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Cdc42信號(hào)蛋白在ACTH保護(hù)足細(xì)胞機(jī)制中的作用探討

發(fā)布時(shí)間:2017-07-13 14:03

  本文關(guān)鍵詞:Cdc42信號(hào)蛋白在ACTH保護(hù)足細(xì)胞機(jī)制中的作用探討


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【摘要】:目的:通過觀察分析促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)作用于阿霉素(ADR)誘導(dǎo)損傷的足細(xì)胞后nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表達(dá)的變化,來初步探討cdc42信號(hào)蛋白在ACTH保護(hù)足細(xì)胞的具體地位作用。方法:1.足細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng):將凍存于液氮中的條件永生型小鼠足細(xì)胞E11細(xì)胞快速融化后于33℃中增殖培養(yǎng),3~4天傳代一次,然后取生長(zhǎng)至約90%的足細(xì)胞,胰酶消化后傳于T75瓶,于37℃無γ-干擾素條件下培養(yǎng)10 d使其分化,此時(shí)觀察足細(xì)胞生長(zhǎng)分化形態(tài),若狀態(tài)良好時(shí)可用于試驗(yàn)。2.實(shí)驗(yàn)分組:將足細(xì)胞分為六組:正常對(duì)照組,阿霉素處理組(濃度為1μmol/L的阿霉素處理24小時(shí)),ACTH處理組(濃度為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分別處理1h),ZCL278處理組(50u M ZCL278處理1h),阿霉素+ACTH處理組(濃度為1μmol/L的阿霉素處理24小時(shí)后再分別加入濃度為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分別處理1h),阿霉素+ACTH+ZCL278處理組(濃度為1μmol/L的阿霉素處理24小時(shí)后再分別加入濃度為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分別處理1h,然后再加入50u M ZCL278分別處理1h)。3.檢測(cè)指標(biāo):采用RT-PCR方法檢測(cè)nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表達(dá);采用Western-blotting技術(shù)對(duì)nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:與正常對(duì)照組對(duì)比,阿霉素處理組nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達(dá)明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而cdc42和actin的m RNA及蛋白表達(dá)未有明顯降低。與正常對(duì)照組對(duì)比,ZCL278處理組cdc42和actin的m RNA及蛋白表達(dá)明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達(dá)未有明顯降低。與正常對(duì)照組對(duì)比,中濃度ACTH處理組nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達(dá)升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而cdc42和actin的m RNA及蛋白表達(dá)未有明顯升高。與低濃度和高濃度ACTH處理組相比,中濃度ACTH處理組nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達(dá)升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與阿霉素處理組相比,中濃度阿霉素+ACTH處理組nephrin和podocin的m RNA及蛋白表達(dá)明顯升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而cdc42和actin的m RNA及蛋白表達(dá)未有明顯升高。與正常對(duì)照組對(duì)比,阿霉素+ACTH+ZCL278處理組cdc42和actin的m RNA及蛋白表達(dá)明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:足細(xì)胞的nephrin和podocin結(jié)構(gòu)蛋白是ACTH保護(hù)足細(xì)胞的的基礎(chǔ),但這種保護(hù)作用并不是通過影響cdc42信號(hào)蛋白來表現(xiàn)的,但相信我們的研究能對(duì)未來的相關(guān)研究提供一些思路及幫助。
【關(guān)鍵詞】:足細(xì)胞 ACTH 阿霉素 cdc42蛋白 actin podocin nephrin
【學(xué)位授予單位】:蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:R692
【目錄】:
  • 中文摘要4-6
  • Abstract6-9
  • 引言9-11
  • 材料與方法11-18
  • 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-20
  • 論文圖表20-26
  • 討論26-29
  • 結(jié)論29-30
  • 參考文獻(xiàn)30-33
  • 綜述33-44
  • 參考文獻(xiàn)40-44
  • 英文縮略詞表44-45
  • 攻讀碩士期間公開發(fā)表的論文45-46
  • 致謝46-47

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5 成彩聯(lián);鄭振達(dá);石成鋼;葉增純;劉迅;婁探奇;;晚期糖基化終產(chǎn)物對(duì)足細(xì)胞內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年17期

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4 王坤;Cdc42信號(hào)蛋白在ACTH保護(hù)足細(xì)胞機(jī)制中的作用探討[D];蘇州大學(xué);2015年

5 梁斌;促腎上腺皮質(zhì)激素與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1對(duì)足細(xì)胞表型的影響[D];蘇州大學(xué);2012年

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本文編號(hào):537157

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