本文關(guān)鍵詞：miR-218抑制前列腺腫瘤病理細(xì)胞PC-3的增殖及去SUMO化酶SENP1的表達(dá)

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【摘要】：micro RNAs是由21 23個核苷酸組成的高度保守的非編碼RNA,它通過與特定m RNA的未翻譯區(qū)結(jié)合負(fù)調(diào)節(jié)靶基因表達(dá),研究表明microRNA異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。類泛素修飾是人類體內(nèi)的重要生理過程,是人類的生理和病理反應(yīng)所必須的生理反應(yīng)。類泛素化蛋白酶1(SENP1),它幫助SUMO-1、SUMO-2、SUMO-3成熟并可以使得SUMO修飾后的蛋白質(zhì)去修飾。mi R-218是已報道的腫瘤抑制基因,在前列腺腫瘤細(xì)胞中目前沒有研究證實mi R-218和SUMO化修飾之間的關(guān)系。本研究主要研究miR-218對基因SENP1的作用和對PC-3細(xì)胞增殖的影響作用,獲得以下結(jié)論:1通過軟件預(yù)測和實驗驗證,篩選出基因miR-218與基因SENP1有一定數(shù)量的堿基配對,成功構(gòu)建質(zhì)粒miR-218和miR-NC。經(jīng)質(zhì)粒PCR、雙酶切以及測序鑒定正確后。同時在前列腺腫瘤細(xì)胞中miR-218的高水平表達(dá)。2通過實驗驗證,miR-218能夠調(diào)控基因SENP1。miR-218可以通過與去SUMO化酶SENP1基因的3’UTR區(qū)域相結(jié)合抑制SENP1基因的表達(dá),并且通過qPCR驗證了miR-218對基因BMI、LAMB3和SENP1有著下調(diào)的作用。3通過實驗發(fā)現(xiàn)miR-218可以提高SUMO修飾蛋白的水平。基因SENP1是去SUMO化途徑中的重要蛋白,miR-218對基因SENP1有著抑制作用,因此,miR-218可以增加導(dǎo)致SUMO修飾蛋白的累積。本研究中miR-218可以在PC-3細(xì)胞中下調(diào)SENP1的表達(dá),并且影響類泛素化途徑中相關(guān)蛋白的表達(dá)量,從而抑制前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖,為后續(xù)深入研究前列腺腫瘤細(xì)胞中SUMO修飾與腫瘤的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：miR-218 SUMO 前列腺癌 SENP1
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-21
• 1.1 前列腺癌的研究概況和現(xiàn)狀10-12
• 1.1.1 前列腺癌的現(xiàn)狀10
• 1.1.2 前列腺癌的危險因素10-11
• 1.1.3 三種常見的前列腺腫瘤病理細(xì)胞系11-12
• 1.2 microRNA與前列腺癌12-13
• 1.3 SUMO化修飾的相關(guān)研究13-18
• 1.3.1 sumo化修飾的概念13-14
• 1.3.2 SUMO化修飾的過程14-15
• 1.3.3 SUMO化修飾的酶15-16
• 1.3.4 SUMO化修飾的生物學(xué)功能16-17
• 1.3.5 SUMO化與腫瘤的關(guān)系17-18
• 1.4 SENP的研究進(jìn)展18-19
• 1.4.1 SENP-1 與雄激素受體AR18-19
• 1.4.2 SENP-1 與原癌基因c-Jun19
• 1.5 miR-218的研究進(jìn)展19-20
• 1.5.1 miR-218與髓母細(xì)胞瘤19
• 1.5.2 miR-218與胃腸間質(zhì)瘤19-20
• 1.5.3 miR-218與惡性膠質(zhì)瘤20
• 1.6 研究意義與目的20-21
• 第二章 靶向SENP1的microRNA篩選及相關(guān)質(zhì)粒的構(gòu)建21-33
• 2.1 實驗材料21-22
• 2.1.1 實驗所用軟件21
• 2.1.2 細(xì)胞及質(zhì)粒21
• 2.1.3 試劑及儀器21
• 2.1.4 主要實驗試劑的配備21-22
• 2.2 實驗方法22-27
• 2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇22
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)22-23
• 2.2.3 細(xì)胞傳代培養(yǎng)23
• 2.2.4 細(xì)胞凍存23
• 2.2.5 RNA抽提及microRNA實時定量檢測23-24
• 2.2.6 質(zhì)粒構(gòu)建24-27
• 2.3 結(jié)果及分析27-32
• 2.3.1 軟件Pic Tar、miRanda和Target Scan篩選miR-21827-29
• 2.3.2 miR-218基因克隆29
• 2.3.3 psl4-miR-218質(zhì)粒的菌落PCR驗證29-30
• 2.3.4 psl4-miR-218質(zhì)粒的酶切驗證30
• 2.3.5 psl4-miR-218質(zhì)粒細(xì)胞學(xué)驗證30-31
• 2.3.6 psicheck-senp1菌落PCR31
• 2.3.7 psicheck-senp1雙酶切實驗31-32
• 2.4 討論32-33
• 第三章 靶向SENP1基因的miR-218的驗證33-45
• 3.1 實驗材料33
• 3.1.1 細(xì)胞33
• 3.1.2 試劑33
• 3.2 實驗方法33-39
• 3.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗33-34
• 3.2.2 細(xì)胞活性檢測34
• 3.2.3 細(xì)胞增殖-毒性檢測34
• 3.2.4 senp13’UTR的克隆及突變34-35
• 3.2.5 雙熒光素酶報告基因檢測miR-218對senp13’UTR序列的作用35-36
• 3.2.6 細(xì)胞克隆實驗36-37
• 3.2.7 qPCR實驗37-38
• 3.2.8 Western blot檢測miR-218對SENP1蛋白表達(dá)的影響38-39
• 3.3 實驗結(jié)果39-43
• 3.3.3 miR-218在PC-3 細(xì)胞中調(diào)節(jié)SENP1等相關(guān)基因的mRNA量41
• 3.3.4 miR-218影響SUMO化修飾的相關(guān)蛋白41-42
• 3.3.5 miR-218影響PC-3 細(xì)胞增殖42-43
• 3.4 討論43-45
• 3.4.1 miR-218影響前列腺癌細(xì)胞PC-3 的細(xì)胞活性和增殖能力43-44
• 3.4.2 miR-218通過調(diào)節(jié)基因SENP-1 的表達(dá)從而影響細(xì)胞的增殖能力44
• 3.4.3 miR-218下調(diào)基因SENP-1 的表達(dá)44
• 3.4.4 miR-218影響細(xì)胞中SUMO相關(guān)蛋白44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49
• 作者簡介49

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本文編號：896669