本文關(guān)鍵詞：抗人中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白單克隆抗體的研制及其檢測(cè)試劑的初步應(yīng)用

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【摘要】：目的中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)在國(guó)際上已成為臨床診斷急性腎損傷(AKI)的主要生物標(biāo)志物。該課題主要研制抗人NGAL單抗及探討其國(guó)產(chǎn)化診斷試劑的初步應(yīng)用。方法預(yù)測(cè)NGAL抗原表位并結(jié)合NGAL的晶體結(jié)構(gòu),設(shè)計(jì)合成抗原表位肽并與血藍(lán)蛋白偶聯(lián),免疫小鼠制備抗NGAL單抗;人工合成NGAL基因構(gòu)建原核表達(dá)載體p ET-Dsb A-NGAL,誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化重組NGAL蛋白,研制NGAL標(biāo)準(zhǔn)品;建立雙單抗體夾心ELISA法,檢測(cè)該方法的線性范圍、檢測(cè)限、靈敏度和精密度,同時(shí)檢測(cè)20份健康對(duì)照組和20份AKI患者血清和尿液樣品。結(jié)果針對(duì)NGAL兩個(gè)表位(21-34aa;58-71aa)分別獲得了4株和3株能夠穩(wěn)定分泌抗NGAL單抗的細(xì)胞株;ELISA法最低檢出限為0.25 ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)曲線在2.5~125.0 ng/ml范圍內(nèi)線性良好,批間變異CV值均小于10%;凍干NGAL標(biāo)準(zhǔn)品在4℃穩(wěn)定達(dá)6個(gè)月;AKI組血清和尿液中NGAL含量分別為(589.5±75.5)和(89.4±12.4)ng/ml,而健康對(duì)照組血清和尿液中NGAL含量分別為(58.8±9.5)和(7.2±1.4)ng/ml;兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論該研究獲得了抗人NGAL單抗及其基因工程N(yùn)GAL標(biāo)準(zhǔn)品并建立了ELISA定量檢測(cè)試劑,為實(shí)現(xiàn)NGAL臨床免疫檢測(cè)診斷試劑的國(guó)產(chǎn)化提供了良好的技術(shù)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 深圳市人民醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白 單克隆抗體 ELISA 表位預(yù)測(cè) 急性腎損傷
【分類號(hào)】：R692;R446.6
【正文快照】： 急性腎損傷(acute kidney injury,AKI)是由多種原因引起的腎功能在幾小時(shí)至幾天內(nèi)突然下降而出現(xiàn)的臨床綜合征。重癥患者并發(fā)AKI可導(dǎo)致急性腎功能衰竭,其死亡率超過(guò)26%[1]。傳統(tǒng)診斷指標(biāo)如血肌酐和尿素氮等因其敏感性和特異性均不高,容易導(dǎo)致AKI診斷滯后,從而貽誤治療時(shí)機(jī)。發(fā)

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8 許文q，

本文編號(hào)：886665