發(fā)布時(shí)間：2017-08-24 06:13

  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)高糖致足細(xì)胞凋亡的作用

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【摘要】：背景：糖尿病腎病(DN)是糖尿病常見(jiàn)的慢性微血管并發(fā)癥,隨糖尿病發(fā)病率升高,DN已成為終末期腎病(ESRD)的主要病因。研究表明,在DN的發(fā)生和發(fā)展中,足細(xì)胞凋亡與蛋白尿的產(chǎn)生密切相關(guān),改善和維持足細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能可以改善糖尿病腎損傷。臨床上DN的治療以降低血糖、控制血壓和減少蛋白尿等對(duì)癥治療及腎臟替代治療為主,目前尚無(wú)令人滿意的治療方法。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)具有亞全能分化潛能,廣泛用于多種疾病的治療,也為DN的治療提供了新方向。研究證明,MSCs移植可以降低糖尿病大鼠血糖,減少蛋白尿,改善腎損傷,但其具體機(jī)制仍不明確。我們采用高糖刺激足細(xì)胞建立凋亡模型,通過(guò)MSCs和足細(xì)胞共培養(yǎng)探討MSCs對(duì)足細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。目的：探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUC-MSCs)對(duì)高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。方法：采用貼壁法制備人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,對(duì)獲取的HUC-MSCs通過(guò)細(xì)胞形態(tài)觀察,多向分化(成骨誘導(dǎo)分化和成脂誘導(dǎo)分化),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型進(jìn)行鑒定。小鼠足細(xì)胞分為4組：(1)正常糖組(NG)；(2)高糖組(HG)；(3)甘露醇滲透壓對(duì)照組(NG+MA);(4)HUC-MSCs和足細(xì)胞transwell共培養(yǎng)組(HUC-MSCs)。分別刺激72h后,檢測(cè)足細(xì)胞凋亡指標(biāo),包括蛋白印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白PARR、Bcl-2的表達(dá),采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)足細(xì)胞凋亡率,Hoechst染色檢測(cè)足細(xì)胞凋亡水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)HUC-MSCs分泌HGF水平。同時(shí),采用HGF抗體中和HGF以消除其作用,或加入rhHGF模擬MSC作用,探討HGF在HUC-MSCs抗凋亡機(jī)制中的作用。結(jié)果：1.制備培養(yǎng)的HUC-MSCs呈長(zhǎng)梭形,平行或漩渦狀排列；油紅O染色發(fā)現(xiàn)細(xì)胞漿有染成紅色的油滴空泡；茜素紅染色發(fā)現(xiàn)細(xì)胞漿中有染成酒紅色的鈣沉積；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HUC-MSCs高表達(dá)常用的人間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記CD90(98.5%),CD105(64.3%),CD73(96.3%)；不表達(dá)造血細(xì)胞標(biāo)記CD34(0.3%),CD45(0.5%)。2.高糖刺激24、48、72h后,足細(xì)胞PARP的表達(dá)增多,且隨刺激時(shí)間延長(zhǎng)而持續(xù)增高。各實(shí)驗(yàn)組處理72h后,檢測(cè)凋亡相關(guān)指標(biāo)。免疫印跡法顯示：與NG組比較,HG組凋亡標(biāo)志蛋白PARP的表達(dá)增多、Bcl-2表達(dá)減少(P0.05),與HG組比較,HUC-MSCs共培養(yǎng)組PARP的表達(dá)減少、Bcl-2表達(dá)增加(P0.05)。流式細(xì)胞術(shù)顯示：與NG組比較,HG組足細(xì)胞凋亡率增多(P0.05)；與HG組比較,HUC-MSCs共培養(yǎng)組足細(xì)胞凋亡率減少(P0.05)。Hoechst染色顯示：HG組足細(xì)胞細(xì)胞核出現(xiàn)花瓣?duì)罨蚬炭s變小,呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài)；HUC-MSCs共培養(yǎng)組細(xì)胞核形態(tài)正常,呈長(zhǎng)橢圓形,無(wú)凋亡細(xì)胞核改變。與NG組比較,HG組足細(xì)胞凋亡率增多(P0.05)；與HG組比較,HUC-MSCs共培養(yǎng)組足細(xì)胞凋亡率減少(P0.05)。NG+Ma組無(wú)上述凋亡指標(biāo)的改變。3. ELISA檢測(cè)HUC-MSCs分泌大量HGF。加入rhHGF后,與高糖組比較,rhHGF組PARP的表達(dá)減少、Bcl-2表達(dá)增加(P0.05),足細(xì)胞凋亡率減少(P0.05),細(xì)胞核形態(tài)正常,呈長(zhǎng)橢圓形,無(wú)凋亡細(xì)胞核改變。與HUC-MSCs組比較,加入HGF中和抗體后PARP的表達(dá)增多,Bcl-2表達(dá)減少(P0.05)足細(xì)胞凋亡率增多(P0.05),足細(xì)胞細(xì)胞核出現(xiàn)花瓣?duì)罨蚬炭s變小,呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài)。結(jié)論：1. HUC-MSCs可以減輕高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡。2. HUC-MSCs對(duì)高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用可能與分泌HGF有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 間充質(zhì)干細(xì)胞 足細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-23
• 結(jié)果23-25
• 討論25-30
• 結(jié)論30-31
• 附圖表31-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 綜述42-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文53-54
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表54

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