發(fā)布時(shí)間：2017-09-28 20:01

  本文關(guān)鍵詞：AngⅡ在大鼠膜性腎病中對(duì)足細(xì)胞凋亡的影響

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【摘要】：目的:探討MN時(shí),Ang II及TGF-β1/P38MAPK通路在足細(xì)胞凋亡中的影響及發(fā)生機(jī)制。方法:雄性SD大鼠120只隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組)、模型組(B組)、造模+貝那普利干預(yù)組(C組)、貝那普利對(duì)照組(D組),每組30只。A組、D組,不預(yù)免,不造模,隔日尾靜脈注射2ml生理鹽水(NS)替代C-BSA,其余兩組均按改良Border法[1]復(fù)制MN大鼠模型;同時(shí),C組、D組于正式預(yù)免的第1周起,每日以貝那普利(10mg/kg/d)灌胃,而A、B組每日以等量NS代替貝那普利灌胃。正式免疫第1、2、3、4、5、6周末每組各取5只殺檢,取24h尿液檢測(cè)24h尿蛋白定量(24h UTP);取血清檢測(cè)Alb、TG、TC、Scr、BUN;取大鼠腎臟組織制成病理切片進(jìn)行光鏡及免疫熒光鑒定成模情況,同時(shí)用免疫組織化學(xué)方法動(dòng)態(tài)檢測(cè)腎小球中TGF-β1、P38MAPK、Bax、Bcl-2、WT1蛋白的表達(dá)含量,用TUNEL法檢測(cè)各觀察時(shí)間點(diǎn)腎小球細(xì)胞凋亡情況并計(jì)算凋亡指數(shù)(AI),用Elisa法檢測(cè)腎組織勻漿在各觀察時(shí)間點(diǎn)Ang II含量。結(jié)果:(1)腎臟形態(tài)學(xué)改變:A、D組,各觀察時(shí)間點(diǎn)腎臟顏色形態(tài)正常,腎組織未見(jiàn)形態(tài)學(xué)改變,免疫熒光未見(jiàn)Ig G顆粒狀沉積;B、C組,隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng),腎臟體積逐漸增大,顏色逐漸變淺至蒼白色,腎臟病理?yè)p傷逐漸加重,腎小球毛細(xì)血管襻Ig G熒光顆粒狀沉積明顯。至第4周末時(shí),腎臟呈“大白腎”樣外觀---形態(tài)腫大,色蒼白;光鏡下HE染色可見(jiàn)腎小球腫大明顯,基底膜(GBM)彌漫性增厚,部分球囊腔狹窄明顯;Masson染色可見(jiàn)部分腎小球上皮下嗜復(fù)紅蛋白沉積,系膜區(qū)及腎間質(zhì)可見(jiàn)藍(lán)色陽(yáng)性物質(zhì)沉積,PASM染色可見(jiàn)部分GBM上皮側(cè)“釘突”形成,甚至形成“假雙軌”征,系膜區(qū)及腎間質(zhì)膠原纖維沉積,纖維化程度加重;免疫熒光顯示腎小球毛細(xì)血管襻和系膜區(qū)Ig G熒光較強(qiáng),強(qiáng)度約為+++~++++。至第6周末時(shí),腎臟病理?yè)p傷除上述表現(xiàn)外,HE和Masson染色均可見(jiàn)腎間質(zhì)及系膜區(qū)膠原纖維沉積更加明顯。在各觀察時(shí)間點(diǎn)各組間比較,A、D組無(wú)明顯腎臟病理?yè)p害表現(xiàn);B組在各觀察時(shí)間點(diǎn)腎臟病理?yè)p害均較其它三組重,C組腎臟病理?yè)p害較A、D組重,但較B組有所減輕;腎組織Ig G熒光強(qiáng)度,B組與C組比較,無(wú)明顯差別(P0.05)。(2)腎臟固有細(xì)胞凋亡的動(dòng)態(tài)變化A組、D組大鼠僅可見(jiàn)腎小管少量細(xì)胞凋亡,腎小球未見(jiàn)明顯細(xì)胞凋亡,第1周末至第6周末腎小球AI表達(dá)量無(wú)明顯差異(P0.05),D組腎小球AI表達(dá)量與A組相比在各周末無(wú)明顯差異(P0.05);B組、C組從第1周末開(kāi)始可見(jiàn)凋亡細(xì)胞在腎小球臟層分布區(qū)域、系膜區(qū)、腎小管上皮細(xì)胞核表達(dá),陽(yáng)性細(xì)胞呈棕黃色顆粒狀,且腎小球AI表達(dá)隨造模時(shí)間的延長(zhǎng),呈逐漸上升趨勢(shì),與A組相比,差異具有顯著性(P0.01);與B組相比,C組腎小球AI表達(dá)量從第1周末開(kāi)始明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)腎臟組織TGF-β1、P38MAPK、Bax、Bcl-2及WT-1蛋白的動(dòng)態(tài)表達(dá)A組、D組:TGF-β1、P38MAPK、Bax在腎小球臟層分布區(qū)域、系膜區(qū)、腎小管上皮細(xì)胞胞漿均有少量表達(dá),Bcl-2在腎小球臟層分布區(qū)域、系膜區(qū)、腎小管上皮細(xì)胞胞漿有較多表達(dá),WT-1在腎小球臟層分布區(qū)域細(xì)胞核內(nèi)有較多表達(dá),陽(yáng)性細(xì)胞均呈棕褐色顆粒狀,以上指標(biāo)A、D組在第1、2、3、4、5、6周末表達(dá)量無(wú)明顯差異(P0.05),與A組相比,D組腎小球TGF-β1、P38MAPK、Bax、Bcl-2、WT-1在各周末的表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。B組、C組:隨著造模時(shí)間不斷延長(zhǎng),TGF-β1、P38MAPK、Bax表達(dá)量呈逐漸上升趨勢(shì),且主要集中表達(dá)在腎小球臟層分布區(qū)域及系膜區(qū)胞漿,腎小管的上皮細(xì)胞胞漿僅有少量表達(dá)或強(qiáng)度較弱,Bcl-2及WT-1表達(dá)隨造模時(shí)間延長(zhǎng)呈逐漸下降趨勢(shì)。