本文關(guān)鍵詞：IgA腎病尿液蛋白標(biāo)志物的篩選及驗(yàn)證

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【摘要】：背景和目的：IgA腎病(IgA nephropathy, IgAN)是我國(guó)乃至世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾病,也是導(dǎo)致終末期腎病的最主要病因。目前臨床上對(duì)其診斷主要依賴腎活檢。多數(shù)IgAN是進(jìn)展性疾病,而腎活檢作為有創(chuàng)操作不宜反復(fù)進(jìn)行,因此尋找IgAN無(wú)創(chuàng)標(biāo)志物具有重要意義。本研究通過(guò)檢測(cè)IgAN尿上清蛋白標(biāo)志物,篩選出有助于IgAN病情診斷的蛋白分子標(biāo)志物,并與臨床病理指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析,明確其臨床應(yīng)用價(jià)值。方法：1、采用美國(guó)RayBiotech公司RayBio(?) AAH-CYT-G4000-8蛋白芯片檢測(cè)15例IgAN患者(Lee氏分級(jí)IgAN-I-II級(jí)、IgAN-III級(jí)、IgAN-IV-V級(jí)各5例),12例腎小球疾病對(duì)照組(Disease Control, DC)患者(微小病變MCD、膜性腎病MN、局灶節(jié)段性腎小球硬化FSGS,各4例)和5例健康對(duì)照組(NC)組尿上清蛋白標(biāo)志物,篩選出有助于IgAN病情判斷的蛋白分子標(biāo)志物；利用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異蛋白進(jìn)行GO功能(Gene Ontology)生物過(guò)程富集和信號(hào)通路分析(KEGG-PATHWAY),選擇組間差異顯著的蛋白進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。2、利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme linked immune-sorbent assay, ELISA)技術(shù)對(duì)上述篩選的差異蛋白在49例IgAN患者(IgAN-Ⅰ-Ⅱ級(jí)8例、IgAN-Ⅲ級(jí)31例、IgAN-Ⅳ-Ⅴ級(jí)10例)、28例DC組患者(MN組8例、MCD組8例、FSGS組12例)和14例NC組中進(jìn)行擴(kuò)大樣本驗(yàn)證,進(jìn)一步明確其對(duì)IgAN病情評(píng)估的價(jià)值。對(duì)差異蛋白與臨床病理指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析,明確蛋白標(biāo)志物對(duì)病情判斷的臨床意義。結(jié)果：利用蛋白芯片技術(shù)篩選IgAN與對(duì)照組間尿上清差異蛋白因子,共篩選出IgAN組與MCD組間差異蛋白8個(gè);IgAN組與MN組間差異蛋白16個(gè);IgAN組與NC組間差異蛋白1個(gè)。亞組分析顯示：IgAN-Ⅰ-Ⅱ級(jí)組與MCD組間差異表達(dá)的細(xì)胞因子6個(gè);IgAN-Ⅰ-Ⅱ級(jí)與MN組間差異表達(dá)的細(xì)胞因子20個(gè);IgAN-Ⅲ級(jí)與MN組間差異表達(dá)的細(xì)胞因子9個(gè);IgAN-Ⅳ-Ⅴ級(jí)與NC組間、IgAN-Ⅳ-Ⅴ級(jí)與MN組間差異表達(dá)的細(xì)胞因子各3個(gè)；IgAN-Ⅰ-Ⅱ級(jí)與NC組間、IgAN-Ⅲ級(jí)組與NC組間、IgAN-Ⅰ-Ⅱ級(jí)與IgAN-Ⅳ-Ⅴ級(jí)間、IgAN-Ⅲ級(jí)與IgAN-Ⅳ-Ⅴ 級(jí)間差異表達(dá)的細(xì)胞因子各1個(gè)。為后期尋找IgAN特異性蛋白標(biāo)志物提供來(lái)源。利用ELISA技術(shù)對(duì)部分蛋白因子進(jìn)行驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)IgAN組尿上清E-Cadherin水平顯著低于DC組(7.11±4.46 vs 13.92±7.65 ng/ml, p0.01), IgAN組尿上清E-Cadherin水平顯著低于MN組(7.11±4.46 vs 18.02±8.40ng/ml,p0.01)和FSGS組(7.11±4.46 vs 14.51±8.10ng/ml, p0.01); IgAN組HER2/ErbB2水平顯著低于DC組(121.84±125.95 vs 749.00±684.09 pg/ml, p0.01), HER2/ErbB2水平顯著低于MN組(121.84±125.95 vs 990.22±406.18pg/ml, p0.01)和MCD組(121.84±125.95 vs 1051.70±928.43 pg/ml, p0.01); Lyve-1水平顯著高于NC組(684.98±223.35 vs 62.12±76.43 pg/ml,p0.01); angiostatin在IgAN組水平顯著高于NC組(255.15±288.43 vs 3.31±5.96ng/ml, p0.05)但低于DC組(255.15±288.43 vs 499.98±314.24 pg/ml, p0.01)。