本文關(guān)鍵詞：YAP基因沉默對(duì)人前列腺癌細(xì)胞增殖、凋亡及其雄激素受體的影響

  更多相關(guān)文章： 前列腺癌 雄激素受體(AR) Yes-相關(guān)蛋白(YAP) shRNA

【摘要】：目的：探討慢病毒介導(dǎo)shRNA沉默Yes-相關(guān)蛋白(Yes-associated protein, YAP)基因?qū)θ饲傲邢侔┘?xì)胞株LNC aP細(xì)胞增殖、凋亡及其雄激素受體(androgen receptor, AR)的影響。方法：3條針對(duì)YAP基因的shRNA (YAP-shRNA1、YAR-shRNA2、 YAP-shRNA3)慢病毒干擾載體感染LNCaP細(xì)胞,嘌呤霉素篩選7天以上,建立慢病毒穩(wěn)定感染細(xì)胞系；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR不口Western blot技術(shù)分別檢測(cè)細(xì)胞YAP. ARmRNA和蛋白表達(dá);選取沉默效率最高YAP-shRNA1慢病毒干擾載體組；以細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)(cellcounting kit-8, CCK-8)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)(colony formation)測(cè)定LNCaP細(xì)胞增殖能力；Hoechst 33258染色法對(duì)細(xì)胞凋亡形態(tài)改變進(jìn)行檢測(cè)；流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期分布和凋亡改變,Western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控因子p21、CyclinDl和凋亡調(diào)控因子Bcl-2、Bax表達(dá)。結(jié)果：重組慢病毒成功感染前列腺癌LNCaP細(xì)胞,通過嘌呤霉素篩選7天后,感染效率達(dá)95%以上,獲得穩(wěn)定沉默YAP基因LNCaP細(xì)胞系。與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組比較,感染shF NA慢病毒干擾載體各組中AR mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào),細(xì)胞增殖受到明顯抑制,細(xì)胞周期阻滯于G1期,細(xì)胞凋亡顯著增加,且細(xì)胞周期調(diào)控蛋白p21、促凋亡蛋白Bax表達(dá)上調(diào),細(xì)胞周期調(diào)控蛋白CyclinD1、抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)。結(jié)論：慢病毒介導(dǎo)shRNA沉默YAP基因能有效下調(diào)YAP在LNCaP細(xì)胞中表達(dá),并抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,作用機(jī)制可能是通過調(diào)控p21和CyclinD1使細(xì)胞周期阻滯,影響B(tài)cl-2和Bax表達(dá)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；YAP可能作為AR配體參與AR信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 雄激素受體(AR) Yes-相關(guān)蛋白(YAP) shRNA
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-23
• 2 結(jié)果23-32
• 3 討論32-36
• 全文總結(jié)36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 文獻(xiàn)綜述41-57
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 致謝57-58
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文58

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本文編號(hào)：526035