本文關(guān)鍵詞：內(nèi)源性ω-3 PUFAs增加對(duì)小鼠體重及腸道益生菌的影響

  更多相關(guān)文章： ω-3 PUFA 體重 下丘腦飲食相關(guān)基因 自噬 腸道益生菌

【摘要】：目的以fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠為模型,提高內(nèi)源性ω-3多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)水平,研究對(duì)小鼠體重的影響,及其作用機(jī)理。方法采用fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠與普通C57/BL6小鼠雜交,獲得同窩雄性小鼠。通過(guò)基因鑒定,將6周齡小鼠分為fat-1轉(zhuǎn)基因組和非轉(zhuǎn)基因組。每周測(cè)量小鼠體重和體長(zhǎng),持續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死兩組小鼠,稱量小鼠內(nèi)臟周圍脂肪質(zhì)量;取血測(cè)定各組小鼠血清中血糖(BG)、甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)水平;采用熒光定量PCR,對(duì)下丘腦飲食相關(guān)基因Neuropeptide Y(NPY)、Cocaine and amphetamine regulated transcript(CART)、Agouti-related peptides(Ag RP)、Proopiomelanocortin(POMC)、Ghrelin和Nestifatin-1以及糞便中益生菌Bifidobacteria(Bif)和Lactobacillius(Lac)進(jìn)行相對(duì)定量分析;采用Western blotting,對(duì)小腸組織LC3及P62分析。結(jié)果轉(zhuǎn)基因小鼠的體重/體長(zhǎng)明顯低于非轉(zhuǎn)基因小鼠(P0.05);轉(zhuǎn)基因小鼠血清中BG、TG、TC水平均低于非轉(zhuǎn)基因小鼠,且存在顯著性差異(P0.05);轉(zhuǎn)基因小鼠腸道菌群中的益生菌Bif和Lac表達(dá)量明顯高于非轉(zhuǎn)基因小鼠(P0.05)。fat-1小鼠與其同窩野生型小鼠相比,體內(nèi)下丘腦飲食相關(guān)基因NPY、Ag RP、和Nestifatin-1 m RNA的相對(duì)表達(dá)量顯著下調(diào)(P0.05),CART、POMC和Ghrelin m RNA的相對(duì)表達(dá)量顯著上調(diào)(P0.05)。小腸組織中LC3II/I,轉(zhuǎn)基因小鼠均比非轉(zhuǎn)基因小鼠表達(dá)量高(P0.05),Sequestosome-1(P62)在轉(zhuǎn)基因小鼠中比非轉(zhuǎn)基因小鼠表達(dá)量低,并且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)含有的ω-3 PUFA脫氫酶增加了其體內(nèi)內(nèi)源性ω-3 PUFAs,從而降低體內(nèi)ω-6/ω-3 PUFAs比值,影響了小鼠下丘腦飲食相關(guān)基因的表達(dá)及小腸組織中自噬的情況,因而降低了小鼠體重并有利于益生菌的增加。
【關(guān)鍵詞】：ω-3 PUFA 體重 下丘腦飲食相關(guān)基因 自噬 腸道益生菌
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R589.2
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料8-11
• 1.1 實(shí)驗(yàn)器材8
• 1.2 配方及試劑8-9
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物9-10
• 1.4 樣本10
• 1.5 常用軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)10-11
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法11-20
• 2.1 小鼠體重、體長(zhǎng)及臟器周圍脂肪重量的測(cè)定11
• 2.2 鼠尾DNA的鑒定11-12
• 2.3 糞便樣品的處理及腸道細(xì)菌總DNA的提取12-13
• 2.4 質(zhì)粒構(gòu)建13-14
• 2.4.1 感受態(tài)、載體、引物及測(cè)序13
• 2.4.2 目的片段的擴(kuò)增13
• 2.4.3 PCR產(chǎn)物的回收13-14
• 2.4.4 基因克隆文庫(kù)的構(gòu)建及測(cè)序14
• 2.4.4.1 連接反應(yīng)14
• 2.4.4.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、陽(yáng)性克隆的挑選及送測(cè)14
• 2.5 血清相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定14-15
• 2.5.1 血糖（BG）的測(cè)定14-15
• 2.5.2 甘油三酯（TG）的測(cè)定15
• 2.5.3 總膽固醇（TC）的測(cè)定15
• 2.6 RNA提取15-16
• 2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR16-17
• 2.7.1 腸道菌群的實(shí)時(shí)定量16-17
• 2.7.2 下丘腦飲食相關(guān)基因的實(shí)時(shí)定量17
• 2.8 Western Blot檢測(cè)LC3和P62蛋白表達(dá)17-19
• 2.8.1 蛋白樣品的制備17
• 2.8.2 Western Blot17-19
• 2.8.2.1 SDS-電泳17-18
• 2.8.2.2 電轉(zhuǎn)18
• 2.8.2.3 免疫反應(yīng)18-19
• 2.8.2.4 化學(xué)發(fā)光、顯影、定影19
• 2.9 數(shù)據(jù)處理19-20
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-26
• 3.1 鼠尾DNA鑒定結(jié)果20
• 3.2 體重/體長(zhǎng)分析結(jié)果20-21
• 3.3 血糖及血清的相關(guān)指標(biāo)21-22
• 3.4 臟器周圍脂肪重量的測(cè)定結(jié)果22
• 3.5 腸道益生菌測(cè)定分析結(jié)果22-23
• 3.6 下丘腦飲食相關(guān)基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量分析23-24
• 3.7 自噬相關(guān)基因LC3和P62在小腸組織中的表達(dá)24-26
• 第四章 討論26-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-35
• 綜述35-42
• 綜述參考文獻(xiàn)39-42
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果42-43
• 致謝43-44

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本文編號(hào)：1005290