本文關(guān)鍵詞：攜抗PSMA載多西紫杉醇脂質(zhì)體微泡靶向診斷治療前列腺癌的研究

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【摘要】：前列腺癌是老年男性最常見的惡性腫瘤之一,早期前列腺癌多采用手術(shù)治療及內(nèi)分泌為主的綜合治療,但隨著病情的進(jìn)展,大部分患者從激素依賴逐漸變?yōu)閷?duì)激素不敏感,并最終成為激素抵抗型前列腺癌,這時(shí)內(nèi)分泌治療已經(jīng)失效,只能轉(zhuǎn)為采用多西紫杉醇為基礎(chǔ)的化療為主的治療方法。多西紫杉醇為細(xì)胞毒性藥物,其對(duì)腫瘤組織和正常組織缺乏靶向性,具有較大的全身毒副作用,而前列腺癌患者均為老年患者,耐受性差,更難以堅(jiān)持療程治療。靶向載藥微泡聯(lián)合超聲輻照是近年來出現(xiàn)的一種新型無創(chuàng)的腫瘤藥物遞送方式。靶向載藥微泡憑借其主動(dòng)尋靶功能在經(jīng)靜脈注射后通過血液循環(huán)與腫瘤組織特異性結(jié)合,在腫瘤局部經(jīng)體表給予超聲輻照后,使微泡破裂產(chǎn)生空化效應(yīng),一方面藥物得以從微泡中釋放進(jìn)入腫瘤組織內(nèi),另一方面超聲空化效應(yīng)所釋放出的強(qiáng)大能量可使腫瘤細(xì)胞膜的完整性遭到破壞,產(chǎn)生可逆或不可逆的微小聲孔,細(xì)胞外的藥物便通過聲孔進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部,從而實(shí)現(xiàn)藥物的靶向定位釋放治療。因此,本論文設(shè)計(jì)了一種以前列腺癌細(xì)胞表面特異性表達(dá)前列腺膜抗原(PSMA)為靶點(diǎn),負(fù)載全氟丙烷氣體(C3F8)的靶向載多西紫杉醇(DTX)脂質(zhì)體微泡(DLMB),探討其聯(lián)合超聲治療儀超聲(US)體內(nèi)定位釋放藥物的能力及對(duì)中晚期前列腺癌移植瘤的抑制作用。通過氨基與羧基的縮合反應(yīng)用NH2-PEG2000-COOH將DPPE與抗PSMA多肽相連接,合成具有靶向性的膜材料DPPE-PEG-APP,將其與DPPC,膽固醇及多西紫杉醇按一定比例混勻通過薄膜水化法制備成脂質(zhì)體,之后使用聲振法通過過量C3F8制備載多西紫杉醇包裹全氟丙烷的脂質(zhì)微泡。通過一系列表征測得所制得的微泡粒徑為(1.38±0.21)μm,平均電位為(-27.5±3.76)mV,呈球形分布均勻,包封率為(84.48±1.07)%,載藥量為(6.79±0.93)%,4°C可以存放3天。體外釋放實(shí)驗(yàn)表明,DLMBs能在模擬環(huán)境中穩(wěn)定存在,藥物泄露緩慢,經(jīng)過超聲作用后,達(dá)到突釋的目的。為了驗(yàn)證所制得靶向微泡的靶向性能及聯(lián)合超聲體外抗腫瘤效率,后續(xù)進(jìn)行細(xì)胞粘附,細(xì)胞毒性,細(xì)胞攝取等實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,靶向微泡對(duì)表達(dá)PSMA的LnCap細(xì)胞有特異性識(shí)別能力,而對(duì)不表達(dá)PSMA的PC-3細(xì)胞則沒有,聯(lián)合超聲后,細(xì)胞會(huì)更多的攝取包裹的藥物,有效的降低了多西紫杉醇的IC50值。為了進(jìn)一步驗(yàn)證所制備的微泡在體內(nèi)抗腫瘤的效率,構(gòu)建裸鼠LnCap細(xì)胞皮下中晚期移植瘤模型,裸鼠分為PBS、游離DTX、untarget DLMBs+US、targeted DLMBs、 targeted DLMBs+US組,隔5日給藥一次,給藥30mmin后進(jìn)行超聲輻照,連續(xù)治療30天。體外實(shí)驗(yàn)表明,targeted DLMBs+US組對(duì)腫瘤治療的效果最明顯,相比于PBS組瘤體積2.89±0.24 cm3與游離DTX組瘤體積2.32±0.16cm3,其瘤體積為0.93±0.08cm3。靶向微泡聯(lián)合超聲輻照可以明顯抑制腫瘤生長,組織病理和細(xì)胞凋亡分析顯示,該載藥納米粒能更有效地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。對(duì)其安全性進(jìn)行研究顯示,該載藥納米粒無明顯的臟器毒性。
【關(guān)鍵詞】：超聲微泡 抗PSMA多肽 多西紫杉醇 前列腺癌
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 縮略詞表10-15
• 第1章 緒論15-28
• 1.1 引言15-16
• 1.2 脂質(zhì)體16-21
• 1.2.1 脂質(zhì)體的組成17-18
• 1.2.2 脂質(zhì)體制備方法18-21
• 1.3 超聲微泡造影劑21-26
• 1.3.1 超聲微泡造影劑的分類21-22
• 1.3.2 超聲微泡造影劑的制備方式22-23
• 1.3.3 超聲微泡造影劑的發(fā)展23-26
• 1.4. 本論文的目的與意義26-28
• 第2章 攜抗PSMA載多西紫杉醇脂質(zhì)體微泡的制備表征28-43
