本文關鍵詞：Rap2對微絲細胞骨架結構的調控及機制

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【摘要】：Rap2屬于Ras家族中的Rap亞族,Rap亞族包括Rap1和Rap2,大量文獻顯示Ras、Rap1具有調控細胞骨架,細胞粘附等功能,而Rap2與Rap1在氨基酸序列上有60%同源性,與Ras有46%同源性,且Rap2特異效應分子MAP4K4、MINK、TINK、PARG均提示Rap2與微絲細胞骨架可能存在聯系,本文主要闡明Rap2與微絲細胞骨架關系及其調控機制,為深入研究Rap2信號通路及其生物學功能奠定基礎。本文首先利用免疫熒光方法靜態(tài)比較在穩(wěn)定表達和瞬時表達Rap2的微絲細胞骨架的形態(tài)改變情況,發(fā)現在Rap2過表達的NC65,CRL1932,CCF-RC-2細胞中,有60%以上細胞明顯變圓,應力纖維排布明顯紊亂,細胞失去原有鋪展狀態(tài),且肌動蛋白與Rap2有共定位的趨勢,其次利用活細胞工作站的方法動態(tài)觀察Rap2對微絲細胞骨架動態(tài)變化,Rap2過表達的細胞中,細胞極性消失,微絲骨架紊亂,Rap2干擾后細胞運動能力減慢,應力纖維減弱,并提前進入凋亡狀態(tài)。對于機制的探索,利用GST-Pull Down實驗發(fā)現在Rap2過表達的細胞中,Rap2顯著下調Rho A蛋白活性,增高Rac活性,降低Cdc42活性;免疫熒光方法在CRL1932、CRL1933瞬時表達Rap2后分別FAKY397、Paxillin,Vinculin染色,發(fā)現在Rap2過表達后,約60%細胞極性喪失或者偽足呈均一化分布,且Rap2抑制FAKY397磷酸化水平。綜上所述,Rap2對微絲細胞骨架改變明顯,通過下調Rho蛋白活性,增高Rac活性,降低Cdc42活性和改變黏著斑分布極性等使細胞變小變圓,應力纖維減弱,應力纖維排布紊亂,微絲骨架紊亂。
【關鍵詞】：Rap2 微絲細胞骨架 Rho家族蛋白 黏著斑蛋白
【學位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q343;R737.11
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第1章 緒論8-23
• 1.1 課題背景及研究的目的和意義8-9
• 1.2 Rap2 簡介9-12
• 1.2.1 Rap2 的基本結構特征9-10
• 1.2.2 Rap2 活性調節(jié)10
• 1.2.3 Rap2 的下游效應分子10-11
• 1.2.4 Rap2 的生物學功能11-12
• 1.3 微絲細胞骨架研究現狀12-15
• 1.3.1 微絲的組成及其動態(tài)組裝12-13
• 1.3.2 Rho家族蛋白對微絲細胞骨架的影響13-14
• 1.3.3 Rap家族與骨架蛋白聯系14-15
• 1.4 粘著斑復合體研究現狀15-21
• 1.4.1 粘著斑蛋白FAK、Paxillin、Vinculin簡介15-17
• 1.4.2 FAK信號通路17-18
• 1.4.3 FAK與Ras家族關系18-19
• 1.4.4 FAK與癌癥的關系19-21
• 1.5 本文主要研究內容21-22
• 1.6 技術路線22-23
• 第2章 實驗材料與方法23-32
• 2.1 實驗材料23-25
• 2.1.1 細胞系23
• 2.1.2 質粒23
• 2.1.3 主要試劑材料及試劑配方23-25
• 2.1.4 主要儀器25
• 2.1.5 主要分析軟件25
• 2.2 實驗方法25-32
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)、轉染及收集25-27
• 2.2.2 免疫熒光27-28
• 2.2.3.穩(wěn)轉細胞系的篩選28
• 2.2.4.活細胞工作站28-29
• 2.2.5 GST融合蛋白的誘導表達29
• 2.2.6 GST-Pull Down29-30
• 2.2.7 Western Blotting30-32
• 第3章 Rap2 對微絲細胞骨架表型的影響32-42
• 3.1 Rap2 對微絲細胞骨架的靜態(tài)變化32-37
• 3.2 Rap2 對微絲細胞骨架的動態(tài)變化37-40
• 3.3 討論40
• 3.4 本章小結40-42
• 第4章 Rap2 誘導微絲細胞骨架表型的機制42-55
• 4.1 Rap2 對Rho家族蛋白活性的影響42-43
• 4.2 Rap2 對粘著斑復合體分布的影響43-51
• 4.3 Rap2 對FAKY397磷酸化水平影響51-52
• 4.4 討論52-53
• 4.5 本章小結53-55
• 結論55
• 展望55-56
• 參考文獻56-65
• 致謝65

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1 后橫;;微絲動力學很多問題但很少答案[J];國外醫(yī)學情報;1988年05期

