本文關(guān)鍵詞：對甲酚激活單核細胞導(dǎo)致微炎癥狀態(tài)

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【摘要】：研究背景:慢性腎病(Chronic kidney disease CKD)是腎內(nèi)科常見疾病,患病率達8%-10%,其晚期并發(fā)癥多,死亡率高,是人類生存的重要威脅之一。CKD患者中約有70%死于心血管疾病(50%)和感染(20%),兩者都是由免疫應(yīng)答改變造成的[1]。在尿毒癥患者中,一方面免疫防御能力被抑制,機體感染可能性升高;另一方面,免疫細胞的預(yù)活化及活化誘發(fā)了炎癥以及心血管疾病,尤其當(dāng)免疫反應(yīng)不能被有效控制時,它就變成了一把雙刃劍[2]。因而,免疫反應(yīng)在CKD病程進展過程中發(fā)揮重要的作用。營養(yǎng)不良-炎癥-動脈粥樣硬化綜合征的提出[3],較好的闡述了尿毒癥患者炎癥狀態(tài)與其營養(yǎng)不良、動脈粥樣硬化及高死亡率之間的關(guān)系,而這一系列病癥的核心就是微炎癥。當(dāng)機體處于微炎癥狀態(tài)時,體內(nèi)的單核-巨噬細胞系統(tǒng)激活并釋放多種促炎癥細胞因子,從而引起炎癥性損傷,進一步加速了CKD的發(fā)生和發(fā)展。透析是CKD患者終末期替代治療方式之一,相關(guān)研究認為透析前的慢性腎功能衰竭患者就存在明顯的微炎癥狀態(tài)。而當(dāng)患者接受長期血液凈化后,炎癥反應(yīng)狀態(tài)仍然持續(xù)存在,這提示透析不能完全緩解患者的微炎癥狀態(tài)。尿毒癥毒素中有一部分毒素能與血清蛋白結(jié)合即蛋白結(jié)合毒素(protein-bound uremic toxins),現(xiàn)有透析手段不能將其有效清除。尿毒素對甲酚(P-cresol PC)是蛋白結(jié)合毒素中的一種,在腎臟功能受損的病人中,PC在血液中蓄積,并以94%的結(jié)合率與血清白蛋白結(jié)合。而常規(guī)透析方法對PC的清除率非常低,這使得其在尿毒癥患者體內(nèi)大量蓄積。已有研究證明有毒溶質(zhì)在體內(nèi)的蓄積可能影響單核細胞/巨噬細胞,使其不能維持有效的免疫反應(yīng)水平,進而引起傳染病或預(yù)激活,導(dǎo)致炎癥反應(yīng)[4]。但PC對單核細胞的影響及其具體機制尚不明確。研究目的:本研究擬以THP-1人單核細胞系為細胞模型,通過PC對細胞的處理,檢測其對細胞活性以及炎癥相關(guān)細胞因子表達水平的影響,從而探討PC對單核細胞的影響及其可能機制。研究方法:(1)體外培養(yǎng)thp-1細胞,分別用20mg/l、40mg/l、80mg/l、160mg/l濃度pc處理單核細胞,用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),用cck-8法(cellcountkit-8)檢測thp-1經(jīng)pc處理后的存活率。(2)體外培養(yǎng)thp-1細胞,分別用40mg/l、80mg/l濃度pc處理單核細胞24h后,用反轉(zhuǎn)錄pcr(rt-pcr)檢測單核細胞中腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α,tnf-α)和白細胞介素-10(interleukin-10,il-10)的mrna表達,免疫印跡(westernblot)法檢測單核細胞中tnf-α和il-10的蛋白表達水平,分析這些因子的表達變化與pc處理的關(guān)系。(3)體外培養(yǎng)thp-1細胞,分別用40mg/l、80mg/l濃度組pc處理單核細胞24h后,用rt-pcr及免疫印跡(westernblot)法檢測單核細胞中toll樣受體-4(toll-likereceptor4,tlr4)的表達,并分析其表達變化與前述炎癥相關(guān)因子表達變化的關(guān)系。結(jié)果:(1)thp-1細胞經(jīng)對甲酚處理6h后,20、40、80、160mg/l處理組細胞活力分別下降至正常對照組的88.18±7.81%、87.94±5.66%、76.03±4.55%、67.25±8.48%,而80、160mg/l的pc處理組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。pc處理12h及24h后,80mg/l處理組及160mg/l處理組對thp-1細胞增殖活力的抑制明顯,分別為正常水平的65.31±7.72%、55.17±6.24%及57.65±6.14%、52.99±9.07%,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)�？梢�,對甲酚呈濃度依賴性抑制thp-1細胞增殖。(2)對甲酚處理thp-1細胞24h后,細胞tnf-α的mrna表達水平顯著升高,80mg/l濃度組升高達1.86±0.13倍,高于40mg/l濃度組的1.20±0.06倍,且80mg/l濃度組與對照組相比,tnf-α的mrna表達水平升高顯著(p0.05);il-10的mrna表達水平在pc處理后逐漸降低,80mg/l處理組降低為對照組的66±13%,且降低顯著(p0.05)。pc可在核酸水平及蛋白水平促進tnf-α促炎因子的表達,并抑制il-10抑炎因子的表達。(3)對甲酚處理thp-1細胞24h后,80mg/l處理組的細胞中tlr-4的mrna表達水平升高至對照組的2.67±0.11倍,升高程度高于40mg/l處理組的2.08±0.10倍,且80mg/l處理組與對照組相比,tlr-4的升高顯著(p0.05)。細胞中tlr-4的蛋白表達水平也有顯著升高,且80mg/l處理組升高程度高于40mg/l處理組,而80mg/l處理組的升高顯著(p0.05)。pc可能通過tlr-4通路激活單核細胞,介導(dǎo)炎癥因子釋放,從而導(dǎo)致微炎癥狀態(tài)。結(jié)論:對甲酚對THP-1細胞增殖水平的抑制是呈濃度依賴性的,而且對甲酚可以抑制抑炎因子IL-10的表達,并可能通過上調(diào)TLR-4的表達水平,增加TNF-α促炎因子的釋放,從而導(dǎo)致微炎癥狀態(tài)。
【關(guān)鍵詞】：微炎癥 單核細胞 尿毒癥 對甲酚
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 對甲酚對THP-1 細胞體外釋放炎癥因子的影響13-31
• 2.1 材料與方法13-23
• 2.2 結(jié)果23-28
• 2.3 討論28-31
• 第三章 對甲酚激活TLR-4 通路影響THP-1 細胞炎癥因子的釋放31-42
• 3.1 材料與方法31-38
• 3.2 結(jié)果38-39
• 3.3 討論39-42
• 全文總結(jié)42-43
• 參考文獻43-46
• 文獻綜述 尿毒癥患者免疫狀態(tài)研究進展46-53
• 參考文獻50-53
• 碩士期間發(fā)表論文53-54
• 致謝54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 晏子友;;慢性腎功能衰竭微炎癥狀態(tài)的研究概況[J];中國醫(yī)藥科學(xué);2013年02期

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本文編號：963450