本文關(guān)鍵詞：Rap2對微絲細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的調(diào)控及機(jī)制

  更多相關(guān)文章： Rap2 微絲細(xì)胞骨架 Rho家族蛋白 黏著斑蛋白

【摘要】：Rap2屬于Ras家族中的Rap亞族,Rap亞族包括Rap1和Rap2,大量文獻(xiàn)顯示Ras、Rap1具有調(diào)控細(xì)胞骨架,細(xì)胞粘附等功能,而Rap2與Rap1在氨基酸序列上有60%同源性,與Ras有46%同源性,且Rap2特異效應(yīng)分子MAP4K4、MINK、TINK、PARG均提示Rap2與微絲細(xì)胞骨架可能存在聯(lián)系,本文主要闡明Rap2與微絲細(xì)胞骨架關(guān)系及其調(diào)控機(jī)制,為深入研究Rap2信號通路及其生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ)。本文首先利用免疫熒光方法靜態(tài)比較在穩(wěn)定表達(dá)和瞬時表達(dá)Rap2的微絲細(xì)胞骨架的形態(tài)改變情況,發(fā)現(xiàn)在Rap2過表達(dá)的NC65,CRL1932,CCF-RC-2細(xì)胞中,有60%以上細(xì)胞明顯變圓,應(yīng)力纖維排布明顯紊亂,細(xì)胞失去原有鋪展?fàn)顟B(tài),且肌動蛋白與Rap2有共定位的趨勢,其次利用活細(xì)胞工作站的方法動態(tài)觀察Rap2對微絲細(xì)胞骨架動態(tài)變化,Rap2過表達(dá)的細(xì)胞中,細(xì)胞極性消失,微絲骨架紊亂,Rap2干擾后細(xì)胞運(yùn)動能力減慢,應(yīng)力纖維減弱,并提前進(jìn)入凋亡狀態(tài)。對于機(jī)制的探索,利用GST-Pull Down實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在Rap2過表達(dá)的細(xì)胞中,Rap2顯著下調(diào)Rho A蛋白活性,增高Rac活性,降低Cdc42活性;免疫熒光方法在CRL1932、CRL1933瞬時表達(dá)Rap2后分別FAKY397、Paxillin,Vinculin染色,發(fā)現(xiàn)在Rap2過表達(dá)后,約60%細(xì)胞極性喪失或者偽足呈均一化分布,且Rap2抑制FAKY397磷酸化水平。綜上所述,Rap2對微絲細(xì)胞骨架改變明顯,通過下調(diào)Rho蛋白活性,增高Rac活性,降低Cdc42活性和改變黏著斑分布極性等使細(xì)胞變小變圓,應(yīng)力纖維減弱,應(yīng)力纖維排布紊亂,微絲骨架紊亂。
【關(guān)鍵詞】：Rap2 微絲細(xì)胞骨架 Rho家族蛋白 黏著斑蛋白
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q343;R737.11
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第1章 緒論8-23
• 1.1 課題背景及研究的目的和意義8-9
• 1.2 Rap2 簡介9-12
• 1.2.1 Rap2 的基本結(jié)構(gòu)特征9-10
• 1.2.2 Rap2 活性調(diào)節(jié)10
• 1.2.3 Rap2 的下游效應(yīng)分子10-11
• 1.2.4 Rap2 的生物學(xué)功能11-12
• 1.3 微絲細(xì)胞骨架研究現(xiàn)狀12-15
• 1.3.1 微絲的組成及其動態(tài)組裝12-13
• 1.3.2 Rho家族蛋白對微絲細(xì)胞骨架的影響13-14
• 1.3.3 Rap家族與骨架蛋白聯(lián)系14-15
• 1.4 粘著斑復(fù)合體研究現(xiàn)狀15-21
• 1.4.1 粘著斑蛋白FAK、Paxillin、Vinculin簡介15-17
• 1.4.2 FAK信號通路17-18
• 1.4.3 FAK與Ras家族關(guān)系18-19
• 1.4.4 FAK與癌癥的關(guān)系19-21
• 1.5 本文主要研究內(nèi)容21-22
• 1.6 技術(shù)路線22-23
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法23-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-25
• 2.1.1 細(xì)胞系23
• 2.1.2 質(zhì)粒23
• 2.1.3 主要試劑材料及試劑配方23-25
• 2.1.4 主要儀器25
• 2.1.5 主要分析軟件25
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法25-32
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及收集25-27
• 2.2.2 免疫熒光27-28
• 2.2.3.穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的篩選28
• 2.2.4.活細(xì)胞工作站28-29
• 2.2.5 GST融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)29
• 2.2.6 GST-Pull Down29-30
• 2.2.7 Western Blotting30-32
• 第3章 Rap2 對微絲細(xì)胞骨架表型的影響32-42
• 3.1 Rap2 對微絲細(xì)胞骨架的靜態(tài)變化32-37
• 3.2 Rap2 對微絲細(xì)胞骨架的動態(tài)變化37-40
• 3.3 討論40
• 3.4 本章小結(jié)40-42
• 第4章 Rap2 誘導(dǎo)微絲細(xì)胞骨架表型的機(jī)制42-55
• 4.1 Rap2 對Rho家族蛋白活性的影響42-43
• 4.2 Rap2 對粘著斑復(fù)合體分布的影響43-51
• 4.3 Rap2 對FAKY397磷酸化水平影響51-52
• 4.4 討論52-53
• 4.5 本章小結(jié)53-55
• 結(jié)論55
• 展望55-56
• 參考文獻(xiàn)56-65
• 致謝65

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