本文關(guān)鍵詞：S100A8蛋白質(zhì)與泌尿系草酸鈣結(jié)石的相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： 草酸鈣結(jié)石 尿液蛋白 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 S100A8

【摘要】：目的:通過(guò)觀察草酸鈣結(jié)石病人尿液中S100A8蛋白質(zhì)與健康人尿液中S100A8蛋白質(zhì)差異性表達(dá)程度,以及在體外模型中對(duì)比不同濃度的S100A8蛋白質(zhì)的變化,探討S100A8蛋白質(zhì)在草酸鈣結(jié)石形成過(guò)程中的功能。在體外構(gòu)建草酸鈣結(jié)晶模型,采用種晶技術(shù)檢測(cè)不同濃度的S100A8蛋白質(zhì)對(duì)體外草酸鈣(Ca Ox)結(jié)石晶體生長(zhǎng)抑制指數(shù),檢測(cè)其結(jié)晶誘導(dǎo)時(shí)間,成核和聚集速率。在體外觀察不同濃度的S100A8蛋白質(zhì)對(duì)草酸鈣晶型形成的影響。方法:(1)收集從2014年9月至2015年9月期間我院通過(guò)手術(shù)取石術(shù)后臨床上尿路結(jié)石標(biāo)本并進(jìn)行結(jié)石成分分析得到草酸鈣成分的標(biāo)本共50例,收集相應(yīng)草酸鈣結(jié)石病人入院后手術(shù)前晨尿標(biāo)本,共50例,及健康人(未患結(jié)石疾病)尿液標(biāo)本50例。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)分別檢測(cè)草酸鈣結(jié)石標(biāo)本、結(jié)石病人尿液標(biāo)本和健康人尿液標(biāo)本中的S100A8蛋白濃度。(2)采用種晶技術(shù)構(gòu)建體外結(jié)石晶體模型,設(shè)置多組不同濃度梯度的S100A8蛋白,將其加入上述各模型中,使S100A8蛋白質(zhì)對(duì)結(jié)石模型充分混合進(jìn)行反應(yīng)與作用,使用原子吸收分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),計(jì)算并統(tǒng)計(jì)草酸鈣晶體生長(zhǎng)抑制指數(shù)。(3)使用原子吸收分光光度計(jì)檢測(cè)加入不同濃度S100A8蛋白質(zhì)的草酸鈣溶液的吸光度值,并繪制成核聚集曲線,計(jì)算草酸鈣晶體生長(zhǎng)誘導(dǎo)時(shí)間,成核速率和聚集速率。(4)在體外構(gòu)建的草酸鈣模型中,加入不同濃度的S100A8蛋白質(zhì),使用電子顯微鏡進(jìn)行觀察,了解所形成的草酸鈣結(jié)石晶體形貌、尺寸大小以及不同晶體的所占的比例。(5)統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)用(?)±s表示,使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩組數(shù)據(jù)比較,采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,多組數(shù)據(jù)間比較,采用單因素方差分析。結(jié)果:(1)草酸鈣結(jié)石標(biāo)本中含有S100A8蛋白質(zhì),且其濃度值的范圍為:6.231±0.251ng/m L。(2)草酸鈣結(jié)石病人尿液中及健康人(未患結(jié)石疾病)尿液標(biāo)本中均含有S100A8蛋白質(zhì),但是草酸鈣結(jié)石病人尿液標(biāo)本中的S100A8蛋白質(zhì)濃度范圍為:56.258±0.229ng/m L,而健康人(未患結(jié)石疾病)尿液標(biāo)本中的S100A8蛋白質(zhì)濃度范圍為:13.589±0.236ng/m L,實(shí)驗(yàn)組和正常組對(duì)比,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�？梢钥闯霾菟徕}結(jié)石病人的尿液標(biāo)本中的S100A8蛋白質(zhì)濃度明顯高于健康人尿液標(biāo)本。(3)體外實(shí)驗(yàn)表明不同濃度的S100A8蛋白質(zhì)體外對(duì)草酸鈣結(jié)晶生長(zhǎng)的抑制作用:隨蛋白質(zhì)濃度增加,它對(duì)草酸鈣結(jié)石晶體生長(zhǎng)的抑制指數(shù)逐漸降低,而且,組間差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)通過(guò)分光光度計(jì)將各組加有不同濃度的S100A8蛋白質(zhì)的草酸鈣溶液進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)算晶體最大誘導(dǎo)時(shí)間T_(max)、成核速率S_N和聚集速率S_A參數(shù)值比較發(fā)現(xiàn),在添加不同濃度S100A8蛋白質(zhì)的情況下,T_(max)減少,S_N和S_A都有所上升,且隨著蛋白質(zhì)濃度的升高,T_(max)逐漸減小,而S_N和S_A逐漸增大。(5)在S100A8蛋白質(zhì)干預(yù)的草酸鈣結(jié)石模型中,均有截面為六邊形的晶體與雙四棱錐型的晶體產(chǎn)生,但是不同晶型的比例有區(qū)別。隨著S100A8蛋白質(zhì)濃度的增加,截面為六邊形的晶體的比例和尺寸大小逐漸增大,雙四棱錐型的晶體比例和尺寸大小逐漸減小。結(jié)論:(1)泌尿系草酸鈣結(jié)石中含有一定量的S100A8蛋白質(zhì)。