本文關(guān)鍵詞：糖尿病大鼠腎組織Nrf2、HO-1的表達(dá)及富氫液對(duì)其干預(yù)作用的研究

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【摘要】：目的:糖尿病腎病是糖尿病最常見、最嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥之一,其具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,但大量研究表明,糖尿病持續(xù)的高糖狀態(tài)誘導(dǎo)產(chǎn)生的大量活性氧(Reactive oxygen species,ROS)可直接攻擊體內(nèi)大分子物質(zhì),產(chǎn)生過氧化變性、交聯(lián)或斷裂,導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能損傷,從而促使糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展。當(dāng)機(jī)體應(yīng)對(duì)ROS損傷時(shí),某些保護(hù)性基因上游調(diào)節(jié)區(qū)的抗氧化反應(yīng)元件(Anti-oxidative response element,ARE)會(huì)調(diào)控表達(dá)一系列保護(hù)性蛋白,以緩解細(xì)胞損傷。研究發(fā)現(xiàn),ARE可被細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子Nrf2激活。Nrf2/ARE通路是維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡的主要內(nèi)源性通路。因此,Nrf2的激活及下游抗氧化蛋白的表達(dá)可能為糖尿病腎病的防治提供新的靶點(diǎn)。本研究擬建立糖尿病大鼠模型,并給予富氫液進(jìn)行干預(yù),測定腎組織中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、谷胱甘肽(glutathione hormone,GSH)水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性反應(yīng)糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激程度;應(yīng)用免疫組織化學(xué)、Western blot方法檢測腎組織中Nrf2、HO-1的表達(dá)情況。探討富氫液是否能通過激活Nrf2/ARE通路改善腎組織內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài),以期為糖尿病腎病的防治提供新的理論依據(jù)。方法:選擇SPF級(jí)健康雄性大鼠36只,體重約200±20g,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,空腹12小時(shí),隨機(jī)選取12只,作為正常組(NC組),其余24只建立糖尿病大鼠模型,分別給予STZ(65mg/Kg)腹腔注射,72小時(shí)后尾尖取血測血糖,血糖≥16.7mmol/L即為造模成功。NC組給予等量的檸檬酸緩沖液腹腔注射。糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病模型組(DM組)、富氫液干預(yù)組(HRS組)。HRS組給予12ml/kg HRS灌胃,NC組、DM組每天給予等量生理鹽水灌胃。實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由進(jìn)食、飲水,不使用胰島素及其他降糖藥物。分別于造模成功8周末、12周末,每組任取6只大鼠,留取血、尿標(biāo)本,檢測血肌酐、血尿素氮及24小時(shí)尿蛋白;并取腎組織,制作病理切片,進(jìn)行蘇木素伊紅(HE)染色及糖原染色(PAS),觀察腎組織病理變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法及Western blot方法檢測Nrf2、HO-1的表達(dá)情況。取部分腎皮質(zhì)制備勻漿液,測定MDA、GSH水平及SOD活性。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±S)表示,應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析,若數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)性或方差齊性則采用非參數(shù)檢驗(yàn),以p0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1大鼠一般情況NC組大鼠精神狀態(tài)良好,體重增加,反應(yīng)靈敏,毛發(fā)有光澤,尿量無明顯改變。DM組及HRS組自造模成功后,逐漸出現(xiàn)多飲、多食、多尿等糖尿病癥狀,后期精神萎靡,反應(yīng)遲鈍,毛發(fā)晦暗且逐漸消瘦。其中DM癥狀明顯重于HRS組。2生化指標(biāo)8周末和12周末,DM組和HRS組24小時(shí)尿蛋白、血糖、血肌酐、血尿素氮水平較NC組升高(P0.05);HRS組與DM組相比明顯降低(P0.05)。3氧化應(yīng)激指標(biāo)DM組大鼠腎組織內(nèi)MDA含量與NC組相比明顯升高,給予富氫液干預(yù)后,MDA水平降低(P0.05);DM組大鼠腎組織內(nèi)SOD活性、GSH水平與NC相比明顯降低,給予富氫液干預(yù)后,SOD活性、GSH水平升高(P0.05)。4腎臟形態(tài)學(xué)改變光鏡顯示,NC組大鼠的腎臟組織結(jié)構(gòu)清晰,未見明顯的病理學(xué)改變;DM組部分腎小球體積增大,腎小球系膜基質(zhì)彌漫增多,系膜細(xì)胞增生,系膜區(qū)增寬,基底膜增厚,部分部位出現(xiàn)腎小管擴(kuò)張,部分腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性。12周末上述病理改變最明顯,給予富氫液治療后,腎臟病變有所減輕。5 Nrf2、HO-1的表達(dá)免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:Nrf2、HO-1主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿中,表達(dá)強(qiáng)度為:HRS組DM組NC組(P0.05);Western blot結(jié)果顯示:Nrf2、HO-1的表達(dá)趨勢與免疫組織化學(xué)結(jié)果一致。結(jié)論:1糖尿病狀態(tài)下,大鼠腎組織GSH水平、SOD活性降低,MDA含量升高,Nrf2、HO-1表達(dá)增強(qiáng),說明存在明顯的氧化應(yīng)激反應(yīng),且Nrf2/ARE通路被激活。2富氫液可降低糖尿病大鼠血糖、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白水平,并降低腎組織MDA含量,提高GSH水平、SOD活性,上調(diào)Nrf2、HO-1的表達(dá),表明富氫液對(duì)腎臟具有一定的保護(hù)作用,其機(jī)制可能與激活Nrf2/ARE通路,減輕氧化應(yīng)激損傷相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 氫 氧化應(yīng)激 Nrf2 HO-1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-26
• 附圖26-33
• 附表33-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 綜述 氫氣對(duì)腎臟疾病的治療作用及其研究進(jìn)展42-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 致謝52-53
• 個(gè)人簡歷53

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 賈倩;霍甜甜;馮榮芳;吳瓊;王建華;;阿爾茨海默病氧化應(yīng)激機(jī)制及抗氧化治療進(jìn)展[J];臨床薈萃;2015年04期

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本文編號(hào)：866705