本文關(guān)鍵詞：雙酚A和唾液酸對(duì)人精子功能的影響研究

  更多相關(guān)文章： 雙酚A 唾液酸 精子獲能 頂體反應(yīng) 酪氨酸磷酸化

【摘要】：環(huán)境中多種因子可以導(dǎo)致不孕不育等生殖健康問題,越來(lái)越多的研究表明,男性長(zhǎng)期暴露在環(huán)境中有害物質(zhì)下會(huì)導(dǎo)致精液質(zhì)量下降,損害男性生育力。本文的研究目的是評(píng)估環(huán)境因子(雙酚A和唾液酸)對(duì)精子的影響,進(jìn)一步探索典型環(huán)境因子影響生殖的機(jī)理,以期為生殖疾病的臨床研究提供依據(jù)。雙酚A(Bisphenol A,BPA)是一種塑料單體和可塑劑,工業(yè)上用來(lái)生產(chǎn)塑料和環(huán)氧樹脂,是全世界最大體積的化工品之一。BPA是一種典型的內(nèi)分泌干擾物(Endocrine disrupting chemical,EDC),具有雌激素樣作用,而已有研究表明,BPA損害雄性哺乳動(dòng)物的生育力。我們的前期工作發(fā)現(xiàn),低濃度BPA(10-3 nM)的體外暴露顯著抑制小鼠精子運(yùn)動(dòng)和頂體反應(yīng)。目前,關(guān)于BPA對(duì)雄性生育力的研究主要集中于動(dòng)物模型,且BPA的使用濃度較高。反之,BPA對(duì)人精子直接作用的研究甚少。健康男性血液、尿液和精液中,BPA的濃度分別為~2.0 ng/ml(~8.8nM)、~3.25 ng/ml(~14.3 nM)和~0.07 ng/mL(~0.31 nM)。然而,這些生理可檢測(cè)濃度的BPA對(duì)人精子的影響尚不清楚。本文首次研究生理可檢測(cè)濃度的BPA對(duì)人精子的直接作用,以期探索不孕不育的新機(jī)制。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?本文旨在探討生理可檢測(cè)濃度的BPA(0,10-3,10-2,10-1,10,103 nM)的體外暴露對(duì)人精子功能的影響,并探索其可能的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法:(1)伊紅-苯胺黑檢測(cè)人精子的存活率;(2)CASA檢測(cè)人精子運(yùn)動(dòng)參數(shù);(3)精子穿透甲基纖維素評(píng)價(jià)人精子超活化運(yùn)動(dòng);(4)CTC染色評(píng)價(jià)人精子獲能;(5)酶標(biāo)儀檢測(cè)人精子胞內(nèi)鈣濃度變化;(6)western blotting定性分析人精子獲能相關(guān)的蛋白酪氨酸磷酸化變化。結(jié)果:低濃度BPA降低人精子存活率、總活力和前向運(yùn)動(dòng),抑制人精子超活化運(yùn)動(dòng)和獲能,并降低人精子獲能相關(guān)的酪氨酸磷酸化水平,但不影響人精子胞內(nèi)鈣濃度。結(jié)論:BPA通過抑制人精子獲能相關(guān)的酪氨酸磷酸化而影響精子功能。由于生理可檢測(cè)濃度的BPA可以抑制人精子功能,提示環(huán)境中BPA污染是造成男性生育障礙的一個(gè)重要因素。唾液酸(Sialic acids,Sias)是一類酸性九碳單糖家族的總稱,其最普遍的兩種形式為N-乙酰神經(jīng)氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)和N-羥乙酰神經(jīng)氨酸(N-glycolyneuraminic acid,Neu5Gc)。但是,人類缺失CMAH基因?qū)е聼o(wú)法表達(dá)Neu5Gc。唾液酸是精子和卵子透明帶表面主要的糖類,也是糖蛋白和糖脂的主要組分,提示其在哺乳動(dòng)物受精過程中具有重要作用。唾液酸能通過精子免疫保護(hù)、附睪精子成熟和精卵結(jié)合等方面調(diào)節(jié)精子功能,但是唾液酸對(duì)人精子的直接作用尚未見報(bào)道。唾液酸既是一種環(huán)境因子,也是人體中重要的生理因子,與人類健康密切相關(guān)。一方面,外源的唾液酸可以從食物中攝取,一部分被人體吸收并通過尿液排出體外,另一部分被納入新合成的內(nèi)源性糖蛋白,從而導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生抗體,影響生殖功能。另一方面,獲能過程中,精子表面結(jié)合唾液酸可以被唾液酸酶水解為游離的唾液酸。然而,這些唾液酸僅僅是一種代謝產(chǎn)物,還是影響精子功能仍有待探索。之前有關(guān)唾液酸影響生殖的研究主要針對(duì)于動(dòng)物模型,本文首次研究唾液酸對(duì)人精子的直接作用,可以更直觀的反映唾液酸對(duì)人精子功能的影響,表明唾液酸作為環(huán)境因子對(duì)影響人精子功能,間接反映唾液酸作為生理因子具有重要的生理作用。