本文關(guān)鍵詞：氧化苦參堿對(duì)腎缺血再灌注損傷的保護(hù)性作用的研究

  更多相關(guān)文章： 腎缺血再灌注損傷 氧化苦參堿 氧化應(yīng)激 細(xì)胞凋亡 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

【摘要】：目的：探討氧化苦參堿(OMT)在腎缺血再灌注損傷(RIRI)中的保護(hù)性作用。方法：第一部分：首先進(jìn)行OMT細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn),以0.1 mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、 2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml6個(gè)濃度梯度處理人腎小管上皮細(xì)胞HK-2細(xì)胞,于24h及48h朋CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力。建立RIRI細(xì)胞模型：乏氧盒中無糖無血清培養(yǎng)2h模擬缺血狀態(tài),放回正常培養(yǎng)箱培養(yǎng)3h模擬再灌注狀態(tài)。參考毒性試驗(yàn)結(jié)果,選用高、低兩種濃度OMT預(yù)處理HK-2細(xì)胞,與正常細(xì)胞同時(shí)造模,觀察細(xì)胞形態(tài)差異并檢測(cè)細(xì)胞活力,評(píng)估療效以確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)藥物濃度。使用最佳實(shí)驗(yàn)濃度的OMT預(yù)處理HK-2細(xì)胞24h后進(jìn)行造模(OMT+IR組),設(shè)置對(duì)照組：control組(正常培養(yǎng)),OMT組(OMT預(yù)處理24h后正常培養(yǎng)),IR組(與OMT+IR組同時(shí)鋪板造模,不加藥)。顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,并采用CCK-8法測(cè)細(xì)胞活力、流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染法定量檢測(cè)HK-2細(xì)胞凋亡情況,分析比較各組間數(shù)據(jù),評(píng)估OMT對(duì)于RIRI細(xì)胞模型的作用。qPCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中PERK/ATF4/CHOP通路相關(guān)mRNA的表達(dá),探索OMT保護(hù)性作用的可能機(jī)制。第二部分：將32只健康雄性ICR小鼠隨機(jī)分為sham組、OMT組、IR組及OMT+IR組,每組8只小鼠。OMT組及OMT+IR組術(shù)前連續(xù)4天及術(shù)后即刻腹腔注射給藥OMT 120mg/kg; sham組和IR組注射生理鹽水0.1ml。建立RIRI動(dòng)物模型：手術(shù)切除右腎,游離左腎血管并以血管夾夾閉50min,腎臟顏色由紅變黑提示阻斷成功,松開阻斷后腎臟顏色由黑變紅提示再灌注成功。IR及OMT+IR組根據(jù)上述方法建模；sham和OMT組僅切除右腎、游離左腎血管,不阻斷血供。再灌注24h后收集血清標(biāo)本及腎臟組織標(biāo)本。檢測(cè)血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平,評(píng)估腎臟功能；檢測(cè)組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量,評(píng)估氧化應(yīng)激水平；腎臟組織切片HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)的改變,并進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)分；Tunel法檢測(cè)腎臟組織細(xì)胞凋亡情況。分析比較各組間數(shù)據(jù),評(píng)估OMT對(duì)RIRI動(dòng)物模型的作用。通過qPCR的方法檢測(cè)各組小鼠腎臟組織中PERK/ATF4/CHOP相關(guān)mRNA的表達(dá),驗(yàn)證體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果：第一部分：細(xì)胞毒性試驗(yàn)顯示：1mg/ml及更低濃度的OMT處理細(xì)胞48h,細(xì)胞活力較control組無明顯差異(P0.05)。藥物療效實(shí)驗(yàn)顯示：模型組(包括IR組、OMT+IR組)細(xì)胞活力顯著低于control組(P0.01),OMT+IR組細(xì)胞活力高于瓜組(P0.05)。模型組顯微鏡下觀察可見明顯細(xì)胞凋亡壞死表現(xiàn),流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)模型組凋亡細(xì)胞明顯增多,相較對(duì)照組具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001),OMT+IR組細(xì)胞凋亡比例較IR組有所下降(P0.05)。模型組細(xì)胞中相關(guān)mRNA表達(dá)均顯著上升(P0.01)。OMT+IR組相關(guān)mRNA表達(dá)上升幅度低于IR組(P0.05)。第二部分：OMT+IR組小鼠血清Cr、BUN水平均明顯低于R組(85.74± 5.976 vs 127.6±13.210,P0.05；28.60±2.805 vs 41.46±3.966,P0.05);OMT+IR組小鼠腎臟組織中SOD活性較IR組有所升高(109.90±4.498 vs 85.50±4.114, P0.05),MDA含量低于IR組(6.033±0.2705 vs 7.136±0.4254,P0.05);OMT+IR組小鼠腎臟組織病理學(xué)評(píng)分明顯低于IR組(P0.05);OMT+R組小鼠腎臟組織凋亡細(xì)胞數(shù)較IR組明顯減少(P0.01)。相較于假手術(shù)組,模型組小鼠腎臟組織中相關(guān)mRNA表達(dá)均有上升(P0.01)。OMT+IR組相關(guān)mRNA表達(dá)上升幅度低于IR組(P0.05)。結(jié)論：1.OMT可顯著改善RIRI模型HK-2細(xì)胞的活力,減少細(xì)胞凋亡,即OMT對(duì)體外缺氧/復(fù)氧造成的HK-2細(xì)胞損傷有一定的保護(hù)性作用。2.OMT可顯著改善RIRI模型小鼠的腎臟功能、減輕腎臟組織的病理性改變,并能起到抗氧化應(yīng)激和抑制細(xì)胞凋亡的作用,即OMT對(duì)缺血再灌注造成的小鼠腎臟損傷有一定的保護(hù)性作用。3.體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)RIRI可使PERK/ATF4/CHOP信號(hào)通路關(guān)鍵mRNA表達(dá)上升；而OMT處理后相關(guān)mRNA表達(dá)下降,故推測(cè)阻礙PERK/ATF4/CHOP信號(hào)通路的激活,可能是OMT抑制細(xì)胞凋亡,減輕RIRI的關(guān)鍵機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：腎缺血再灌注損傷 氧化苦參堿 氧化應(yīng)激 細(xì)胞凋亡 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 縮略詞表10-12
• 前言12-16
• 參考文獻(xiàn)14-16
• 文獻(xiàn)綜述16-23
• 參考文獻(xiàn)19-23
• 第一部分23-37
• 材料和方法23-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-34
• 討論34-36
• 結(jié)論36-37
• 第二部分37-53
• 材料和方法37-45
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-49
• 討論49-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 致謝55-56
• 作者簡(jiǎn)介56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳樹杰;;苦參素對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的影響[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2016年05期

