本文關(guān)鍵詞：DPP-Ⅳ抑制劑西格列汀對(duì)高糖狀態(tài)下腎小管上皮細(xì)胞p38MAPK通路的影響

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【摘要】：目的:1.觀察所培養(yǎng)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E)的形態(tài),掌握培養(yǎng)細(xì)胞的基本過程。2.研究西格列汀對(duì)高糖誘導(dǎo)下腎小管上皮細(xì)胞p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信號(hào)通路的影響,進(jìn)一步探討DPP-IV抑制劑西格列汀對(duì)糖尿病腎病可能的作用機(jī)制。方法:將NRK-52E復(fù)蘇在含10%FCS的DMEM低糖培養(yǎng)基中,放入條件為37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng),待NRK-52E生長(zhǎng)絕大部分融合時(shí),換用不含F(xiàn)CS的DMEM低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后分組。將同步后的NRK-52E分為:正常糖組、高滲組、高糖組、p38MAPK通路抑制劑(SB202190)+高糖組、西格列汀干預(yù)+高糖組,采用Western blot印跡檢測(cè)p38MAPK信號(hào)通路的活化情況;PCR檢測(cè)促凋亡因子bax mRNA與抗凋亡因子bcl-2 mRNA相對(duì)量比值;流式細(xì)胞法檢測(cè)同一時(shí)刻N(yùn)RK-52E凋亡率、凋亡蛋白caspase3、凋亡相關(guān)因子bax與bcl-2的比值。結(jié)果:1.Western blot檢測(cè)到正常糖組以及高滲組磷酸化p38表達(dá)很少;而高糖可引起NRK-52E細(xì)胞p38MAPK信號(hào)通路的活化,磷酸化p38蛋白表達(dá)明顯增多;在應(yīng)用p38MAPK特異性抑制劑SB202190后,25mmol/L高糖環(huán)境NRK-52E細(xì)胞p38MAPK通路的活化明顯減少;西格列汀亦有同樣的作用,可減少25mmol/L高糖刺激所引起的p38MAPK通路的活化,減少其下游p38磷酸化蛋白的表達(dá)。2.PCR檢測(cè)可見高糖組細(xì)胞bax mRNA/bcl-2 mRNA較正常組和高滲透壓組明顯增加;SB202190組細(xì)胞bax mRNA/bcl-2 mRNA較高糖組明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);西格列汀組細(xì)胞bax mRNA/bcl-2 mRNA較高糖組也下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.流式細(xì)胞法檢測(cè)到25mmol/L高糖刺激12h、24h、48h均可見NRK-52E細(xì)胞凋亡,24h出現(xiàn)凋亡明顯增加,以48h最為明顯。48h高糖組細(xì)胞凋亡率為(17.5±0.35)%,顯著高于正常組(4.8±0.24)%和高滲組(5.2±0.32)%;SB202190組細(xì)胞凋亡率為(11.3±0.19)%,較高糖組明顯下降35%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);西格列汀組NRK-52E凋亡率為(14.2±0.31)%,較高糖組下降19%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。高糖組凋亡蛋白caspase3的表達(dá)率為(28.1±0.53)%,顯著高于正常組(2.7±0.13)%和高滲組(3.2±0.20)%;SB202190組caspase3的表達(dá)率為(14.6±1.25)%,較高糖組下降40%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);西格列汀組NRK-52E caspase3的表達(dá)率為(20.9±0.87)%,較高糖組下降25%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。高糖(濃度25mmol/L)刺激48h后NRK-52E細(xì)胞bax/bcl-2為(2.87±0.25),顯著高于正常組(0.41±0.17)和高滲組(0.42±0.13);SB202190組bax/bcl-2為(0.70±0.16),較高糖組明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);西格列汀組NRK-52E細(xì)胞bax/bcl-2為(0.78±0.21),較高糖組下降明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.高糖狀態(tài)下腎小管上皮細(xì)胞p38MAPK通路活化,磷酸化p38蛋白及凋亡相關(guān)蛋白bax、caspase3表達(dá)增加;2.西格列汀能夠減輕高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與部分抑制p38MAPK信號(hào)通路相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：西格列汀 腎小管上皮細(xì)胞 凋亡 p38MAPK 高糖
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表10-11
• 前言11-12
• 1 材料與方法12-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法14-19
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19-20
• 2 結(jié)果20-26
• 2.1 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)20-21
• 2.2 Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞p38MAPK途徑的活化及表達(dá)21
• 2.3 PCR檢測(cè)各組腎小管上皮細(xì)胞bax mRNA/bcl-2 mRNA21-22
• 2.4 流式細(xì)胞法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率、caspase3表達(dá)以及bax/bcl-222-24
• 2.5 附圖24-26
• 3 討論26-29
• 4 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 綜述33-40
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 致謝40-41
• 在學(xué)期間研究成果41-42
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷42

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