本文關(guān)鍵詞：沉默SET8的表達(dá)對(duì)腎細(xì)胞癌惡性表型的影響及其與Wnt信號(hào)通路相關(guān)性的機(jī)制研究

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【摘要】：目的研究通過(guò)沉默人腎細(xì)胞癌中組蛋白賴氨酸甲基化轉(zhuǎn)移酶SET8的表達(dá),從而研究其對(duì)腎細(xì)胞癌惡性表型的影響,并且研究腎細(xì)胞癌中SET8與Wnt信號(hào)通路相關(guān)靶基因和靶蛋白的作用,探討其存在的臨床意義。方法1、沉默SET8的表達(dá)對(duì)腎癌細(xì)胞ACHN及786-0的增殖、凋亡、周期及侵襲轉(zhuǎn)移的影響：首先構(gòu)建SET8基因敲除的慢病毒載體質(zhì)粒pLKO.1/shSET8-1及pLKO.1/shSET8-2,將其分別轉(zhuǎn)染至腎癌細(xì)胞ACHN及786-0中,使腎癌細(xì)胞中SET8的表達(dá)下調(diào)。采用MTT法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖的影響；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響：采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期的影響。采用Transwell體外侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默SET8的表達(dá)對(duì)腎癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。2、SET8與Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因的作用：采用coimmunoprecipitation(co-IP)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腎細(xì)胞癌中SET8與Wnt相關(guān)基因TCF4和LEF1相互作用關(guān)系。3、沉默SET8的表達(dá)對(duì)Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響：用Western blot法檢測(cè)沉默SET8后的腎癌細(xì)胞ACHN及786-0中Wnt信號(hào)通路的相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果1、相比于對(duì)照組,ACHN和786-0兩種腎癌細(xì)胞在轉(zhuǎn)染了SET8基因敲除的病毒載體質(zhì)粒pLKO.1/shSET8-1及pLKO.1/shSET8-2后,凋亡的細(xì)胞數(shù)目均沒(méi)有明顯差異(p0.05)；但是兩種細(xì)胞的增殖能力在沉默SET8后明顯下降(p0.01)；沉默SET8影響ACHN和786-0細(xì)胞周期,進(jìn)入S期的細(xì)胞明顯增多(p0.01),沉默SET8后ACHN和786-0細(xì)胞的遷移及侵襲能力均明顯減弱(p0.01)。2、通過(guò)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)提示SET8可以與TCF4、LEF1相互作用(p0.05)。3、Western blot實(shí)驗(yàn)顯示沉默SET8的ACHN和786-0細(xì)胞中cyclin D1, LEF1, Surivrin and H4K20me-1的表達(dá)明顯下調(diào)(p0.01)。結(jié)論沉默SET8的表達(dá)可以影響腎細(xì)胞癌ACHN和786-0細(xì)胞的惡性表型,抑制腎腫瘤細(xì)胞的增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入S期,使腎腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力減弱。SET8可以與Wnt信號(hào)通路中的相關(guān)蛋白TCF4和LEF1作用,并且沉默SET8可以使Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：SET8 腎細(xì)胞癌 Wnt信號(hào)通路 TCF4 LEF1
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-17
• 參考文獻(xiàn)13-17
• 材料與方法17-28
• 一、材料與試劑17-20
• 二、試驗(yàn)方法20-27
• 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27-28
• 結(jié)果28-35
• 一、沉默SET8對(duì)腎細(xì)胞癌的增殖、凋亡、細(xì)胞周期及侵襲、轉(zhuǎn)移的影響28-33
• 二、SET8與Wnt信號(hào)通路相關(guān)基因的作用33-34
• 三、沉默SET8對(duì)Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響34-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 綜述41-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 致謝48-49

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 韋秀望;易曉明;唐朝朋;徐振宇;梁建波;藍(lán)志相;周文泉;;腎細(xì)胞癌組織中的組蛋白甲基化酶表達(dá)及其臨床意義[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2015年10期

2 易曉明;唐朝朋;許松;何昊瑋;王龍信;張征宇;徐振宇;葛京平;周文泉;;15-氧代繡線菊內(nèi)酯對(duì)轉(zhuǎn)移性腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN惡性表型的抑制作用[J];江蘇醫(yī)藥;2015年11期

3 易曉明;許松;何昊瑋;王龍信;唐朝朋;張征宇;徐振宇;葛京平;周文泉;;15-氧代繡線菊內(nèi)酯對(duì)腎癌786-0細(xì)胞增殖的抑制作用[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2014年12期

4 董杰;王龍信;唐朝朋;邢瀟瀟;張征宇;葛京平;秦衛(wèi)軍;田豐;;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β不敏感的樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗對(duì)腎細(xì)胞癌荷瘤小鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的影響[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2013年05期

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本文編號(hào)：732963