2 張婧;范瑛;汪年松;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與腎臟疾病[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2016年01期

3 聶琛;高政;孫文芳;鄭瑞紅;;氟西汀預(yù)處理對(duì)SD大鼠腦缺血再灌注損傷的腦保護(hù)作用[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年06期

4 周隆書;趙國(guó)龍;李明亮;房磊;王云;;氧化苦參堿預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注損傷心肌保護(hù)作用及其機(jī)制研究[J];寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年06期

5 付凱;袁逸民;蔣昊;邱雪峰;趙曉智;徐林鋒;郭宏騫;;蝦青素在小鼠腎臟缺血再灌注損傷方面的保護(hù)作用[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年02期

6 Wanqing Chen;Rongshou Zheng;Hongmei Zeng;Siwei Zhang;Jie He;;Annual report on status of cancer in China, 2011[J];Chinese Journal of Cancer Research;2015年01期

7 周麗娜;王玉新;方林;武挺;余毅;;內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)缺血再灌注大鼠腎損傷[J];中國(guó)組織工程研究;2014年32期

8 程鋼;秦媛媛;程迪;楊磊;沈夕坤;黃玉宇;張慧靈;顧振綸;;氧化苦參堿對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷的保護(hù)作用及其抑制凋亡的作用機(jī)制[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2013年03期

9 向發(fā)良;黃贊松;黃衍強(qiáng);周喜漢;;苦參素對(duì)人肝正常細(xì)胞L02影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年01期

10 朱道立;王康樂;陳佩林;姜雅瓊;;氧化苦參堿對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)的L_6成肌細(xì)胞凋亡的影響[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年07期

，

本文編號(hào)：572218