本文關(guān)鍵詞：慢性腎小球腎炎病證結(jié)合唾液蛋白質(zhì)組學(xué)研究

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【摘要】：目的應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDITOF-MS)技術(shù),選擇西醫(yī)確診慢性腎小球腎炎(CGN)患者,根據(jù)病證結(jié)合分組,并與體檢正常的健康人群對(duì)照,進(jìn)行唾液蛋白質(zhì)組學(xué)研究,初步建立慢性腎小球腎炎腎虛證的診斷模型;并從蛋白質(zhì)組水平初步探討中醫(yī)同病異證的現(xiàn)代科學(xué)基礎(chǔ);建立具有中醫(yī)特色無創(chuàng)傷的唾液蛋白質(zhì)組診斷技術(shù),進(jìn)一步推動(dòng)微觀辨證學(xué)的發(fā)展和促進(jìn)中醫(yī)診斷學(xué)的現(xiàn)代化。方法采集88例唾液標(biāo)本,其中正常對(duì)照者45例均為健康體檢正常者。所有疾病患者均經(jīng)過腎活檢病理檢查明確診斷。按病證結(jié)合分為以下兩大組:(1)慢性腎小球腎炎與正常組:比較慢性腎小球腎炎患者與正常對(duì)照者蛋白質(zhì)表達(dá)譜的差異。(2)中醫(yī)同病異證分組:即以證候?yàn)榫V進(jìn)行分組,全部病例按中醫(yī)虛證辨證標(biāo)準(zhǔn)分為脾虛、腎虛、脾腎兩虛和非脾腎虛4組,與正常組對(duì)照進(jìn)行研究。采用液態(tài)芯片(WCX磁珠)制備唾液樣品,結(jié)合MALDI-TOF-MS質(zhì)譜儀對(duì)所有慢性腎小球腎炎患者和正常對(duì)照組的唾液進(jìn)行蛋白質(zhì)的質(zhì)譜檢測(cè)。設(shè)定所有唾液樣本檢測(cè)的蛋白質(zhì)采集分子量相對(duì)范圍為2000~25000Da,對(duì)每個(gè)組合內(nèi)的相同質(zhì)荷比不同含量的蛋白進(jìn)行分析比較,找到組合內(nèi)蛋白含量有顯著差異的質(zhì)荷比峰。所得到蛋白質(zhì)的質(zhì)荷比峰值用Biomarker Wizard3.0軟件過濾噪音,將軟件處理后的蛋白質(zhì)質(zhì)譜峰強(qiáng)度值資料導(dǎo)入Biomarker Pattern Software5.0.2,采用決策樹算法,確定最佳的篩選模型。選出組合內(nèi)含量有顯著差異(P0.05)的蛋白質(zhì)波峰初步建立相應(yīng)疾病、證候及病證結(jié)合的唾液蛋白質(zhì)組診斷模型。將全部標(biāo)本用隨機(jī)數(shù)字表法分為學(xué)習(xí)訓(xùn)練組和驗(yàn)證組,用所建立的診斷模型分別在學(xué)習(xí)模式和測(cè)試模式下對(duì)樣本進(jìn)行分類診斷,對(duì)測(cè)試組標(biāo)本在測(cè)試模式下進(jìn)行雙盲檢測(cè),驗(yàn)證和評(píng)估所建立診斷模型的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性,綜合評(píng)價(jià)其診斷效率。結(jié)果(1)按西醫(yī)疾病分組:正常對(duì)照組與慢性腎小球腎炎組兩組樣本共88例,對(duì)所有的樣本檢測(cè)質(zhì)譜圖進(jìn)行分析比較,兩個(gè)組共得到蛋白質(zhì)峰為410個(gè),其中224個(gè)統(tǒng)計(jì)差異顯著的蛋白峰(P0.05),選擇質(zhì)荷比(m/z)為7101.90Da和2616.91Da兩個(gè)蛋白質(zhì)峰進(jìn)行建模,識(shí)別率為93.02%,預(yù)測(cè)能力91.11%。臨床回代檢驗(yàn)結(jié)果,43例慢性腎小球腎炎患者中有35例被準(zhǔn)確檢出為慢性腎小球腎炎,45例正常組中有36例被準(zhǔn)確檢出為非慢性腎小球腎炎。結(jié)果表明,該診斷模型的準(zhǔn)確率為80.68%(71/88),靈敏度為81.40%(35/43),特異度為80.00%(36/45)。(2)按中醫(yī)同病異證分組:將慢性腎小球腎炎患者按照中醫(yī)虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)分為脾虛、腎虛、脾腎兩虛3組,和45例正常對(duì)照組共81例。①虛證組與正常組對(duì)比:1)將脾虛組和正常對(duì)照組的唾液樣本檢測(cè)質(zhì)譜圖進(jìn)行分析比較,得到具有統(tǒng)計(jì)差異的蛋白質(zhì)峰共155個(gè),通過遺傳算法找到3個(gè)差異顯著的蛋白峰,質(zhì)荷比(m/z)分別為:7101.905Da、3641.061Da、3931.962Da;2)分析比較腎虛組和正常對(duì)照組的唾液樣本檢測(cè)質(zhì)譜圖,共得到227個(gè)具有統(tǒng)計(jì)差異的蛋白質(zhì)峰。通過遺傳算法找到腎虛患者有3個(gè)蛋白質(zhì)峰,質(zhì)荷比(m/z)分別為:2431.669Da、4660.730Da、7101.905Da顯著高于正常人,建立診斷模型,識(shí)別率為90.00%,預(yù)測(cè)能力97.78%。臨床回代檢驗(yàn)結(jié)果,21例慢性腎小球腎炎腎虛證患者中有18例被準(zhǔn)確檢出為腎虛證,45例正常組中有42例被準(zhǔn)確檢出為非腎虛證。