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),angiostatin水平顯著低于MN組(255.15±288.43 vs 579.47±211.69pg/ml, p0.01)和MCD組(255.15±288.43 vs 664.56±375.95 ng/ml, p0.05)。以上指標(biāo)與臨床病理進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)angiostatin水平與SCr (r=0.939, p0.001)、BUN (r=0.931, p0.001), Cys C (r=0.923,p0.001), U-Prot (r=0.784, p0.001)硬化比例(r=0.718,p0.001)、新月體比例(r=0.588,p0.001)均呈正相關(guān),與 eGFR (r=-0.721, p0.001)呈負(fù)相關(guān)。另外,angiostatin在IgAN重度組(Lee氏分級(jí)IgAN-Ⅳ-Ⅴ級(jí)組)的水平顯著增高于IgAN-Ⅰ-Ⅱ級(jí)組(620.43±271.47 vs107.38±83.37 ng/ml, p0.01)和IgAN-Ⅲ級(jí)組(620.43±271.47 vs 117.89±143.84 ng/ml,p0.01),且在內(nèi)皮細(xì)胞增殖組表達(dá)水平顯著高于無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞增殖組(406.95±336.56 vs 189.41±234.70,p0.01),節(jié)段硬化或粘連組的水平顯著高于無(wú)節(jié)段硬化或粘連組(311.54±338.58 vs 112.51±84.90,p0.01)。Angiostatin水平隨著腎小管萎縮、炎細(xì)胞浸潤(rùn)和間質(zhì)纖維化程度的加重而增高,并且在重度間質(zhì)病變組的表達(dá)顯著高于其他組。結(jié)論：本研究首先采用蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)IgAN尿上清蛋白標(biāo)志物譜,篩選出可用于IgAN與對(duì)照組間具有顯著差異的蛋白標(biāo)志物。對(duì)差異蛋白進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),angiostatin在IgAN組與對(duì)照組間表達(dá)有顯著差異,并與臨床、病理指標(biāo)具有很好相關(guān)性。Angiostatin可能是反應(yīng)IgAN病變程度較特異的指標(biāo),可作為重度IgAN特異的分子標(biāo)志物,但其作用機(jī)制及臨床應(yīng)用需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本再驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：IgA腎病 尿液 蛋白標(biāo)志物 angiostatin
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R692
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 第一部分 蛋白芯片技術(shù)高通量篩選IgA腎病尿上清蛋白標(biāo)志物13-36
• 前言13-15
• 材料和方法15-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-32
• 討論32-35
• 小結(jié)35-36
• 第二部分 IgA腎病尿上清蛋白標(biāo)志物的驗(yàn)證及與臨床病理相關(guān)性分析36-60
• 前言36-38
• 材料和方法38-42
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-56
• 討論56-59
• 小結(jié)59-60
• 全文總結(jié)60-61
• 參考文獻(xiàn)61-68
• 文獻(xiàn)綜述68-83
• 參考文獻(xiàn)76-83
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果83-84
• 致謝84-85

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本文編號(hào)：638153