(2)草酸鈣結(jié)石病人尿液中及健康人(未患結(jié)石疾病)尿液標(biāo)本中均含有S100A8蛋白質(zhì),且草酸鈣結(jié)石病人尿液S100A8蛋白質(zhì)濃度高于健康人,其差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)S100A8蛋白質(zhì)在隨著濃度的升高,在體外的草酸鈣晶體能夠有效地促進(jìn)尿草酸鈣晶體成核和聚集。(4)低濃度S100A8蛋白質(zhì)干預(yù)所形成的草酸鈣晶體類(lèi)型為COD,不易粘附和沉積,更有利于人體排出,而高濃度的S100A8蛋白質(zhì)干預(yù)所形成的草酸鈣晶體類(lèi)型為COM,不易隨尿液排出。(5)草酸鈣結(jié)石患者結(jié)石標(biāo)本中的S100A8蛋白質(zhì)的過(guò)度表達(dá)及其尿液中S100A8濃度的升高可能是草酸鈣結(jié)石(Ca Ox)形成和生長(zhǎng)的非常重要的影響因素。(6)體外種晶技術(shù)能有效地構(gòu)建草酸鈣結(jié)石模型,并能檢驗(yàn)蛋白質(zhì)大分子對(duì)結(jié)石形成過(guò)程中的功能研究。
【關(guān)鍵詞】：草酸鈣結(jié)石 尿液蛋白 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 S100A8
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R691.4
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 中英文縮略詞表11-12
• 第1章 引言12-18
• 1.1 大分子蛋白質(zhì)在結(jié)石形成和生長(zhǎng)中有重要意義12-13
• 1.2 S100A8蛋白質(zhì)可能參與草酸鈣結(jié)石形成過(guò)程13-14
• 1.3 S100A8可能通過(guò)炎癥反應(yīng)調(diào)控腎草酸鈣結(jié)石形成14-16
• 1.4 草酸鈣結(jié)石的體外研究16-18
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法18-29
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 2.1.1 結(jié)石標(biāo)本收集18
• 2.1.2 研究對(duì)象篩選18
• 2.1.3 尿液標(biāo)本收集18-19
• 2.1.4 研究對(duì)象篩選19-20
• 2.2 主要儀器和試劑20-23
• 2.2.1 主要儀器20
• 2.2.2 主要試劑20-21
• 2.2.3 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑的配制21-22
• 2.2.4 不同濃度S100A8蛋白質(zhì)的配制22
• 2.2.5 草酸鈣籽晶懸液配制22
• 2.2.6 草酸鈣亞穩(wěn)過(guò)飽和液的配制22
• 2.2.7 晶體生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)溶液的配制22-23
• 2.3 研究方法23-28
• 2.3.1 結(jié)石成分分析23-24
• 2.3.2 提取結(jié)石蛋白24
• 2.3.3 丙酮法提取尿液蛋白24-25
• 2.3.4 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)泌尿系結(jié)石標(biāo)本中S100A8蛋白質(zhì)的表達(dá)25
• 2.3.5 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)草酸鈣結(jié)石病人與健康人尿液標(biāo)本中S100A8蛋白質(zhì)的表達(dá)25-26
• 2.3.6 S100A8蛋白質(zhì)對(duì)草酸鈣結(jié)石晶體生長(zhǎng)抑制指數(shù)的影響26-27
• 2.3.7 S100A8蛋白質(zhì)對(duì)草酸鈣結(jié)晶的動(dòng)力學(xué)影響研究27-28
• 2.3.8 S100A8蛋白質(zhì)對(duì)草酸鈣結(jié)石晶體形貌及大小等方面的影響28
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析28-29
• 第3章 結(jié)果與分析29-41
• 3.1 結(jié)石成分分析結(jié)果29-31
• 3.2 ELISA法檢測(cè)草酸鈣結(jié)石標(biāo)本中S100A8蛋白濃度31-32
• 3.3 ELISA法檢測(cè)草酸鈣結(jié)石病人及健康人尿液標(biāo)本中S100A8蛋白質(zhì)濃度32-34
• 3.4 不同濃度S100A8蛋白質(zhì)對(duì)草酸鈣結(jié)石的生長(zhǎng)抑制指數(shù)34-36
• 3.5 不同濃度的S100A8蛋白質(zhì)對(duì)草酸鈣結(jié)晶的動(dòng)力學(xué)影響36-38
• 3.6 不同濃度的S100A8蛋白質(zhì)對(duì)草酸鈣結(jié)石中的晶體形成的影響38-41
• 第4章 討論41-47
• 4.1 蛋白質(zhì)大分子與結(jié)石基質(zhì)41-42
• 4.2 S100A8蛋白質(zhì)與體外草酸鈣結(jié)石形成42-44
• 4.3 S100A8蛋白質(zhì)在體內(nèi)參與酸鈣結(jié)石形成的可能機(jī)制44-45
• 4.4 S100A8蛋白質(zhì)可否作為泌尿系結(jié)石形成的標(biāo)志物45-47
• 第5章 結(jié)論47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 綜述55-60
• 參考文獻(xiàn)58-60

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本文編號(hào)：973890