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?本文旨在探討Neu5Ac(0,0.1,1,10μM)和Neu5Gc(0,0.1,1,10μM)的體外暴露對(duì)人精子功能的影響,并探索其可能的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法:(1)CASA檢測(cè)人精子運(yùn)動(dòng)參數(shù);(2)精子穿透甲基纖維素評(píng)價(jià)人精子超活化運(yùn)動(dòng);(3)CTC染色評(píng)價(jià)人精子頂體反應(yīng);(4)酶標(biāo)儀檢測(cè)人精子胞內(nèi)鈣濃度變化;(5)Western blotting定性分析人精子獲能相關(guān)的蛋白酪氨酸磷酸化水平。結(jié)果:內(nèi)源性的唾液酸(Neu5Ac)和外源型的唾液酸(Neu5Gc)對(duì)人精子的作用基本一致。Neu5Ac和Neu5Gc降低人精子總活力和前向運(yùn)動(dòng),抑制人精子超活化運(yùn)動(dòng)和獲能,減少人精子胞內(nèi)鈣濃度,降低人精子獲能相關(guān)的酪氨酸磷酸化水平。結(jié)論:Neu5Ac和Neu5Gc通過降低精子胞內(nèi)鈣濃度和抑制精子獲能相關(guān)的酪氨酸磷酸化而影響人精子功能。這些結(jié)果提示,生理?xiàng)l件下內(nèi)源性Neu5Ac參與調(diào)控精子頂體反應(yīng)的發(fā)生時(shí)間,而存在于雌性體內(nèi)的外源性Neu5Gc則對(duì)生殖有不利影響。
【關(guān)鍵詞】：雙酚A 唾液酸 精子獲能 頂體反應(yīng) 酪氨酸磷酸化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R698.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-20
• 1.1 揭示精子功能調(diào)控機(jī)制對(duì)男性不育研究意義重大10-12
• 1.1.1 獲能和頂體反應(yīng)是精子重要的生理功能10-12
• 1.2 環(huán)境因子影響男性生育力12-19
• 1.2.1 常見環(huán)境因子——雙酚A13-15
• 1.2.1.1 雙酚A概述13-14
• 1.2.1.2 雙酚A在雄（男）性生殖系統(tǒng)中的作用14-15
• 1.2.2 常見環(huán)境因子——唾液酸15-19
• 1.2.2.1 唾液酸概述15-16
• 1.2.2.2 唾液酸在雄(男)性生殖系統(tǒng)中的作用16-19
• 1.3 研究目的19-20
• 第2章 材料與方法20-27
• 2.1 材料20-23
• 2.1.1 主要試劑20-22
• 2.1.2 主要儀器22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-26
• 2.2.1 人精液標(biāo)本的收集23
• 2.2.2 主要實(shí)驗(yàn)方法23-26
• 2.3 統(tǒng)計(jì)分析26-27
• 第3章 結(jié)果27-44
• 3.1 BPA對(duì)人精子的作用27-36
• 3.1.1 BPA降低人精子存活率、總活力和前向運(yùn)動(dòng)27-29
• 3.1.2 BPA抑制人精子的超活化運(yùn)動(dòng)29-30
• 3.1.3 BPA抑制人精子獲能30-31
• 3.1.4 BPA不影響人精子[Ca~(2+)]_i和P4-誘導(dǎo)的[Ca~(2+)]_i31-32
• 3.1.5 BPA抑制人精子總蛋白酪氨酸磷酸化32-33
• 3.1.6 討論33-36
• 3.2 唾液酸對(duì)人精子的作用36-44
• 3.2.1 唾液酸降低人精子總活力和前向運(yùn)動(dòng)36-37
• 3.2.2 唾液酸抑制人精子超活化運(yùn)動(dòng)37-38
• 3.2.3 唾液酸抑制人精子自發(fā)的AR和P4-誘導(dǎo)的AR38-39
• 3.2.4 唾液酸降低人精子[Ca~(2+)]_i39-40
• 3.2.5 唾液酸抑制人精子總蛋白酪氨酸磷酸化40-41
• 3.2.6 討論41-44
• 第4章 結(jié)論與展望44-45
• 4.1 結(jié)論44
• 4.2 進(jìn)一步工作的方向44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻(xiàn)46-53
• 附錄53-55
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果55

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