本文關(guān)鍵詞：靶向survivin基因的shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其對膀胱癌EJ細(xì)胞凋亡的影響

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【摘要】：目的:構(gòu)建survivin基因特異性shRNA慢病毒干擾載體,轉(zhuǎn)染膀胱癌EJ細(xì)胞,研究survivin基因在膀胱癌細(xì)胞株中的表達抑制情況,觀察survivin shRNA慢病毒載體對EJ細(xì)胞凋亡的影響.方法:以survivin基因為靶標(biāo)設(shè)計shRNA干擾序列,克隆至p SIH1-H1-cop GFP慢病毒載體.干擾載體鑒定正確后轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞株EJ細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察GFP表達情況,實時熒光定量PCR檢測survivin基因mRNA含量變化,Western blotting法檢測survivin蛋白表達,Annexin V-FITC/PI雙染法檢測EJ細(xì)胞凋亡情況.結(jié)果:PCR擴增鑒定、DNA測序證實survivin慢病毒干擾載體構(gòu)建成功;EJ細(xì)胞經(jīng)干擾載體處理后,EJ細(xì)胞survivin基因mRNA水平下調(diào)了73.33%,蛋白表達受到顯著抑制,EJ細(xì)胞凋亡率達到24.39%.結(jié)論:成功構(gòu)建了靶向survivin基因的shRNA重組慢病毒干擾載體,可以顯著降低轉(zhuǎn)染細(xì)胞survivin基因的表達水平,并有效提高膀胱癌細(xì)胞凋亡率.
【作者單位】： 蘭州大學(xué)第二醫(yī)院泌尿外科研究所甘肅省泌尿系統(tǒng)疾病研究重點實驗室甘肅省泌尿系臨床醫(yī)學(xué)中心;
【關(guān)鍵詞】： 載體構(gòu)建 survivin 短發(fā)卡狀RNA(shRNA) 膀胱癌 細(xì)胞凋亡
【基金】：甘肅省科技計劃項目(1308RJYA056) 甘肅省泌尿系疾病臨床醫(yī)學(xué)中心開放課題基金項目(mnlczxkf-28) 蘭州大學(xué)中央高校基本科研業(yè)務(wù)費項目(lzujbky-2014-165)
【分類號】：R737.14
【正文快照】： 膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,占中國泌尿系腫瘤發(fā)病率首位,2012年全國腫瘤登記地區(qū)膀胱癌的發(fā)病率為6.61/10萬,列惡性腫瘤發(fā)病率的第9位,而在西方國家的泌尿系腫瘤中發(fā)病率居第2位,僅次于前列腺癌.因此探討相關(guān)癌基因與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)性對提高膀胱癌療效具有

【共引文獻】

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本文編號：683078