本文關(guān)鍵詞：Sirt1過表達(dá)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞株凋亡的影響及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： Sirt1 TGF-β1 CTGF 人腎小管上皮細(xì)胞 凋亡

【摘要】：目的:腎間質(zhì)纖維化是腎臟疾病終末期的共同特征。腎小管上皮細(xì)胞可通過多種方式主動(dòng)參與腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生與發(fā)展。在多種腎臟疾病的動(dòng)物模型以及人體多種腎臟疾病病理標(biāo)本上發(fā)現(xiàn),間質(zhì)纖維化愈重的地方,細(xì)胞凋亡數(shù)量愈多,間質(zhì)纖維化程度與細(xì)胞凋亡數(shù)量成正相關(guān)。本研究著重觀察Sirt1過表達(dá)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究。方法:將體外培養(yǎng)人腎小管上皮細(xì)胞分為正常對(duì)照組、TGF-β1刺激組及TGF-β1+Sirt1過表達(dá)組。采用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測細(xì)胞凋亡;流式細(xì)胞術(shù)及hoechst33258染色法分別檢測細(xì)胞凋亡百分比;Western blot檢測Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2的表達(dá);real time-PCR檢測Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2m RNA水平;活性比色法檢測Sirt1活性;免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測Sirt1表達(dá)。結(jié)果:①TGF-β1對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞Sirt1蛋白及m RNA表達(dá)水平的影響:較正常對(duì)照組相比,TGF-β1刺激人腎小管上皮細(xì)胞Sirt1m RNA及蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.01)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測顯示,Sirt1主要表達(dá)于人腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核,對(duì)照組呈強(qiáng)表達(dá),TGF-β1刺激組的Sirt1表達(dá)顯著低于正常對(duì)照組。②TGF-β1對(duì)Sirt1活性的影響:活性比色法定量檢測顯示TGF-β1刺激人腎小管上皮細(xì)胞Sirt1活性較正常對(duì)照組顯著降低(P0.01)。③轉(zhuǎn)染Sirt1質(zhì)粒后人腎小管上皮細(xì)胞Sirt蛋白、m RNA及活性的改變:Sirt1m RNA、蛋白表達(dá)及活性在Sirt1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組人腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)顯著升高(P0.01),表明Sirt1基因成功導(dǎo)入了人腎小管上皮細(xì)胞,并在蛋白水平獲得高效表達(dá)。④Sirt1過表達(dá)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的CTGF升高及小管上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)影響:與正常對(duì)照組相比,TGF-β1刺激人腎小管上皮細(xì)胞Bcl-2水平顯著降低(P0.01),Bax、CTGF水平顯著升高(P0.01)。Sirt1過表達(dá)能夠顯著上調(diào)TGF-β1誘導(dǎo)的Bcl-2減少(P0.01),降低TGF-β1誘導(dǎo)的Bax、CTGF的增多(P0.01)。⑤Sirt1過表達(dá)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人小管上皮細(xì)胞凋亡百分比影響:Hoechst、TUNEL及FCM三種檢測細(xì)胞凋亡技術(shù)均顯示,與正常對(duì)照組相比,在TGF-β1刺激下,人腎小管上皮細(xì)胞凋亡百分比顯著增加(P0.01);與TGF-β1刺激組相比,Sirt1過表達(dá)能夠顯著減少TGF-β1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡百分比(P0.05)。結(jié)論:1在TGF-β1刺激人腎小管上皮細(xì)胞時(shí)CTGF表達(dá)明顯升高,Sirt1表達(dá)顯著下降,同時(shí)細(xì)胞凋亡明顯增加。這些結(jié)果提示TGF-β1/CTGF信號(hào)傳導(dǎo)途徑及Sirt1下降可能因?yàn)榕c細(xì)胞凋亡密切相關(guān)而參與了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程。2 Sirt1過表達(dá)能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞凋亡,并且改善CTGF水平升高,提示Sirt1過表達(dá)保護(hù)作用的實(shí)現(xiàn)可能是部分通過抑制CTGF實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：Sirt1 TGF-β1 CTGF 人腎小管上皮細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R692
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文縮寫8-9
• 前言9
• 材料與方法9-17
• 結(jié)果17-19
• 附圖19-20
• 附表20-21
• 討論21-24
• 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-28
• 綜述 Sirt1和炎癥28-39
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 致謝39-40
• 個(gè)人簡歷40

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 安會(huì)江,朝克,商戰(zhàn)平,包宏,趙宗孝,岳誠真,龐鐵光;實(shí)驗(yàn)性單側(cè)輸尿管梗阻的腎臟形態(tài)學(xué)變化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;1999年03期

，

本文編號(hào)：904557