本文關(guān)鍵詞：PAX2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建及對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲能力的作用研究

  更多相關(guān)文章： PAX基因 細(xì)胞侵襲 細(xì)胞運(yùn)動(dòng) 腎小管 上皮細(xì)胞 大鼠

【摘要】：目的探討PAX2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建及生物學(xué)作用。方法選擇處于對(duì)數(shù)生長期大鼠腎小管上皮細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為穩(wěn)轉(zhuǎn)組、空載組、對(duì)照組。穩(wěn)轉(zhuǎn)組采用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)導(dǎo)將p EGFP-PAX2轉(zhuǎn)入大鼠腎小管上皮細(xì)胞,空載組采用同樣方法配置空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染溶液,對(duì)照組不添加質(zhì)粒轉(zhuǎn)染溶液。經(jīng)G418篩選,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PAX2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的細(xì)胞遷移率及細(xì)胞侵襲作用。結(jié)果應(yīng)用G418篩選14 d,穩(wěn)轉(zhuǎn)組大鼠腎小管上皮細(xì)胞有明顯克隆長出,建立PAX2基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染腎小管上皮細(xì)胞系。穩(wěn)轉(zhuǎn)組在熒光顯微鏡下可見綠色熒光,基因融合表達(dá)獲得成功。穩(wěn)轉(zhuǎn)組細(xì)胞PAX2條帶密度與β-action吸光度比值為(1.00±0.04),空載組為(0.83±0.03),對(duì)照組為(0.85±0.04),3組吸光度比值比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=398.7,P0.05);其中穩(wěn)轉(zhuǎn)組吸光度比值高于空載組和對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。細(xì)胞劃痕后18 h,對(duì)照組、空載組和穩(wěn)轉(zhuǎn)組細(xì)胞遷移率分別為(39.34±5.34)%、(40.56±7.54)%和(83.72±7.12)%,3組細(xì)胞遷移率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=431.8,P0.05);其中穩(wěn)轉(zhuǎn)組細(xì)胞遷移率高于對(duì)照組和空載組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后,對(duì)照組、空載組和穩(wěn)轉(zhuǎn)組遷移細(xì)胞分別為(23.33±3.63)、(22.00±8.14)、(45.67±7.14),3組遷移細(xì)胞數(shù)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=248.5,P0.05);其中穩(wěn)轉(zhuǎn)組遷移細(xì)胞數(shù)高于對(duì)照組和空載組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 p EGFP-PAX2質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染大鼠腎小管上皮細(xì)胞,并成功篩選出高效穩(wěn)定表達(dá)PAX2的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。PAX2穩(wěn)轉(zhuǎn)增加了腎小管上皮細(xì)胞的遷移及侵襲能力。
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科;遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科;中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院小兒腎臟風(fēng)濕免疫科;
【關(guān)鍵詞】： PAX基因 細(xì)胞侵襲 細(xì)胞運(yùn)動(dòng) 腎小管 上皮細(xì)胞 大鼠
【基金】：遼寧省博士科研啟動(dòng)基金計(jì)劃資助項(xiàng)目(20141136)
【分類號(hào)】：R692
【正文快照】： Study on the Construction of PAX2 Stably Transfected Cell Lines and Their Effects on Cell Migration and InvasionAbility LI Li,GONG Liang,WU Yu-bin.Department of Rheumatology and Immunology,the First Affiliated Hospital ofLiaoning Medical University,Jinzh

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本文編號(hào)：955053