非代謝綜合征對照人群顯著升高;IGF2在正常小鼠肌肉及脂肪來源的組織中存在較高水平表達;成功構建高脂喂養(yǎng)肥胖模型小鼠,顯示IGF2在肥胖小鼠白色脂肪組織中表達較普通喂養(yǎng)對照小鼠升高;②用不同濃度梯度的IGF2(0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)分別處理前脂肪細胞3T3-L1后,用MTS系統(tǒng)檢測細胞增殖能力,發(fā)現(xiàn)隨著IGF2作用時間的延長和使用濃度的升高,MTS在490nm處的吸光度呈上升趨勢,提示其增殖能力增強;③不同濃度梯度IGF2干預3T3-L1細胞后,分別用Annexin V-FITC法及Hoechst33258染色法檢測發(fā)現(xiàn)IGF2對3T3-L1細胞凋亡能力無明顯影響;④ 采用傳統(tǒng)雞尾酒法白色誘導分化3T3-L1細胞后,用不同濃度的IGF2進行細胞處理,用油紅O染色法分析脂肪細胞的分化程度顯示高濃度的IGF2可以增加3T3-L1細胞的分化程度,100ng/ml濃度IGF2處理組細胞的體積大小和脂滴形態(tài)較對照組(0ng/ml)大;⑤無論是流式細胞儀的定量檢測還是熒光顯微鏡的拍攝,結果都顯示隨著IGF2處理濃度的升高,3T3-L1誘導分化細胞對葡萄糖的攝取增加(與0ng/mlIGF2對照組相比,10ng/ml、50ng/ml、100ng/mlIGF2組熒光強度分別增加11.6%、22%、24.8%);⑥實時熒光定量qRT-PCR檢測顯示IGF2處理誘導分化3T3-L1細胞后PPARγ、PGC1α、LPL等基因mRNA水平表達上調,而Leptin表達卻有一定程度下降;Western Blot方法檢測則發(fā)現(xiàn)隨著IGF2處理濃度升高,經典胰島素信號通路中p-Akt蛋白表達升高。結論:IGF2在社區(qū)代謝綜合征患者血清樣本中較非代謝綜合征對照人群高表達,且在高脂喂養(yǎng)肥胖模型小鼠白色脂肪組織中較普通喂養(yǎng)對照小鼠高表達。IGF2可呈時間和濃度梯度促進3T3-L1前脂肪細胞的增殖和分化,但不影響其凋亡;隨著IGF2處理濃度的升高,3T3-L1細胞對葡萄糖的攝取能力增加,其機制可能是通過調控糖脂代謝及分化相關基因的表達引起,同時影響下游經典胰島素信號通路。
【關鍵詞】：胰島素樣生長因子2 3T3-L1前脂肪細胞 增殖 分化 葡萄糖攝取
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R58
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 縮略詞表12-14
• 1 前言14-16
• 2 材料和方法16-37
• 2.1 實驗材料16-20
• 2.2 溶液配置20-22
• 2.3 實驗方法22-37
• 3 結果37-51
• 3.1 IGF2的表達譜分析37-41
• 3.2 IGF2促進3T3-L1前脂肪細胞增殖和分化41-46
• 3.3 IGF2增加3T3-L1誘導分化脂肪細胞葡萄糖攝取46-48
• 3.4 IGF2對糖脂代謝相關基因表達變化及胰島素信號通路的影響48-51
• 4 討論51-54
• 5 總結54-55
• 6 展望55-56
• 7 參考文獻56-59
• 綜述 胰島素樣生長因子-2:在代謝和內分泌疾病中的作用59-76
• 參考文獻69-76
• 作者簡介76
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文76

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本文編號：1012805