本文關(guān)鍵詞：黃葵素對DN大鼠模型及腎系膜細胞NF-κB信號通路干預(yù)作用的研究

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【摘要】：目的：1.從分子、細胞及動物模型水平多層次探討糖尿病腎病背景下腎臟局部NF-κB通路激活,及其對糖尿病腎病的影響。2.評估黃葵素降低蛋白尿的作用,明確其對NF-κB通路與下游炎癥因子的影響。材料和方法：1.動物實驗：雄性SD大鼠隨機分為正常對照組、糖腎對照組、陽性藥對照組(厄貝沙坦12mg/Kg)以及不同劑量黃葵素治療組(75mg/Kg/d、135mg/Kg/d、 300mg/Kg/d),正常對照組10只,其余各組40只。選擇高糖高脂飲食結(jié)合低劑量鏈脲菌素(STZ)誘導(dǎo)SD大鼠制備DM模型,該模型早期表現(xiàn)為高血糖,后期出現(xiàn)蛋白尿等DN表現(xiàn),體現(xiàn)了DM進行性腎損害的特點。DN成模后,所有藥物均灌胃給藥,正常對照組、糖腎對照組每日接受等量生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥8周后收集標(biāo)本,ELISA法檢測大鼠血清及腎組織TNF-a、IL-1β和IL-6表達水平；免疫組化檢測腎組織NF-κB的表達水平；Western-blot檢測腎組織細胞核的NF-κB p65蛋白表達水平；Q-PCR檢測腎組織NF-κB p65、 TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA的表達。2.體外實驗：將大鼠腎小球系膜細胞(GMC)分為空白血清組、TNF-a組、藥物血清加TNF-a組。體外培養(yǎng)24小時,加入血清36h后,加入濃度為10ng/ml的TNF-a誘導(dǎo)損傷12h,雙熒光素酶報告基因檢測大鼠腎系膜細胞中NF-κB p65轉(zhuǎn)錄水平；ELISA法驗證上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的表達水平。結(jié)果：1.藥物干預(yù)各組均能延緩大鼠體重下降,與糖腎組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。黃葵素高劑量組及厄貝沙坦組可顯著改善DN大鼠的血糖,降低尿ACR,與糖腎組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2ELISA結(jié)果示,與糖腎組相比,黃葵素中劑量組可顯著降低DN大鼠血清中TNF-a水平,腎組織中IL-6的分泌水平(P0.05)；黃葵素高劑量組可抑制DN大鼠血清和腎組織中TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌水平,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；厄貝沙坦組可顯著降低血清及腎組織中IL-6、IL-1β的分泌水平,血清中TNF-a的水平也得到抑制,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3Q-PCR結(jié)果示,與糖腎模型組比較,藥物干預(yù)各組腎組織中TNF-a、IL-1β和IL-6的mRNA表達水平均有所下降,黃葵素高劑量組、厄貝沙坦組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.免疫組化結(jié)果示,藥物干預(yù)各組腎組織細胞核中NF-κB p65表達水平均有下降,其中黃葵素高劑量組及厄貝沙坦組與糖腎組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5WesternBlot結(jié)果示藥物干預(yù)后各組腎組織細胞核中NF-κB p65蛋白的表達水平均有下降,但總mRNA表達水平與與糖腎組比較,無明顯差異(P0.05)。6.大鼠腎系膜細胞胞內(nèi)luciferase assay實驗結(jié)果顯示,TNF-a能夠誘導(dǎo)胞內(nèi)NF-κB信號活性上調(diào),而經(jīng)過含有黃葵素血清處理的細胞內(nèi),此上調(diào)趨勢受到顯著抑制,經(jīng)含藥血清處理的GMC細胞上清液中,TNF-a、IL-1β、IL-6的分泌均顯著性下調(diào),與TNF-a組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論：1.糖尿病背景下腎臟局部NF-κB通路激活,誘發(fā)炎癥反應(yīng)釋放炎癥因了,導(dǎo)致蛋白尿的發(fā)生及發(fā)展。2.黃葵素可顯著緩解糖尿病腎病尿蛋白,其腎保護機制可能與抑制NF-κB p65炎性反應(yīng)信號通路,降低促炎因了釋放有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：黃葵素 糖尿病腎病 NF-κB 炎癥
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 第一部分 理論研究12-25
• 1. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)DN研究進展12-17
• 1.1 發(fā)病機制12-16
• 1.1.1 氧化應(yīng)激12-13
• 1.1.2 多元醇通路13-14
• 1.1.3 血流動力學(xué)14-15
• 1.1.4 炎癥狀態(tài)及經(jīng)典炎癥因子15
• 1.1.5 NF-κB信號通路與DN15-16
• 1.2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療進展簡述16-17
• 2. 中醫(yī)淺析糖尿病腎病17-25
• 2.1 病名溯源17-18
• 2.2 病因病機18-19
• 2.3 糖尿病腎病中醫(yī)治療進展19-25
• 2.3.1 辯證論治19-22
• 2.3.2 單味中藥及中藥提取物治療糖尿病腎病進展22-25
• 第二部分 實驗部分25-42
• 1. 實驗材料25-27
• 1.1 實驗動物25
• 1.2 實驗藥物25
• 1.3 主要實驗試劑及耗材25-26
• 1.4 實驗儀器26
• 1.5 主要實驗溶液26-27
• 2. 實驗方法27-31
• 2.1 體內(nèi)實驗27-28
• 2.1.1 DN大鼠模型的建立27
• 2.1.2 動物給藥27
• 2.1.3 大鼠尿液、血消和腎臟標(biāo)本采集27-28
• 2.2 體外實驗部分28-30
• 2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析30-31
• 3. 結(jié)果31-39
• 3.1 黃葵素能緩解DN大鼠的一般癥狀31-33
• 3.2 黃葵素能抑制大鼠血清及腎組織炎癥因子的分泌33-35
• 3.3 黃葵素抑制大鼠腎組織中NF-κB信號通路35-38
• 3.4 黃葵素能抑制GMC中NF-κB信號通路活性38-39
• 4. 討論39-42
• 1、本次研究的主要成果41
• 2、本次研究存在的不足和展望41-42
• 參考文獻42-46
• 附錄46-48
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果48-49
• 致謝49

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本文編號：943549