與A組相比,B組和C組腎小球TGF-β1、P38MAPK、Bax表達(dá)增加,分別從第2、2、3周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Bcl-2、WT-1表達(dá)減少,均從第2周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與B組相比,C組腎小球TGF-β1、P38MAPK、Bax表達(dá)減少,分別從第4、6、5周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),Bcl-2、WT-1表達(dá)增加,分別從第4、5周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)腎臟組織勻漿Ang II含量動(dòng)態(tài)變化:A、D組在各觀察時(shí)間點(diǎn)有Ang II表達(dá),各周末表達(dá)量無(wú)明顯差異(P0.05);與A組相比,B、C組從第2周末開(kāi)始,隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加,Ang II含量增加明顯,尤以第6周末最為明顯(P0.01);與B組相比,C組在各周末Ang II的表達(dá)量呈降低趨勢(shì),從第3周末開(kāi)始差異具有顯著性(P0.05)。(5)臨床指標(biāo)變化:A組、D組各項(xiàng)指標(biāo)正常。B、C組TG、TC、Scr、BUN、24h UTP水平較A組在各周末均升高,Alb較A組降低,其中以Alb、24h UTP變化顯著(P0.05)。C組在各周末與B組相比較,Alb水平升高,從第5周末開(kāi)始差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),24h UTP水平呈降低趨勢(shì),但兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(6)6周末各指標(biāo)相關(guān)性分析:在腎小球內(nèi),B、C組大鼠腎組織Ang II含量與腎小球TGF-β1、P38MAPK、Bax、AI、24h UTP呈正相關(guān),與WT-1、Bcl-2呈負(fù)相關(guān);AI與TGF-β1、P38MAPK、Bax、24h UTP呈正相關(guān),與WT-1、Bcl-2呈負(fù)相關(guān);WT-1與Bcl-2呈正相關(guān),與TGF-β1、P38MAPK、Bax、24h UTP呈負(fù)相關(guān);TGF-β1與P38MAPK、Bax、24h UTP呈正相關(guān),與Bcl-2呈負(fù)相關(guān);P38MAPK與Bax、24h UTP呈正相關(guān),與Bcl-2呈負(fù)相關(guān);24h UTP與Bax呈正相關(guān),與Bcl-2呈負(fù)相關(guān),A組、D組各指標(biāo)間無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系。結(jié)論:①M(fèi)N大鼠在造模過(guò)程中存在足細(xì)胞數(shù)量減少現(xiàn)象;足細(xì)胞數(shù)量減少的主要原因可能與足細(xì)胞凋亡相關(guān);②MN大鼠在造模過(guò)程中,腎臟局部產(chǎn)生的Ang II可能是通過(guò)激活TGF-β1/P38MAPK通路引起足細(xì)胞凋亡;③貝那普利通過(guò)減少M(fèi)N大鼠腎組織中Ang II的產(chǎn)生,由此抑制TGF-β1/P38MAPK通路的活化,減少足細(xì)胞凋亡,發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：膜性腎病 Ang II 足細(xì)胞凋亡 TGF-β1/P38MAPK
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R692.6
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-26
• 結(jié)果26-46
• 討論46-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 英漢縮略詞對(duì)照表62-63
• 致謝63-64
• 腎內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)與腎小球疾病 綜述64-77
• 參考文獻(xiàn)71-77

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 丁小強(qiáng);劉春鳳;;特發(fā)性膜性腎病研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2011年02期

2 牛建英;蛋白尿損害腎臟的機(jī)制及其干預(yù)措施[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2003年01期

3 王秋月;佟健華;杜娟;趙宏;陸嬌薇;;TGF-β1通過(guò)p38MAPK信號(hào)通路調(diào)控腎小球系膜細(xì)胞分泌纖維連接蛋白的研究[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年03期

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本文編號(hào)：937762