本文關鍵詞：抑制性中性粒細胞亞群與腎移植術后臨床狀態(tài)的研究

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【摘要】：背景及目的:中性粒細胞(Neutrophil granulocyte)是外周血中含量最為豐富的免疫細胞亞群,一般認為是固有免疫系統(tǒng)內抗外源性病原體的重要細胞。近來的研究表明,中性粒細胞會根據環(huán)境信號的改變分化成不同表型的細胞亞群,可以在多種水平參與調控固有及適應性免疫應答,并在缺血再灌注損傷、創(chuàng)傷、腫瘤和感染等疾病的發(fā)病中發(fā)揮重要的作用。腎移植術后受者需長期口服免疫抑制劑,主要針對適應性免疫應答,尤其是T細胞的功能,而中性粒細胞等固有免疫細胞涉及較少。近年來隨著研究的深入,固有免疫細胞在腎移植術后免疫功能維持過程中的作用逐漸受到重視。近來在腫瘤、HIV感染以及自身免疫性疾病過程中體內存在一個中性粒細胞亞群,該亞群在密度梯度離心分離外周血細胞過程中,與外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell)在同一層面,其密度低于與紅細胞在同一層面的常規(guī)密度中性粒細胞(normal density granulocytes),稱之為低密度粒細胞(low-density granulocytes,LDGs),通過表型鑒定發(fā)現(xiàn),該亞群屬于成熟并活化的中性粒細胞,在體外實驗中發(fā)現(xiàn)其可抑制T細胞反應。最近在人實驗性內毒素血癥體外模型中發(fā)現(xiàn)了一個具有抑制性免疫功能的中性粒細胞亞群,其表型為CD15+CD~(16bright)/CD~(62Ldim )CD11b+CD11c+,目前研究證實其可以通過CD11b與T細胞相互作用,并可以通過表達Arg-1或CD274(PD-L1)以及在免疫突觸釋放過氧化氫等方式抑制T細胞的活化。在HIV感染并出現(xiàn)T細胞功能障礙的患者中發(fā)現(xiàn),中性粒細胞表達CD274與免疫抑制狀態(tài)有關,但并不局限于CD16+CD~(62Ldim )亞群。既往的器官移植研究多集中于T細胞、B細胞以及樹突狀細胞等,而對固有免疫細胞中的中性粒細胞涉及極少。近年來發(fā)現(xiàn)中性粒細胞具有不同的亞群,且參與了免疫調控,可以介導對T細胞的免疫抑制,提示中性粒細胞是免疫反應活躍的參與者,可能參與了腎移植術后免疫狀態(tài)的維持。因此,本研究擬通過觀察中性粒細胞抑制性亞群在腎移植術后不同臨床狀態(tài)下的表達,以期明確中性粒細胞抑制性亞群是否參與了腎移植術后免疫平衡的維持,以及明確其是否可以用于腎移植術后免疫狀態(tài)的監(jiān)測,為臨床治療提供參考和依據,并為下一步研究奠定基礎。1、觀察腎移植術后受者外周血ldgs在術后早期、發(fā)生移植腎功能延遲恢復(delayedgraftfunction,dgf)、感染和排斥反應沖擊治療過程中表達比例的變化,通過密度梯度離心方法分離外周血單個核細胞,并通過流式細胞術觀察腎移植術后早期以及感染、dgf、排斥反應等各種不同臨床狀態(tài)下受者外周血ldgs表達比例的變化趨勢。以揭示其在腎移植術后早期的表達與受者不同臨床狀態(tài)及移植腎功能之間的關系。2、通過流式細胞術分析腎移植術后不同臨床狀態(tài)下CD~(16bright)/CD~(62ldim)中性粒細胞亞群比例變化趨勢,以及中性粒細胞CD15、CD16、CD11b、CD274等分子的表達。觀察腎移植術后不同臨床狀態(tài)下CD~(16bright)/CD~(62ldim)中性粒細胞亞群比例變化趨勢,以及CD15、CD16、CD11b、CD274等分子的表達,并根據CD16/CD62l區(qū)分不同的中性粒細胞亞群,以期發(fā)現(xiàn)與腎移植術后免疫平衡狀態(tài)相關的抑制性中性粒細胞亞群,如CD~(16bright)/CD~(62ldim)中性粒細胞亞群比例變化及效應分子CD274表達的情況。結果:1、腎移植受者術后早期出現(xiàn)ldgs比例提高,并且術后早期發(fā)生dgf時也表達高水平的ldgs,兩者之間無統(tǒng)計學差異(p0.05),提示術后早期存在的供體腎缺血再灌注損傷以及早期給予的免疫誘導等治療可能參與了ldgs比例提高;術后發(fā)生cmv感染及非cmv感染受者ldgs比例顯著高于穩(wěn)定期受者(p0.01,p0.05),由于cmv感染時中性粒細胞和內皮細胞損傷是首當其沖被感染的細胞,因此感染過程中伴隨中性粒細胞亞群的改變;術后發(fā)生排斥反應給予沖擊治療過程中,沖擊后腎功能恢復的患者ldgs表達上調,明顯高于正常對照和穩(wěn)定期受者(p0.001,p0.01),提示ldgs表達變化與沖擊治療有關,與腎功能恢復及排斥反應本身關系并不明確;通過表型分析,在術后不同臨床狀態(tài)的ldgs均為中性粒細胞。