本文關(guān)鍵詞：miR-451在膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制研究及其靶基因預(yù)測(cè)

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【摘要】：目的:通過(guò)檢測(cè)mi R-451在膀胱癌組織和膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá),分析其與臨床病理特征及轉(zhuǎn)移潛能的相關(guān)性,以驗(yàn)證mi R-451是否為膀胱癌潛在的抑癌基因;體外實(shí)驗(yàn)探尋mi R-451對(duì)膀胱癌細(xì)胞粘附、二維遷移及侵襲能力的影響,闡明它在膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制,并預(yù)測(cè)mi R-451的可能下游靶基因。方法:收集自2011年1月至2014年12月間我院行根治性全膀胱切除術(shù)后的臨床標(biāo)本30例,采用q RT-PCR檢測(cè)mi R-451在膀胱癌組織、癌旁組織及正常膀胱組織中的表達(dá),分析其與臨床病理特征的相關(guān)性;檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞T24、5637、J82中mi R-451的表達(dá),分析其與細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能的相關(guān)性。構(gòu)建mi R-451過(guò)表達(dá)的細(xì)胞模型,采用粘附實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)探尋mi R-451對(duì)膀胱癌細(xì)胞粘附、二維遷移及侵襲能力的影響,并通過(guò)Target Scan、mir Base等生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)、篩選mi R-451的可能下游靶基因。結(jié)果:1、基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示:①mi R-451在膀胱癌組織中較癌旁及正常膀胱組織中顯著低表達(dá)(P0.05);mi R-451在癌旁組織中較正常膀胱組織中顯著低表達(dá)(P0.05)。②mi R-451在高分期(T3、T4)的膀胱癌組織中較在低分期(如T1、T2)膀胱癌組織中顯著低表達(dá)(P0.05);mi R-451在高分化膀胱癌組織中較在低分化膀胱癌組織中顯著高表達(dá)(P0.05)。③mi R-451在J82中較在T24、5637中高表達(dá),且其表達(dá)水平與細(xì)胞株轉(zhuǎn)移潛能負(fù)相關(guān)(P0.05)。2、①轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)提示mi R-451mimics及scramble序列在三個(gè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞組中的轉(zhuǎn)染效率都達(dá)90%以上,轉(zhuǎn)染效果好,符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。②粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:mi R-451過(guò)表達(dá)組較陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組細(xì)胞OD值低(P0.05),而陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組差異不顯著(P0.05);說(shuō)明mi R-451過(guò)表達(dá)可減弱膀胱癌細(xì)胞的粘附能力。③劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:mi R-451過(guò)表達(dá)組較陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組細(xì)胞遷移距離短(P0.05),而陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組差異不顯著(P0.05);說(shuō)明mi R-451過(guò)表達(dá)可減弱膀胱癌細(xì)胞的二維遷移能力。④Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:mi R-451過(guò)表達(dá)組較陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組侵襲細(xì)胞總數(shù)少(P0.05),而陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組差異不顯著(P0.05);說(shuō)明mi R-451過(guò)表達(dá)可減弱膀胱腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。3、預(yù)測(cè)mi R-451可能的下游靶基因?yàn)镃AB39、MIF、RAB14、ABCB1等。結(jié)論:1、mi R-451在膀胱癌組織及癌旁組織較在正常膀胱組織中顯著低表達(dá),提示mi R-451可能與膀胱癌的發(fā)生、演變及進(jìn)展密切相關(guān),有可能為膀胱癌的早期診斷及其分子靶向治療提供新的切入點(diǎn)。2、mi R-451的表達(dá)水平和膀胱癌臨床分期及病理分級(jí)呈負(fù)相關(guān),有可能成為膀胱癌新的預(yù)后指標(biāo)。3、mi R-451的過(guò)表達(dá)可減弱膀胱癌細(xì)胞的粘附、二維遷移及侵襲能力。4、生物學(xué)信息軟件分析并預(yù)測(cè)mi R-451的可能下游靶基因是CAB39、MIF、RAB14、ABCB1等,可為膀胱癌靶向分子相關(guān)研究提供新的切入點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：miR-451 膀胱癌 侵襲 轉(zhuǎn)移 靶基因預(yù)測(cè)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 摘要3-5
• abstract5-10
• 英文縮略詞表10-11
• 引言11-15
• 1 闡述MICRORNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到非常重要的作用11-12
• 2 闡述MICRORNA在膀胱癌發(fā)生及演變中的重要調(diào)控意義12-13
• 3 闡明MIR-451 與惡性腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)13-15
• 第一部分：MIR-451 異常表達(dá)與膀胱癌臨床病理特征相關(guān)性分析15-27
• 1 材料與方法15-22
• 1.1 組織標(biāo)本、細(xì)胞與分組15
• 1.2 主要儀器15-16
• 1.3 主要試劑16-17
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法17-22
• 1.5 數(shù)據(jù)收集及統(tǒng)計(jì)分析22
• 2 結(jié)果22-25
• 2.1 總RNA完整性、純度及PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)22-23
• 2.2 miR-451 在不同階段膀胱癌組織及癌旁正常組織中的差異表達(dá)23-24
• 2.3 miR-451 在不同轉(zhuǎn)移潛能膀胱癌細(xì)胞中的差異表達(dá)24-25
• 3 討論25-27
• 第二部分：MIR-451 對(duì)膀胱癌細(xì)胞粘附、遷移及侵襲能力的影響27-38
• 1 材料與方法27-31
• 1.1 細(xì)胞與分組27
• 1.2 主要儀器27-28
• 1.3 主要試劑28
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法28-31
• 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理31
• 2 結(jié)果31-36
• 2.1 轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)31
• 2.2 miR-451 抑制膀胱癌細(xì)胞的粘附能力31-32
• 2.3 miR-451 抑制膀胱癌細(xì)胞的二維遷移能力32-34
• 2.4 miR-451 抑制膀胱癌細(xì)胞的侵襲能力34-36
• 3 討論36-38
• 第三部分：MIR-451 靶基因的生物信息學(xué)預(yù)測(cè)38-44
• 1 材料與方法38
• 1.1 生物信息軟件系統(tǒng)38
• 1.2 方法38
• 2 結(jié)果38-41
• 2.1 經(jīng)mirBase查詢結(jié)果38-39
• 2.2 TargetScan分析結(jié)果39-40
• 2.3 miRTarbase查詢結(jié)果40-41
• 3 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果50-51
• 綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 附錄59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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本文編號(hào)：839199