本文關(guān)鍵詞：尿毒癥對大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞大電導(dǎo)鈣激活鉀通道的影響

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【摘要】：背景:目前尿毒癥發(fā)病率居高不下,大血管的病變已成為致死致殘的一個(gè)重要并發(fā)癥,但其機(jī)制尚不清楚,可能與離子通道信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常有關(guān)。大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(BK通道)在血管平滑肌細(xì)胞上表達(dá)豐富,對維持血管平滑肌細(xì)胞的膜電位及血管收縮和舒張的動(dòng)態(tài)平衡具有重要的調(diào)節(jié)作用。尿毒癥時(shí)血管重構(gòu)可能與BK通道功能異常有關(guān)。目的:探討尿毒癥對大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道的影響,闡述尿毒癥大動(dòng)脈損傷的分子機(jī)制。方法:(1)將各項(xiàng)檢測基線值無顯著差異的大鼠隨機(jī)分為兩組,尿毒癥模型組采用5/6腎大部分切除法,對照組行假手術(shù)只分離腎被膜。兩組大鼠均于術(shù)前和術(shù)后2、8、16、24、30、36周時(shí)化驗(yàn)血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),以判斷大鼠模型是否建立成功,并測量鼠尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)觀察模型組大鼠血壓的動(dòng)態(tài)變化。模型構(gòu)建成功后,兩組大鼠左側(cè)腎臟組織及胸腹主動(dòng)脈下端進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色法和或馬松三色染色法(Masson)染色處理后用于病理分析,觀察腎臟和血管結(jié)構(gòu)的病理改變。(2)急性酶消化法分離大鼠胸腹主動(dòng)脈得到單個(gè)平滑肌細(xì)胞后,全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)技術(shù)記錄平滑肌細(xì)胞BK通道電流。(3)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(QPCR)和Western blot技術(shù)測定大鼠胸腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道亞單位的mRNA和蛋白的相對表達(dá)量。結(jié)果:(1)動(dòng)物模型的驗(yàn)證:①腎功能:與對照組相比,模型組大鼠至少從術(shù)后第2周開始出現(xiàn)血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)升高,在36周時(shí)血肌酐值為(102.67±3.28)μmol/L,血尿素氮高達(dá)(24.78±5.14)mmol/L,符合造模要求。②腎臟病理變化:模型組殘腎體積增大,形狀不規(guī)則,鏡下殘腎可見腎小管及間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤,腎小管萎縮斷裂擴(kuò)張,腎小球硬化,腎間質(zhì)纖維化。③血管病理改變:模型組大鼠主動(dòng)脈壁局部增厚,平滑肌細(xì)胞增生。④SBP變化:術(shù)前兩組大鼠血壓無明顯差異,模型組大鼠(n=15)SBP至少從術(shù)后第2周開始顯著升高,第2周時(shí)對照組大鼠(n=12)血壓為(113.5±3.6)mmHg,模型組大鼠血壓為(128.7±5.4)mmHg,兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);且隨術(shù)后時(shí)間的延長,模型組血壓逐步升高,在術(shù)后第8、16、24、30、36周時(shí)模型組血壓值分別為(141.2±4.8)mmHg、(153.9±7.4)mmHg、(163.5±6.7)mmHg、(174.2±6.6)mmHg、(181.3±7.7)mmHg,和對照組比較后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(2)主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道電流變化:當(dāng)刺激電壓10m V時(shí),模型組主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道電流密度較對照組明顯降低(P0.05),在刺激電壓為+70m V時(shí),電流密度分別為(199±17)p A/p F和(85±13)p A/p F(n=6);(3)BKα亞基和β1亞基m RNA的表達(dá):應(yīng)用2-ΔΔCt的計(jì)算方法,將對照組大鼠目的基因2-ΔΔCt值設(shè)定為對照值1,得出模型組大鼠的BKα亞基和BKβ1亞基mRNA的表達(dá)均較對照組明顯降低(P0.05);(4)BKα亞基和β1亞基蛋白的表達(dá):使用內(nèi)參β-actin標(biāo)準(zhǔn)化,Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)模型組BK通道α亞基和βl亞基蛋白表達(dá)與mRNA表達(dá)趨勢一致,均較對照組低(P0.05)。結(jié)論:1、5/6腎切除可以引起腎形態(tài)學(xué)和功能上的改變,而且腎臟的損傷可進(jìn)一步導(dǎo)致系統(tǒng)性動(dòng)脈高血壓,左心室肥厚,主動(dòng)脈重構(gòu),說明該模型適用于尿毒癥及其心血管病并發(fā)癥的研究。2、尿毒癥大動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BK通道表達(dá)下調(diào)、BK通道電流密度下降可能是尿毒癥大鼠血壓升高、血管重構(gòu)的重要原因。
【關(guān)鍵詞】：尿毒癥 血管平滑肌細(xì)胞 BK通道
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料與方法13-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料13-18
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組13
• 2.1.2 主要藥物及試劑13-14
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)溶液配制14-17
• 2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)器械17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-31
• 2.2.1 尿毒癥動(dòng)物模型的建立18-21
• 2.2.2 大電導(dǎo)鈣激活鉀通道全細(xì)胞電流的記錄21-23
• 2.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測mRNA的表達(dá)23-27
• 2.2.4 Western Blot檢測蛋白表達(dá)27-30
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理30-31
• 第3章 結(jié)果31-39
• 3.1 模型的鑒定31-35
• 3.1.1 大鼠一般情況和成模率31-32
• 3.1.2 腎臟病理變化32-33
• 3.1.3 血壓的變化33
• 3.1.4 尿毒癥引起心臟的變化33-34
• 3.1.5 尿毒癥引起主動(dòng)脈的變化34-35
• 3.2 BK電流的變化35-36
• 3.3 BK通道 α 和 β1 亞基mRNA表達(dá)的變化36-37
• 3.4 BK通道 α 和 β1 亞基蛋白表達(dá)的變化37-39
• 第4章 討論39-43
• 第5章 結(jié)論43-44
• 致謝44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 綜述50-57
• 參考文獻(xiàn)55-57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 Hudaifa Alani;Asad Tamimi;Nihad Tamimi;;Cardiovascular co-morbidity in chronic kidney disease:Current knowledge and future research needs[J];World Journal of Nephrology;2014年04期

2 李慧穎;張毅;楊紹松;董玲;;平滑肌細(xì)胞鈣離子相關(guān)通道與血管重構(gòu)性疾病[J];心臟雜志;2011年06期

3 韓蓮花;林佳;鄭冬冬;楊向軍;蔣文平;;高血壓大鼠主動(dòng)脈平滑肌BK通道表達(dá)增強(qiáng)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年09期

4 劉燕鋒;王云霞;葛郁芝;張淑華;楊冬梅;吳志婷;;低溫下血壓升高對血管平滑肌細(xì)胞大電導(dǎo)鈣激活鉀通道的影響[J];中華高血壓雜志;2010年09期

5 王如興;李肖蓉;羊鎮(zhèn)宇;李庫林;鄭杰;張�，�;郭素峽;孫莉萍;陸彤;;大電導(dǎo)鈣離子激活鉀通道對糖尿病大鼠冠狀動(dòng)脈血管張力的調(diào)節(jié)[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2010年36期

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本文編號：751395