本文關鍵詞：TEKT3、SMCP與特發(fā)性弱精子癥關系的研究

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【摘要】：背景與目的近年來,不孕不育癥的患病率呈逐年增長趨勢,不孕不育已是一個遍及全球的生殖健康問題。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的研究報道,全世界夫婦中不孕不育的比例達到10%~15%,在不孕不育癥夫婦當中,男方不育所引起的占50%。因此,評估男性生育力與不育癥診斷及有效治療男性不育之間的聯(lián)系,對男性生殖健康具有重要的臨床意義。男性不育由于精液質量異常問題所導致的原因有許多,低下的精子活動力是重要的原因之一,臨床上稱之為弱精子癥(Asthenozoospermia,AZS)。精子活力主要是指精子的前向運動能力。根據(jù)最新世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)第五版精液分析手冊標準,臨床對精液標本進行分析時,弱精子癥精液參考區(qū)間:精子前向運動(PR)32%,精子濃度≥15×106ml-1。由于弱精子癥發(fā)病機制尚未研究透徹,因此,深入探究弱精子癥的發(fā)病及其發(fā)展機制,對弱精子癥治療具有重要的意義。弱精子癥的發(fā)病機制主要有:信號傳導通路異常、線粒體能量代謝異常、精子尾部結構及生理功能異常等。哺乳動物成熟的精子主要由頭部和尾部構成,精子尾部又稱鞭毛。精子尾部主要包括四部分:頸段、中段、主段、末段,每一部分都對精子的運動起著至關重要的作用。精子尾部中段主要包含三部分:軸絲微管,外周的致密纖維,線粒體鞘。研究報道,目前男性不育的發(fā)生發(fā)展相關的精子基因數(shù)目已超過300個。為進一步闡明弱精子癥的發(fā)病機制,本研究通過利用兩種試驗方法:逆轉錄-多聚合酶鏈式反應(RT-PCR)、Western blot蛋白免疫印跡技術對弱精子癥患者和正常男性精子中TEKT3和SMCP的表達情況進行檢測,探討TKET3和SMCP對特發(fā)性弱精子癥發(fā)病的作用,為弱精子癥的深入研究與探索其機制提供理論基礎,為弱精子癥(AZS)發(fā)病機制的進一步闡明和臨床弱精子癥的治療提供實驗依據(jù)。材料和方法1研究對象收集2014年6月至10月就診于鄭州大學第三附屬醫(yī)院男科門診的50份弱精子癥患者(年齡23-39歲)和50份同一時期人類精子庫合格供精者(年齡20-40歲)精液標本。受試者采集精液前禁欲3~7天,手淫方式排精于取精杯中,待精液完全液化,按照WHO第五版《精液實驗室分析手冊》對精液標本進行分析,計算機輔助精液分析儀對同一份標本連續(xù)檢測三次。所有受試對象納入標準:(1).無傳染病史,(2).無性功能障礙,(3).無家族遺傳病史,(4).內分泌各項激素及肝腎功能檢查正常。2方法2.1 RT-PCR利用RT-PCR方法,檢測弱精子癥患者與正常對照組男性精子TEKT3 m RNA和SMCP m RNA的表達水平情況。2.2 Western blot蛋白印跡利用Western-blot蛋白印跡方法,檢測弱精子癥患者與正常對照組男性精子TEKT3蛋白和SMCP蛋白的表達水平情況。3統(tǒng)計學處理采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對結果數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,結果中計量的資料數(shù)據(jù)以`x±s表示。特發(fā)性弱精子癥患者組與正常對照男性組TEKT3、SMCP m RNA和蛋白相對表達水平之間的比較,統(tǒng)計方法采用兩獨立樣本的t-檢驗進行分析,Pearson相關系數(shù)(r)用來描述TEKT3、SMCP表達與精子前向運動能力的相關性,檢驗水準α=0.05。結果1 TEKT3 m RNA在兩組精子中的表達情況兩組精子中TEKT3m RNA相對表達量分別為:0.82±0.03、0.60±0.13,弱精子癥患者與正常對照組相比,特發(fā)性弱精子癥患者精子中TEKT3m RNA的表達顯著降低(t=9.61,P=0.001)。2 TEKT3蛋白在兩組精子中的表達情況兩組精子中TEKT3蛋白的相對表達量分別為:0.78±0.03、0.57±0.12,弱精子癥患者與正常對照組相比,特發(fā)性弱精子癥患者精子中TEKT3蛋白的表達呈顯著降低(t=10.09,P=0.001)。3 SMCP m RNA在兩組精子中的表達情況SMCPm RNA在兩組精子中的相對表達量分別為:0.93±0.44、0.27±0.11,比較兩組精子中SMCPm RNA相對表達量,發(fā)現(xiàn)特發(fā)性弱精子癥組精子中SMCPm RNA的表達呈顯著降低(t=10.29,P=0.001)。4 SMCP蛋白在兩組精子中的表達情況SMCP蛋白在兩組精子中的相對表達量分別為:1.02±0.27、0.59±0.23,比較兩組精子中SMCP蛋白的相對表達量,發(fā)現(xiàn)特發(fā)性弱精子癥組精子中SMCP蛋白的表達表達顯著降低(t=8.45,P=0.002)。5 TEKT3、SMCP在精子中表達水平與精子前向運動的相關性精子前向運動能力和TEKT3表達水平(r=0.718,P=0.001;r=0.729,P=0.001)和SMCP表達水平(r=0.705,P=0.013;r=0.716 P=0.001)分別具有相關性。結論 在特發(fā)性弱精子癥患者精子中,TEKT3、SMCP的表達水平與精子活力正相關,兩者的低表達與精子前向運動能力降低有關,可能參與了弱精子癥的發(fā)生。
【關鍵詞】：TEKE3 SMCP 特發(fā)性弱精子癥 RT-PCR Western-blot
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R698.2
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 中英文縮略詞表14-15
• 1 引言15-17
• 2 材料與方法17-28
• 3 結果28-33
• 4 討論33-39
• 5 結論39-40
• 6 創(chuàng)新點40-41
• 參考文獻41-44
• 綜述44-61
• 1 引言44-45
• 2 精子細胞結構45-47
• 3 弱精子癥的相關發(fā)病機制47-55
• 參考文獻55-61
• 個人簡介、在學期間發(fā)表學術論文61-62
• 致謝62

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