本文關(guān)鍵詞：OTUB1基因?qū)τ诎螂装┘毎飳W行為的影響

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【摘要】：目的:本論文通過研究OTUB1基因在膀胱癌發(fā)生及發(fā)展過程中的作用,從而進一步闡明OTUB1基因與人類腫瘤的關(guān)系。方法:1、檢測OTUB1基因在膀胱癌腫瘤組織及癌旁組織中含量的高低及其表達差異。首先通過實時定量PCR技術(shù)檢測OTUB1基因在膀胱腫瘤組織及癌旁組織的含量差異,然后通過免疫組化技術(shù)研究探究膀胱癌組織與癌旁組織中OTUB1的表達差異。2、探究OTUB1基因?qū)Π螂装┠[瘤細胞行為學方面的影響:分別構(gòu)建OTUB1基因過表達質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒,并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染膀胱癌腫瘤細胞株,通過western blot驗證OTUB1基因在上述細胞株中的表達高低;然后采用CCK-8法檢測OTUBl基因過表達、干擾細胞與對照組細胞增殖能力的差異,并采用Transwell小室來探究其遷移能力差異,采用Matrigel膠穿實驗來探究不同穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株侵襲能力的差異。結(jié)果:1、測定膀胱癌腫瘤組織與其配對的癌旁組織中OTUB1m RNA的表達量,發(fā)現(xiàn)癌變組織中的OTUB1m RNA的表達量較癌旁組織要高4.37倍(P0.05)。通過免疫組織化學技術(shù)分析,與其相應的癌旁組織相比,OTUB1基因在膀胱癌癌變組織中的蛋白表達量顯著增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);OTUB1基因的蛋白表達水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、腫瘤的大小及腫瘤的病理分級密切相關(guān),且差異顯著(P0.05)。2、OTUB1基因的過表達可引起膀胱癌腫瘤細胞的增殖,細胞遷移和侵襲能力的增強。而OTUB1基因被干擾時,可引起膀胱癌腫瘤細胞在體外的增殖、遷移及侵襲能力的減弱。本研究首次從細胞行為學的角度,研究OTUB1基因?qū)Π螂装┠[瘤細胞生物學行為的影響,構(gòu)建了OTUB1基因過表達與干擾的膀胱癌腫瘤細胞系,探討腫瘤的增殖能力,侵襲能力,遷移能力與OTUB1表達情況的相關(guān)性,為進一步研究OTUB1基因及其表達產(chǎn)物在與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的信號通路上所發(fā)揮的作用,奠定了堅實的基礎。本研究旨在尋找一種膀胱癌早期診斷的新的潛在標志物,對患者的病灶大小,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否等臨床情況進行預判,同時尋找一種潛在的膀胱癌生物學治療靶點。結(jié)論:在膀胱癌腫瘤組織中,OTUB1的m RNA與蛋白水平均呈現(xiàn)高表達特點;OTUB1基因具有促進腫瘤組織細胞的增殖、遷移與侵襲的能力。OTUB1在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了十分重要的正性作用。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 OTUB1表達差異 生長 遷移 侵襲
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-15
• 一、OTUB1基因在膀胱癌組織中的表達程度15-25
• 1.1 對象和方法15-19
• 1.1.1 研究對象15
• 1.1.2 主要實驗試劑及配制15-16
• 1.1.3 設備和儀器16
• 1.1.4 總RNA的抽提16
• 1.1.5 總RNA逆轉(zhuǎn)錄16-17
• 1.1.6 實時定量PCR檢測17-18
• 1.1.7 OTUB1 蛋白在膀胱癌組織中表達情況的探究18-19
• 1.2 結(jié)果19-22
• 1.2.1 OTUB1 mRNA 在膀胱癌組織及其相應癌旁組織的表達情況19-21
• 1.2.2 通過免疫組化探究OTUB1在膀胱癌標本中的含量21-22
• 1.3 討論22-24
• 1.4 小結(jié)24-25
• 二、OTUB1 基因?qū)Π螂啄[瘤細胞行為學的影響25-50
• 2.1 對象和方法25-37
• 2.1.1 膀胱細胞株25
• 2.1.2 菌株25
• 2.1.3 主要試劑25-26
• 2.1.4 主要試劑、培養(yǎng)基的配制26
• 2.1.5 主要設備與儀器26-27
• 2.1.6 OTUB1 mRNA 在不同膀胱癌細胞株中的表達情況27-28
• 2.1.7 感受態(tài)細菌的制備28
• 2.1.8 質(zhì)粒抽提28-29
• 2.1.9 OTUB1 過表達的 T24 細胞株的構(gòu)建29-31
• 2.1.10 轉(zhuǎn)染效率的測定31-33
• 2.1.11 OTUB1 基因被干擾的 EJ 細胞株的建立33-34
• 2.1.12 OTUB1干擾效率的測定34-36
• 2.1.13 OTUB1 對于膀胱癌細胞株生物學特性的影響36-37
• 2.2 結(jié)果37-46
• 2.2.1 OTUB1基因在兩種膀胱癌細胞株中的含量測定結(jié)果37-38
• 2.2.2 OTUB1 基因過表達及其被干擾的穩(wěn)定細胞株的制備38-40
• 2.2.3 OTUB1 基因過表達對膀胱腫瘤細胞生物學行為的作用40-43
• 2.2.4 OTUB1 基因的干擾對膀胱腫瘤細胞生物學行為的作用43-46
• 2.3 討論46-49
• 2.4 小結(jié)49-50
• 結(jié)論50-51
• 問題的展望51-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明53-54
• 參考文獻54-57
• 綜述 OTUB1基因與腫瘤的關(guān)系研究進展57-68
• 綜述參考文獻63-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69

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本文編號：853400