發(fā)布時(shí)間：2017-08-26 23:42

  本文關(guān)鍵詞：周期素依賴性蛋白激酶5過(guò)度活性與腎小球足細(xì)胞凋亡的關(guān)系研究

  更多相關(guān)文章： 足細(xì)胞 細(xì)胞周期蛋白依賴激酶 p p 細(xì)胞凋亡

【摘要】：目的通過(guò)在腎小球足細(xì)胞中轉(zhuǎn)染p25基因,探討周期素依賴性蛋白激酶5(Cdk5)的活性對(duì)足細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能的影響。方法 2014年度,于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)分化成熟的小鼠離體足細(xì)胞,將足細(xì)胞分為對(duì)照組、空轉(zhuǎn)染組和p25轉(zhuǎn)染組。應(yīng)用p Ad Track-CMV病毒載體克隆p25基因,并轉(zhuǎn)染足細(xì)胞,48 h收集細(xì)胞;采用Western blotting法測(cè)定Cdk5、p25、p35及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase3的表達(dá)水平;應(yīng)用免疫沉淀和同位素γ-32P標(biāo)記法測(cè)定Cdk5活性;足細(xì)胞免疫熒光化學(xué)染色,觀察Cdk5、p35在足細(xì)胞中的表達(dá),以及足細(xì)胞Actin的排列情況。結(jié)果 HEK293細(xì)胞Cdk5表達(dá)陽(yáng)性,p35表達(dá)陰性,腎臟皮質(zhì)、足細(xì)胞和腎小球中均有不同程度的Cdk5和p35的表達(dá)。對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組p25表達(dá)陰性,p25轉(zhuǎn)染組p25表達(dá)陽(yáng)性。各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase3表達(dá)水平和Cdk5活性比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其中p25轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Cleaved caspase3表達(dá)水平和Cdk5活性高于對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組(P0.05)。p25轉(zhuǎn)染組足細(xì)胞內(nèi)Actin排列紊亂,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生異常改變,對(duì)照組和空轉(zhuǎn)染組細(xì)胞內(nèi)Actin排列正常,細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有發(fā)生改變。結(jié)論 p25引起Cdk5過(guò)度活性可致腎小球足細(xì)胞形態(tài)改變,Actin排列紊亂,誘發(fā)細(xì)胞凋亡。因此,Cdk5的活性在維持足細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)和功能方面發(fā)揮重要作用。
【作者單位】： 寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院西北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科;寧夏醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 足細(xì)胞 細(xì)胞周期蛋白依賴激酶 p p 細(xì)胞凋亡
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81160093,81460161) 寧夏自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(NZ14160) 寧夏科技支撐基金資助項(xiàng)目(2013ZYS103)
【分類號(hào)】：R692
【正文快照】： 周期素依賴性蛋白激酶5(Cdk5)與其激活蛋白Ch EMBL公司),Lipofectamin 2000基因轉(zhuǎn)染試劑、p35結(jié)合形成Cdk5/p35復(fù)合物,其活性與中樞神經(jīng)系DMEM培養(yǎng)液(美國(guó)Invitrogen生命技術(shù)公司),胎牛血統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在某些病理因素下,清(美國(guó)Hyclone公司)。p35被水解形成活

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：743301