本文關鍵詞：Sirt1過表達對TGF-β1誘導人腎小管上皮細胞株凋亡的影響及機制研究

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【摘要】：目的:腎間質(zhì)纖維化是腎臟疾病終末期的共同特征。腎小管上皮細胞可通過多種方式主動參與腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生與發(fā)展。在多種腎臟疾病的動物模型以及人體多種腎臟疾病病理標本上發(fā)現(xiàn),間質(zhì)纖維化愈重的地方,細胞凋亡數(shù)量愈多,間質(zhì)纖維化程度與細胞凋亡數(shù)量成正相關。本研究著重觀察Sirt1過表達對TGF-β1誘導人腎小管上皮細胞凋亡的影響及其機制研究。方法:將體外培養(yǎng)人腎小管上皮細胞分為正常對照組、TGF-β1刺激組及TGF-β1+Sirt1過表達組。采用原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(TUNEL)檢測細胞凋亡;流式細胞術及hoechst33258染色法分別檢測細胞凋亡百分比;Western blot檢測Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2的表達;real time-PCR檢測Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2m RNA水平;活性比色法檢測Sirt1活性;免疫細胞化學方法檢測Sirt1表達。結果:①TGF-β1對人腎小管上皮細胞Sirt1蛋白及m RNA表達水平的影響:較正常對照組相比,TGF-β1刺激人腎小管上皮細胞Sirt1m RNA及蛋白表達均顯著降低(P0.01)。免疫細胞化學檢測顯示,Sirt1主要表達于人腎小管上皮細胞的細胞核,對照組呈強表達,TGF-β1刺激組的Sirt1表達顯著低于正常對照組。②TGF-β1對Sirt1活性的影響:活性比色法定量檢測顯示TGF-β1刺激人腎小管上皮細胞Sirt1活性較正常對照組顯著降低(P0.01)。③轉(zhuǎn)染Sirt1質(zhì)粒后人腎小管上皮細胞Sirt蛋白、m RNA及活性的改變:Sirt1m RNA、蛋白表達及活性在Sirt1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組人腎小管上皮細胞表達顯著升高(P0.01),表明Sirt1基因成功導入了人腎小管上皮細胞,并在蛋白水平獲得高效表達。④Sirt1過表達對TGF-β1誘導的CTGF升高及小管上皮細胞凋亡相關指標影響:與正常對照組相比,TGF-β1刺激人腎小管上皮細胞Bcl-2水平顯著降低(P0.01),Bax、CTGF水平顯著升高(P0.01)。Sirt1過表達能夠顯著上調(diào)TGF-β1誘導的Bcl-2減少(P0.01),降低TGF-β1誘導的Bax、CTGF的增多(P0.01)。⑤Sirt1過表達對TGF-β1誘導的人小管上皮細胞凋亡百分比影響:Hoechst、TUNEL及FCM三種檢測細胞凋亡技術均顯示,與正常對照組相比,在TGF-β1刺激下,人腎小管上皮細胞凋亡百分比顯著增加(P0.01);與TGF-β1刺激組相比,Sirt1過表達能夠顯著減少TGF-β1誘導的細胞凋亡百分比(P0.05)。結論:1在TGF-β1刺激人腎小管上皮細胞時CTGF表達明顯升高,Sirt1表達顯著下降,同時細胞凋亡明顯增加。這些結果提示TGF-β1/CTGF信號傳導途徑及Sirt1下降可能因為與細胞凋亡密切相關而參與了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程。2 Sirt1過表達能夠抑制TGF-β1誘導的人腎小管上皮細胞凋亡,并且改善CTGF水平升高,提示Sirt1過表達保護作用的實現(xiàn)可能是部分通過抑制CTGF實現(xiàn)的。
【關鍵詞】：Sirt1 TGF-β1 CTGF 人腎小管上皮細胞 凋亡
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文縮寫8-9
• 前言9
• 材料與方法9-17
• 結果17-19
• 附圖19-20
• 附表20-21
• 討論21-24
• 結論24-25
• 參考文獻25-28
• 綜述 Sirt1和炎癥28-39
• 參考文獻34-39
• 致謝39-40
• 個人簡歷40

【參考文獻】

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1 安會江,朝克,商戰(zhàn)平,包宏,趙宗孝,岳誠真,龐鐵光;實驗性單側輸尿管梗阻的腎臟形態(tài)學變化[J];基礎醫(yī)學與臨床;1999年03期

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本文編號：904557