本文關(guān)鍵詞：ERCC1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義

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【摘要】：目的:隨著人們生活習(xí)性的改變及現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)的提高,腎癌的檢出率逐年上升,如今已經(jīng)成為常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一[1]。腎透明細(xì)胞癌(RCCC)是腎癌最為常見的病理類型[2]。最新研究發(fā)現(xiàn)只有早期的RCCC(T1~2期)可以通過手術(shù)治療,并且遠(yuǎn)期預(yù)后良好[3-5],而晚期的RCCC(T3~4期)對藥物及手術(shù)的療效均較差,平均壽命僅有40個月,其5年的生存率在10%以下。因此研究出新的特異性高的腫瘤標(biāo)記物,提高腎透明細(xì)胞癌初期的診斷率,改善疾病預(yù)后,延長患者壽命,是我們科研工作者一直以來的奮斗目標(biāo)。核苷酸切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(ERCC1)是核苷酸外切除修復(fù)家族中重要成員之一,是一種相對高度保守的單鏈DNA核酸內(nèi)切酶,在DNA損傷修復(fù)和死亡過程當(dāng)中發(fā)揮著緊要的作用,在人類染色體的19q13.2區(qū)域,相對分子量為15k D(1D=1U)。有研究表明,細(xì)胞之所以癌變,主要是因為DNA的損傷不能及時得到修復(fù),最終導(dǎo)致染色體發(fā)生突變,細(xì)胞癌變。而Vineis等[6]研究發(fā)現(xiàn)ERCC1基因是通過識別及修復(fù)損傷的DNA,保證基因完整性的方式參與癌癥的發(fā)生發(fā)展的,因此ERCC1作為修復(fù)損傷的一個關(guān)鍵基因受到人們的廣泛關(guān)注,現(xiàn)階段尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于ERCC1在腎透明細(xì)胞癌中表達(dá)的研究。本實驗通過免疫組織化學(xué)檢測及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)半定量分析,研究ERCC1在人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株及正常腎組織中的表達(dá)情況,探究其在癌癥發(fā)生及發(fā)展中所產(chǎn)生的作用。方法:選取2013年11月到2014年5月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科就診的50例腎透明細(xì)胞癌患者做為研究對象。其中男性占28例,女性占22例,年齡35~78歲,平均(54.40±9.56)歲。所有RCCC患者在手術(shù)治療前均沒有接受放、化療等干預(yù)措施。50例腎透明細(xì)胞癌組織標(biāo)本做為病例組。再從該50例患者中隨機(jī)挑選20例,取距RCCC大于3cm的癌旁腎臟組織標(biāo)本,做為正常對照組。將所有待測樣品均分為兩份,一份在4%的甲醛溶液中固定,然后用石蠟包被,最后切成厚度大約為4μm的薄片待測。另一份置于液氮儲存?zhèn)溆�。按Fuhrman三級分類標(biāo)準(zhǔn)劃分RCCC的分化程度。免疫組織化學(xué)方法檢測:應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測,從蛋白水平對石蠟包埋的組織中的ERCC1進(jìn)行檢測,其中腎透明細(xì)胞癌組織標(biāo)本50例,正常腎組織標(biāo)本20例。在光鏡下應(yīng)用陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)比例和表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行綜合的評分。用χ2檢驗比較RCCC組和對照組中ERCC1的陽性表達(dá)率之間的差異。分析ERCC1與RCCC病理分級、患者年齡和性別的關(guān)系。反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)方法檢測:嚴(yán)格按照c DNA試劑盒的使用說明方法提取組織中的RNA,加入RT反應(yīng)體系的管中,設(shè)置GAPDH基因片段為ERCC1基因表達(dá)的內(nèi)參照基因,在94℃恒溫變性3min的條件下進(jìn)行PCR的擴(kuò)增引物,取標(biāo)本擴(kuò)增出來的產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳,瓊脂糖凝膠為1%的含GV核酸染料,并以DNA Marker(DL2000)為其準(zhǔn)則的片段標(biāo)識,電泳后利用紫外透射儀觀察,結(jié)果以二者之積分吸光度的比值表示。兩組間的吸光度比值采用t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)的分析。用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理。把P0.05定為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1免疫組織化學(xué)染色示:ERCC1在RCCC和正常對照組的腎組織中均有所表達(dá),ERCC1在RCCC組中的陽性表達(dá)率為60%高于ERCC1在正常對照組中的陽性表達(dá)率25%(χ2=7.000,P=0.008);ERCC1的表達(dá)在病理高分化組和中分化組大于低分化組(χ2=8.680,P=0.002)。ERCC1的表達(dá)與年齡無關(guān)(χ2=1.330,P=0.227)。ERCC1蛋白的表達(dá)與性別無關(guān)(χ2=1.640,P=0.187)。2 RT-PCR結(jié)果顯示:ERCC1在腎透明細(xì)胞癌的表達(dá)量為0.280±0.030,而在癌旁正常組織的表達(dá)量為0.104±0.011,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=36.185,P=0.001)。結(jié)論:1 ERCC1在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)高于癌旁正常組織中的表達(dá)。2 ERCC1的表達(dá)影響腎透明細(xì)胞癌的病理分化。3年齡和性別對ERCC1的表達(dá)沒有影響。4 ERCC1的表達(dá),在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生及發(fā)展中可能起到了重要的作用,未來有可能成為判斷腫瘤進(jìn)展情況的重要指標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：腎透明細(xì)胞癌 ERCC1 免疫組化 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) 核苷酸切除修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11
• 材料與方法11-15
• 結(jié)果15-17
• 附圖17-19
• 附表19-20
• 討論20-24
• 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-29
• 綜述29-35
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 致謝35-36
• 個人簡介36

【參考文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 柴文剛;ERCC1與RRM1在胰腺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];吉林大學(xué);2013年

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本文編號：743034