該診斷模型的準(zhǔn)確率為90.91%(60/66),靈敏度為85.71%(18/21),特異度為93.33%(42/45);3)分析對(duì)比脾腎兩虛組和正常對(duì)照組的唾液樣本檢測(cè)質(zhì)譜圖,共得到具有統(tǒng)計(jì)差異的蛋白質(zhì)峰103個(gè),通過遺傳算法找到2個(gè)差異顯著的蛋白峰,質(zhì)荷比(m/z)分別為:7101.905Da、2616.913Da。②虛證組組間對(duì)比:1)對(duì)脾虛組和腎虛組樣本檢測(cè)質(zhì)譜圖進(jìn)行分析比較,共得到具有統(tǒng)計(jì)差異的蛋白質(zhì)峰35個(gè),通過遺傳算法找到1個(gè)差異顯著的蛋白峰,質(zhì)荷比(m/z):2952.974Da;2)對(duì)脾虛組和脾腎兩虛組樣本檢測(cè)質(zhì)譜圖進(jìn)行分析比較,共得到具有統(tǒng)計(jì)差異的蛋白質(zhì)峰32個(gè),通過遺傳算法找到1個(gè)差異顯著的蛋白峰,質(zhì)荷比(m/z):2102.998Da;3)對(duì)腎虛組和脾腎兩虛組樣本檢測(cè)質(zhì)譜圖進(jìn)行分析比較,共得到具有統(tǒng)計(jì)差異的蛋白質(zhì)峰12個(gè),通過遺傳算法找到1個(gè)差異顯著的蛋白峰,質(zhì)荷比(m/z):3872.561Da。結(jié)論本研究運(yùn)用液態(tài)芯片結(jié)合MALDI-TOF-MS技術(shù)對(duì)慢性腎小球腎炎患者與正常對(duì)照組的睡液蛋白質(zhì)進(jìn)行表達(dá)譜檢測(cè),從唾液蛋白質(zhì)組初步篩選出可用于慢性腎小球腎炎病證結(jié)合診斷的具有特異性的生物標(biāo)記物,探索并建立了相關(guān)病證結(jié)合的診斷模型。該方法與傳統(tǒng)的疾病生物標(biāo)志物相關(guān)的檢測(cè)方法相比較,具有無創(chuàng)傷性、操作簡(jiǎn)便、快捷、敏感性及特異性高等特點(diǎn),其篩選出的生物標(biāo)志物對(duì)于準(zhǔn)確快速地疾病診斷、證候鑒別、預(yù)后判斷均具有重要的臨床意義。因此,本研究為慢性腎小球腎炎的早期診斷及證候鑒別開辟了新的途徑,同時(shí)為中醫(yī)微觀辨證學(xué)的研究和發(fā)展開啟了新的思路和研究領(lǐng)域。
【關(guān)鍵詞】：唾液蛋白質(zhì)組 慢性腎小球腎炎 病證結(jié)合 中醫(yī)微觀辨證 診斷模型 基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R692.31
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-13
• 縮略詞表13-14
• 前言14-17
• 臨床研究17-27
• 1 實(shí)驗(yàn)材料17
• 2 研究方法17-18
• 2.1 研究對(duì)象17
• 2.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)17-18
• 2.3 研究分組18
• 3 主要研究步驟18-20
• 3.1 標(biāo)本收集18
• 3.2 標(biāo)本處理18
• 3.3 納米磁珠活化18-19
• 3.4 納米磁珠上樣19
• 3.5 納米磁珠洗脫19
• 3.6 數(shù)據(jù)收集19
• 3.7 生物信息學(xué)分析與診斷模型建立19-20
• 4 研究結(jié)果20-27
• 4.1 各組年齡、性別的比較結(jié)果20
• 4.2 慢性腎小球腎炎與正常組比較結(jié)果20-22
• 4.3 中醫(yī)同病異證分組結(jié)果22-27
• 討論27-31
• 1 蛋白質(zhì)組學(xué)——后基因組時(shí)代生命科學(xué)的核心前沿領(lǐng)域27-28
• 2 蛋白質(zhì)組學(xué)研究新技術(shù)28-29
• 3 病證結(jié)合研究結(jié)果評(píng)估29-31
• 結(jié)語31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 附錄35-54
• 綜述54-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 致謝61

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張伯禮;王曉暉;;證候及其現(xiàn)代研究[J];繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育;2006年19期

2 郭麗宏;俞光巖;施文元;;唾液檢測(cè)的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

3 盧秀波;王利;王家祥;婁衛(wèi)華;余捷凱;鄭樹;;血清蛋白質(zhì)指紋圖譜在甲狀腺癌診斷中的應(yīng)用[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2006年06期

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本文編號(hào)：735259