2 楊坤,王琦,李艷紅;植物微絲骨架研究進展[J];首都師范大學學報(自然科學版);2004年S1期

3 安美文,吳文周,陳維毅,曲華,滕維中;基于微絲主動收縮的細胞分裂的力學模型[J];力學學報;2005年03期

4 買霞,陳莉,徐瑞成;微絲在體外培養(yǎng)四種不同細胞表達的形態(tài)觀察[J];武警醫(yī)學院學報;2005年02期

5 邢艷麗;李靜;耿美玉;;細胞遷移中微絲微管的變化及其信號轉導通路研究進展[J];現代生物醫(yī)學進展;2007年06期

6 邱鴻;于榮;;微管和微絲的相互作用[J];細胞生物學雜志;2009年04期

7 陳瓊;黃善金;于榮;;植物微絲骨架動態(tài)變化的調節(jié)[J];植物生理學報;2011年01期

8 許萍，，張丕方;微絲骨架的研究進展[J];植物學通報;1995年S1期

9 雷宇華,閆芝芬,嚴玉平,魏建昆;微絲骨架與信號轉導研究進展[J];華北農學報;2000年01期

10 劉俊梅,李巖,張紅;銀杏花粉的萌發(fā)及其內部微絲骨架骨的研究[J];農業(yè)生物技術學報;2001年04期

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1 陳建國;;微絲與細胞行為[A];中國細胞生物學學會第十屆全體會員代表大會暨第十二次學術大會論文集[C];2011年

2 王端順;徐淑惠;胡云英;馬躍;孫惟東;汪X仁;;鈣調素拮抗劑——三氟啦嗪對微絲組裝的響影[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

3 彭雄波;孫蒙祥;楊弘遠;;高等植物受精卵中精核的遷移依賴于微絲而不依賴于微管[A];中國細胞生物學學會2005年學術大會、青年學術研討會論文摘要集[C];2005年

4 趙和平;任海云;;Rop1Ps對百合花粉管生長和微絲骨架排列的影響[A];中國細胞生物學學會第八屆會員代表大會暨學術大會論文摘要集[C];2003年

5 樊小雪;向云;任海云;;擬南芥鈣依賴性微絲結合蛋白AtABP41的分離純化與特性分析[A];中國細胞生物學學會2005年學術大會、青年學術研討會論文摘要集[C];2005年

6 彭雄波;嚴婷婷;孫蒙祥;;高等植物受精后精核遷移依賴于微絲而不依賴于微管[A];中國細胞生物學學會第九次會員代表大會暨青年學術大會論文摘要集[C];2007年

7 黃豈平;蔡紹皙;石宇;向昆侖;;基底應變可通過改變微絲骨架的張力調節(jié)Rho蛋白活性[A];第十次中國生物物理學術大會論文摘要集[C];2006年

8 邵陽光;;細胞骨架[A];中國細胞生物學學會第十屆全體會員代表大會暨第十二次學術大會論文集[C];2011年

9 尹力;柳惠圖;王端順;;微絲聚合的改變對PIP_2及DG水平的影響[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

10 胡適宜;李春貴;;用鬼筆環(huán)肽予處理保存花粉管中微絲超微結構的方法[A];海峽兩岸電子顯微學討論會論文專集[C];1991年

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1 仙本明;生產不銹鋼微絲的前景分析[N];中國建材報;2006年

2 仙本明;山東兗礦水泥廠不銹鋼微絲生產線投產[N];中國建材報;2006年

3 劉德君　李榮霞;盂縣不銹鋼微絲項目填補省內空白[N];陽泉日報;2011年

4 江水;小企業(yè)名品占領大市場[N];江蘇經濟報;2006年

5 本報記者 毛慶 通訊員 張小華 郭禮華 實習生 韓斌;區(qū)里來了大學教授管科技[N];南京日報;2010年

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1 時蘭春;微絲、微管骨架在擬南芥細胞機械響應中的作用[D];重慶大學;2011年

2 賈紅磊;植物特有微絲交聯蛋白-CROLIN1的功能研究[D];蘭州大學;2013年

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5 程云會;血管平滑肌細胞SM22α的表達調節(jié)及其功能研究[D];河北醫(yī)科大學;2004年

6 趙楊勇;玻璃包覆法制備Cu-Sn和Ni-Mn-Ga形狀記憶微絲及其超彈性研究[D];北京科技大學;2015年

7 安美文;真核細胞分裂過程中生化刺激與力學行為的耦合作用[D];太原理工大學;2005年

8 王嘉麗;微絲骨架在DENV2感染過程中作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2007年

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1 楊美玲;Rap2對微絲細胞骨架結構的調控及機制[D];哈爾濱工業(yè)大學;2015年

2 王瑩;芽再生過程中微絲骨架通過調節(jié)生長素的極性運輸影響干細胞的再生[D];山東農業(yè)大學;2013年

3 陳艷梅;白gD花粉管微絲骨架介導信號傳導的蛋白質組學研究[D];中國科學院研究生院（植物研究所）;2005年

4 曾晶;微絲相關的微囊藻毒素毒性機理研究[D];寧波大學;2013年

5 趙艷;雜交鵝掌楸懸浮培養(yǎng)體細胞的微絲骨架變化[D];南京林業(yè)大學;2010年

6 李寶龍;基于找形分析的細胞骨架力學模型[D];上海交通大學;2013年

7 張小清;一種水稻微絲結合蛋白OsFH1的功能研究[D];上海師范大學;2014年

8 劉華杰;微絲解聚因子在大鼠卵泡及黃體中的表達[D];東北農業(yè)大學;2008年

9 劉尚剛;擬南芥微絲骨架動態(tài)調節(jié)鹽脅迫誘導的NADPH氧化酶活性和活性氧的產生[D];山東農業(yè)大學;2011年

10 高媛;CRMPs與海馬神經元生長錐微管和微絲相互作用的研究[D];暨南大學;2014年

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