本文關(guān)鍵詞：IL-8及IL-8R抗體抑制雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞增殖和遷移的研究

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【摘要】：背景前列腺癌(Prostate cancer,PCa))是引起男性腫瘤相關(guān)性死亡的常見因素之一,PCa患者大多數(shù)被診斷時已進(jìn)入晚期或發(fā)生轉(zhuǎn)移,因此無法進(jìn)行手術(shù)治療。放射性治療或聯(lián)合使用雄性激素去勢治療局限性PCa的有效且安全治療策略。但晚期或已發(fā)生轉(zhuǎn)移的PCa則是致命性的,目前尚沒有有效治療手段。約30%患者經(jīng)傳統(tǒng)治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā),90%骨髓轉(zhuǎn)移患者將在2年內(nèi)死亡。尤其是近年來,隨著激素去勢治療的使用,越來越多的患者進(jìn)展成雄激素非依賴性前列腺癌,即使腫瘤局限而未發(fā)生轉(zhuǎn)移,依然給臨床治療帶來極大的挑戰(zhàn),因此該類患者又被稱做難治性前列腺癌。IL-8是一種促炎細(xì)胞因子,它在前列腺癌以及前列腺炎癥患者體內(nèi)高表達(dá),與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系。IL-8可由前列腺癌腫瘤細(xì)胞、浸潤的炎癥細(xì)胞分泌,通過作用于腫瘤細(xì)胞表面IL-8受體促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移。高遷移率族蛋白B族(HMGB)與腫瘤的發(fā)生轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。研究表明通過阻斷上述細(xì)胞分泌IL-8的信號,可以終止IL-8的促腫瘤效應(yīng)。但完全阻斷體內(nèi)IL-8分泌信號是十分困難的。本實驗擬采用雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞株DU145模型,探討IL-8抗體和IL-8R抗體對細(xì)胞凋亡、增值和遷移能力的影響。有望為臨床應(yīng)用IL-8抗體和IL-8R抗體治療激素非依賴性PCa提供新的靶點和理論依據(jù)。目的本課題首先通過實驗驗證DU145細(xì)胞能高表達(dá)IL-8;然后,進(jìn)一步采用流式細(xì)胞術(shù)、MTT法、Transwell試驗及免疫熒光實驗探討IL-8抗體和IL-8R抗體能加速DU145細(xì)胞凋亡,并抑制其增殖和遷移,為臨床應(yīng)用IL-8抗體和IL-8R抗體治療雄激素非依賴性PCa提供新的靶點和理論依據(jù)。方法1.DU145細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-8水平的檢測:分別取DU145細(xì)胞培養(yǎng)0h、12h、24h和48h上清500ul,分為0h組(即為對照組)、12h組、24h組和48h組四個組,采用IL-8 ELISA檢測試劑盒,檢測不同培養(yǎng)時間培養(yǎng)上清IL-8含量。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測DU145細(xì)胞凋亡:選取DU145細(xì)胞鋪板,每孔1ml,細(xì)胞濃度5×105/ml,分別加入IL-8抗體,IL-8R抗體及加入等量培養(yǎng)基作為對照組,即anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組。24h后分別檢測三組腫瘤細(xì)胞凋亡情況。3.MTT法檢測DU145細(xì)胞增殖活性:應(yīng)用MTT法分別檢測anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組腫瘤細(xì)胞增殖情況。4.Transwell試驗檢測DU145細(xì)胞遷移能力:應(yīng)用Transwell試驗分別檢測anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組腫瘤細(xì)胞穿過生物膜形成克隆數(shù)多少。5.免疫熒光結(jié)核激光共聚焦顯微鏡檢測DU145細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá):應(yīng)用免疫熒光結(jié)核激光共聚焦顯微鏡檢測分別檢測anti-IL-8組、anti-IL-8R組和Control組腫瘤細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá)量。6.統(tǒng)計學(xué)方法:計量數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差((?)+s)表示,兩組間差異比較采用t檢驗。檢驗水準(zhǔn)α=0.05,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.酶聯(lián)免疫法ELISA檢測IL-8濃度:0h組、12h組、24h組和48h組DU145細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-8濃度分別為(0.03±0.02)ng/ml、(1.21±0.05)ng/ml、(3.10±0.05)ng/ml、(3.91±0.06)ng/ml。各組之間均有統(tǒng)計學(xué)差異(均有P0.001)。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測DU145細(xì)胞凋亡率:結(jié)果顯示與空白對照組相比,DU145細(xì)胞經(jīng)IL-8/IL-8R刺激后凋亡率分別為(9.92±1.02)%和(10.34±1.07)%,均比空白對照組(1.60±0.37)%,且有統(tǒng)計學(xué)差異(T=21.2,P0.001;T=12.5,P0.001)。3.MTT法檢測DU145細(xì)胞增殖活性:加入IL-8抗體和IL-8R抗體后DU145細(xì)胞克隆形成減少,分別為(1.31±0.10)和(1.07±0.14),兩組OD值均顯著低于空白對照組(3.02±0.08),且有統(tǒng)計學(xué)差異(T=9.3,P0.001;T=5.4,P0.001)。4.Transwell檢測DU145細(xì)胞遷移能力:加入IL-8抗體組或IL-8R抗體組細(xì)胞穿過生物膜形成克隆數(shù)分別為(49.67±3.54)個、(49.83±3.44)個,均低于未加抗體的空白對照組克隆個數(shù)(164.83±4.63)個,且有統(tǒng)計學(xué)差異(T=19.3,P0.001;T=9.3,x±sP0.001)。5.免疫熒光檢測DU145細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá):未加抗體的空白對照組細(xì)胞呈現(xiàn)梭形較多,胞質(zhì)豐富,HMGB1表現(xiàn)為紅色大顆粒狀或小塊狀。而加入IL-8/IL-8R抗體后,細(xì)胞多呈現(xiàn)圓形,胞質(zhì)減少,HMGB1表達(dá)信號弱,僅呈現(xiàn)微粒狀或粉塵狀。結(jié)論1.培養(yǎng)雄激素非依賴性前列腺癌DU145細(xì)胞時細(xì)胞可分泌IL-8,且隨時間延長,分泌量增加。2.IL-8抗體和IL-8R抗體可在體外條件下促進(jìn)DU145細(xì)胞凋亡,并抑制該腫瘤細(xì)胞增殖和遷移。
【關(guān)鍵詞】：雄激素非依賴性前列腺癌 IL-8 IL-8抗體 IL-8R抗體 增殖 遷移
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 1 材料和方法13-19
• 2 結(jié)果19-24
• 3 討論24-27
• 4 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 綜述：前列腺癌臨床診斷及治療的研究進(jìn)展32-59
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 附錄59-60
• 在攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章60-61
• 致謝61-62
• 個人簡歷62

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1 張永;IL-8及IL-8R抗體抑制雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞增殖和遷移的研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2016年

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本文編號：753442