本文關(guān)鍵詞：Beclin1進(jìn)化保守區(qū)-SA融合蛋白偶聯(lián)生物素-A10適配子制備PSMA靶向系統(tǒng)及其對(duì)前列腺癌細(xì)胞的抑制

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【摘要】：目的:構(gòu)建鏈霉親和素(streptavidin,SA)與Beclin1進(jìn)化保守區(qū)(evolutionary conserved district,ECD)融合蛋白原核表達(dá)載體,將融合蛋白與生物素-前列腺特異性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)特異性適配子A10偶聯(lián)制備PSMA靶向系統(tǒng),鑒定其促進(jìn)PSMA~+前列腺癌細(xì)胞凋亡及自噬的功能。方法:采用基因合成技術(shù)獲得融合基因SA-ECD,克隆至PUC57載體鑒定無(wú)誤后,再將其定向插入原核表達(dá)載體PET30a,IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá),鎳親和凝膠層析柱純化融合蛋白,Western blotting鑒定。按照生物素-A10∶SA-ECD摩爾比為4∶1的比例制備PSMA特異性的偶聯(lián)物即靶向系統(tǒng),凝膠遷移阻滯實(shí)驗(yàn)(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)驗(yàn)證SA-ECD與生物素的結(jié)合,流式細(xì)胞術(shù)、Western blotting、錐蟲(chóng)藍(lán)染色分別檢測(cè)靶向系統(tǒng)對(duì)前列腺癌細(xì)胞凋亡、自噬相關(guān)蛋白表達(dá)和細(xì)胞活力的影響。結(jié)果:雙酶切及基因測(cè)序證實(shí)重組質(zhì)粒PET30a-SA-ECD構(gòu)建成功,IPTG誘導(dǎo)SA-ECD融合蛋白在大腸桿菌中獲得高效表達(dá)并經(jīng)親和凝膠層析成功純化。EMSA實(shí)驗(yàn)證明SA-ECD能有效結(jié)合生物素-A10。靶向系統(tǒng)可促進(jìn)PSMA~+前列腺癌細(xì)胞凋亡和自噬,同時(shí)抑制癌細(xì)胞活力。結(jié)論:成功表達(dá)并純化融合蛋白SA-ECD,構(gòu)建的生物素-A10∶SA-ECD靶向系統(tǒng)能夠殺傷PSMA~+前列腺癌細(xì)胞。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院全軍臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 鏈霉親和素 Beclin蛋白 進(jìn)化保守區(qū) 融合蛋白 適配子A 前列腺癌 凋亡 自噬
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30973463)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25
【正文快照】： 合蛋白( 含His標(biāo)簽) 進(jìn)行純化,收集的融合蛋白做SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜,用封閉緩沖液室溫封閉1 h、加入抗N端His抗體( 1∶ 2 500) 、加入二抗羊抗鼠Ig G( 1∶ 4 000) ,清洗后用Oddesy紅外熒光掃描成像儀掃描成像。采用Bradford法測(cè)定融合蛋白的濃度。1. 4 PSMA靶向系統(tǒng)的構(gòu)建 純化的

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 范瑋,李卓婭,龔非力,姜曉丹,馮瑋;人類(lèi)可溶性TNFRⅠ-GFP融合蛋白重組體的構(gòu)建、表達(dá)和特性分析[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

2 李詠梅;楊海文;羅仁;;人表皮生長(zhǎng)因子-天花粉蛋白融合蛋白的基因克隆、表達(dá)及純化[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年02期

3 馬海智;王秦秦;;融合蛋白在腫瘤研究中的應(yīng)用[J];腫瘤防治研究;2007年05期

4 張新國(guó);王婧;閆璐穎;唐莉;陳建華;王e，

本文編號(hào)：591950