• 2.1 前言28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)樣品及儀器29-30
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑29-30
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器30
• 2.3. 實(shí)驗(yàn)部分30-32
• 2.3.1 DPPE-PEG-APP合成30-31
• 2.3.2 靶向脂質(zhì)體微泡的制備31
• 2.3.3 靶向DLMBs制備參數(shù)優(yōu)化(正交實(shí)驗(yàn))31-32
• 2.4 靶向DLMBs的測試與表征32-34
• 2.4.1 靶向DLMBs形貌考察32
• 2.4.2 靶向DLMBs包封率及載藥率的測定32-34
• 2.4.3 靶向DLMBs穩(wěn)定性研究34
• 2.4.4 靶向DLMBs聯(lián)合超聲體外藥物釋放研究34
• 2.5 結(jié)果與討論34-41
• 2.5.1 合成方法及路線34-35
• 2.5.2 DPPE-PEG-APP的HNMR表征35
• 2.5.3 靶向DLMBs形貌考察35-36
• 2.5.4 DTX體外分析方法的建立36-38
• 2.5.5 包封率確定載藥微泡制備參數(shù)的優(yōu)化結(jié)果分析38-40
• 2.5.6 靶向DLMBs穩(wěn)定性評(píng)價(jià)40
• 2.5.7 靶向DLMBs聯(lián)合超聲體外藥物釋放分析40-41
• 2.6 結(jié)論41-43
• 第3章 靶向DLMBs聯(lián)合超聲的體外抗腫瘤效率的研究43-56
• 3.1 前言43
• 3.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器43-45
• 3.2.1 細(xì)胞株43
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑43-44
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器44-45
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法45-48
• 3.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇,培養(yǎng)和傳代45
• 3.3.2 細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)45
• 3.3.3 細(xì)胞熒光實(shí)驗(yàn)45-46
• 3.3.4 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)46-47
• 3.3.5 靶向DLMBs細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)47-48
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析48-54
• 3.4.1 細(xì)胞靶向?qū)嶒?yàn)分析48-49
• 3.4.2 細(xì)胞熒光實(shí)驗(yàn)分析49
• 3.4.3 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)分析49-53
• 3.4.4 靶向DLMBs細(xì)胞攝取評(píng)價(jià)53-54
• 3.5 小結(jié)54-56
• 第4章 靶向DLMBs聯(lián)合超聲的體內(nèi)抗腫瘤效率的研究56-65
• 4.1 前言56
• 4.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器56-57
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑56-57
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器57
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法57-59
• 4.3.1 靶向DLMBs聯(lián)合超聲體內(nèi)治療前列腺癌的效果57-58
• 4.3.2 抗腫瘤作用機(jī)制的評(píng)價(jià)58
• 4.3.3 靶向DLMBs對(duì)裸鼠生存影響58-59
• 4.4 統(tǒng)計(jì)方法59
• 4.5 結(jié)果與討論59-63
• 4.5.1 靶向DLMBs聯(lián)合超聲的治療效果59-60
• 4.5.2 載藥微泡的作用機(jī)制60-61
• 4.5.3 多功能微泡的生物相容性評(píng)價(jià)61-63
• 4.6 小結(jié)63-65
• 全文總結(jié)65-66
• 致謝66-67
• 參考文獻(xiàn)67-78
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表和待發(fā)表的論文78

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：921936