2、腎移植術后受者CD~(16bright)/CD~(62ldim)中性粒細胞亞群在不同臨床狀態(tài)下表達比例有顯著差異(p0.0001),正�；謴徒M該亞群比例顯著高于健康對照組(p0.001)和穩(wěn)定期對照組(p0.001),正常恢復組該亞群比例顯著高于dgf組(p0.01),可能與dgf組受者免疫抑制劑劑量較低,或較強的缺血再灌注損傷對中性粒細胞的激活作用有關;CD~(16bright)/CD~(62ldim)中性粒細胞亞群比例在發(fā)生排斥反應給予沖擊治療過程中與正常對照和穩(wěn)定期對照比較有顯著差異(p0.01),與排斥反應沖擊前相比,在腎功能恢復組該亞群比例顯著升高(p0.01),并高于沖擊治療后腎功能未恢復組(p0.05),該亞群中性粒細胞可通過多種途徑抑制t細胞反應,其比例升高,可能有利于排斥反應的控制;CD~(16bright)/CD~(62ldim)中性粒細胞亞群在發(fā)生cmv感染時的表達顯著高于穩(wěn)定期對照組方法:(P0.001),并隨著治療時間的延長,其表達比例逐漸下降。提示治療過程中調整免疫抑制劑使用提高了抗CMV感染免疫水平。分析中性粒細胞相關表型發(fā)現(xiàn),CD16表達在各組間有顯著差異(P0.01),兩組間比較時,CMV感染組的CD16 MFI表達顯著低于排斥反應沖擊治療后腎功能未恢復組(P0.01),可能是沖擊治療過程中大劑量糖皮質激素動員骨髓池中的中性粒細胞較多,而CMV感染組受者多處于過度抑制狀態(tài),尤其是骨髓抑制狀態(tài)下更不利于中性粒細胞的動員,導致來自骨髓動員的CD16中性粒細胞較少;CD274表達于外周血,并不局限于LDGs及CD~(16bright)/CD~(62Ldim )中性粒細胞亞群,中性粒細胞在受者發(fā)生排斥反應給予沖擊治療有效時可高表達CD274,該分子的表達可能與排斥反應恢復過程中免疫平衡有關。結論:1、腎移植術后穩(wěn)定組和健康對照組受者外周血PBMC中LDGs亞群比例較低,兩者無統(tǒng)計學差異;而腎移植術后外周血PBMC中LDGs亞群比例提高,與是否出現(xiàn)DGF等并發(fā)癥無關,并隨著腎移植術后恢復,其比例在術后3-4周下降,可能與缺血再灌注損傷和中性粒細胞的半壽期較短有關;排斥反應沖擊治療后外周血PBMC中LDGs亞群比例增加,可能與沖擊治療有關;2、腎移植術后早期恢復受者外周血表達CD~(16bright)/CD~(62Ldim )亞群比例高于術后發(fā)生DGF患者,健康對照組和腎功能穩(wěn)定組受者外周血該亞群中性粒細胞比例較低;3、腎移植術后受者發(fā)生排斥反應時外周血中性粒細胞CD~(16bright)/CD~(62Ldim )亞群比例降低,甚至低于穩(wěn)定期受者,而給予沖擊治療并恢復的受者該亞群比例較高,沖擊后未恢復的受者該亞群比例較低。提示該亞群與免疫抑制程度有關,該亞群的表達上調有利于控制排斥反應;4、CMV感染時,中性粒細胞CD~(16bright)/CD~(62Ldim )亞群比例明顯高于穩(wěn)定期對照,與免疫抑制狀態(tài)下易發(fā)生CMV感染等機會性感染有關。并且在治療過程中調整免疫抑制劑用量,該細胞亞群比例增加;5、中性粒細胞穩(wěn)定期受者及感染、排斥反應等過程中不表達CD274,而受者在排斥反應給予沖擊治療有效后高表達CD274,提示CD274表達可能參與了控制排斥反應的過程。
【關鍵詞】：中性粒細胞 腎移植 排斥反應 感染
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R699.2
【目錄】：

• 縮略詞表4-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-19
• 第一部分 低密度中性粒細胞與腎移植術后臨床狀態(tài)的研究19-34
• 1. 材料及方法19-26
• 2. 結果26-31
• 3. 討論31-33
• 4. 結論33-34
• 第二部分 抑制性中性粒細胞亞群與腎移植術后臨床狀態(tài)的研究34-50
• 1. 材料與方法34-37
• 2. 結果37-48
• 3. 討論48-49
• 4. 結論49-50
• 結論50-51
• 參考文獻51-57
• 文獻綜述57-70
• 參考文獻65-70
• 個人簡歷70-71
• 攻讀學位期間參與的科研課題71
• 發(fā)表的論文71-72
• 致謝72

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