本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)轉(zhuǎn)GFP-RAB7的腎小管上皮細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下RAB7的表達(dá)及位置變化

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【摘要】：目的:了解缺氧狀態(tài)下RAB7蛋白在穩(wěn)轉(zhuǎn)GFP-RAB7表達(dá)載體的腎小管上皮細(xì)胞中的表達(dá)及位置變化,驗(yàn)證其對細(xì)胞自噬與內(nèi)吞現(xiàn)象的指示作用。方法:構(gòu)建GFP-RAB7表達(dá)融合蛋白慢病毒載體轉(zhuǎn)染腎小管上皮細(xì)胞(HK-2),缺氧處理后,采用RT-qPCR、蛋白質(zhì)印跡技術(shù)和激光共聚焦技術(shù)檢測外源基因RAB7在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及位置的變化。結(jié)果:成功將GFP-RAB7基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到HK-2細(xì)胞中,并獲得穩(wěn)定表達(dá)GFP-RAB7蛋白的HK-2細(xì)胞;在缺氧狀態(tài)下,RAB7 mRNA的表達(dá)輕微降低,蛋白水平?jīng)]有變化;激光共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn)GFP-RAB7蛋白發(fā)生聚集,顯示自噬與內(nèi)吞的形成。結(jié)論:成功建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的表達(dá)GFPRAB7的HK-2細(xì)胞系,GFP-RAB7融合蛋白可指示自噬與內(nèi)吞現(xiàn)象,為研究缺氧狀況下腎小管上皮細(xì)胞自噬與內(nèi)吞提供了有效工具。
【作者單位】： 東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 缺氧 GFP-RAB蛋白 腎小管上皮細(xì)胞 自噬 內(nèi)吞
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81370868) 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項資金項目 江蘇省普通高校研究生科研創(chuàng)新計劃項目(KYLX_0197)
【分類號】：R692
【正文快照】： 2000年Fine等[1]提出慢性缺氧假說,強(qiáng)調(diào)腎小管間質(zhì)的慢性缺血損傷是各種腎臟病發(fā)展為終末期腎病的共同通路。研究表明,腎小管上皮細(xì)胞對缺氧十分敏感,易因此而損傷并釋放炎癥介質(zhì),促進(jìn)疾病的發(fā)展,但具體機(jī)制尚未完全搞清[2-3]。自噬(autophagy)是一種細(xì)胞代謝方式,細(xì)胞將自身

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本文編號：843390