本文關(guān)鍵詞：肝再生增強(qiáng)因子在細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷中的作用研究

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【摘要】：第一部分下調(diào)肝再生增強(qiáng)因子對(duì)H202誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激的影響目的：觀察ALR是否參與了細(xì)胞氧化應(yīng)激的病理過(guò)程,并探究下調(diào)ALR表達(dá)對(duì)H202誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷的影響。方法：采用H202誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測(cè)細(xì)胞ALR表達(dá)情況。設(shè)計(jì)特異性小干擾RNA(siRNA)下調(diào)HK-2細(xì)胞ALR表達(dá),以siRNA/control對(duì)照組,實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blot及免疫熒光驗(yàn)證ALR干擾效果,MTS檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。H202刺激12h后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞活性氧(ROS)水平、線粒體膜電位變化及細(xì)胞凋亡情況；Western blot檢測(cè)凋亡蛋白Bcl-2/Bax表達(dá)水平及線粒體蛋白(Cyt C、Smac)釋放；激光共聚焦檢測(cè)Cyt C釋放。結(jié)果：實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測(cè)顯示,與siRNA/control對(duì)照組比較,H2O2刺激組細(xì)胞內(nèi)源性23kD ALR mRNA及蛋白表達(dá)顯著增加(P0.05)。MTS結(jié)果顯示,下調(diào)23kD ALR表達(dá)對(duì)HK-2細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響(P0.05),但加重了H202誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。與siRNA/control組相比,細(xì)胞ROS水平顯著增加,膜電位降低細(xì)胞比例明顯增加,促進(jìn)了H202誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)及線粒體凋亡相關(guān)蛋白釋放,增加了H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：23kD ALR參與了H202誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。下調(diào)23kD ALR表達(dá)可加重H202誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷。第二部分23kD肝再生增強(qiáng)因子表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及功能研究目的：探究過(guò)表達(dá)23kD肝再生增強(qiáng)因子對(duì)人正常肝細(xì)胞(L-02)增殖及凋亡的影響。方法：構(gòu)建23kD ALR重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA6/23kDALR。以MegaTran1.0轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染至L-02細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測(cè)細(xì)胞ALR mRNA及蛋白水平表達(dá)情況,MTS檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,流式細(xì)胞儀檢測(cè)H202誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡變化。結(jié)果：成功構(gòu)建pcDNA6/23kDALR表達(dá)質(zhì)粒。實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot檢測(cè)顯示,與空質(zhì)粒對(duì)照組比較,L-02細(xì)胞過(guò)表達(dá)組23kD ALR表達(dá)顯著增加(P0.01)；與空質(zhì)粒對(duì)照組相比,pcDNA6/23kD ALR質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48h及72h細(xì)胞增殖顯著增強(qiáng)(P0.05),過(guò)表達(dá)23kD ALR可顯著減少H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡(P0.05)。結(jié)論：23kD ALR過(guò)表達(dá)可促進(jìn)L-02細(xì)胞增殖,減少H202誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：肝再生增強(qiáng)因子 小干擾RNA 急性腎損傷 氧化應(yīng)激 線粒體 真核表達(dá)質(zhì)粒 肝再生增強(qiáng)因子 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R692
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-14
• 前言14-16
• 第一部分：下調(diào)肝再生增強(qiáng)因子對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷的影響16-42
• 前言16
• 第一節(jié) 氧化應(yīng)激對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞中肝再生增強(qiáng)因子表達(dá)水平的影響16-29
• 1 材料16-20
• 2 方法20-26
• 3 結(jié)果26-29
• 第二節(jié) 下調(diào)肝再生增強(qiáng)因子對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞線粒體氧化應(yīng)激損傷的影響29-40
• 1 材料29
• 2 方法29-34
• 3 結(jié)果34-40
• 討論40-41
• 小結(jié)41-42
• 第二部分：肝再生增強(qiáng)因子過(guò)表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建及功能研究42-54
• 前言42
• 1 材料42-44
• 2 方法44-49
• 3 結(jié)果49-52
• 4 討論52-53
• 5 小結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 全文總結(jié)57-59
• 文獻(xiàn)綜述59-68
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 致謝68-69
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文69

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本文編號(hào)：922325