本文關(guān)鍵詞：hTrm61基因?qū)Π螂装?637細胞侵襲性的影響及基因芯片差異基因的初步探討

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【摘要】：【背景和目的】在泌尿生殖系統(tǒng)中,膀胱癌是最為常見的惡性腫瘤,并且發(fā)病率逐年上升。2010年,僅僅在美國大約有70530名新的患者,并且有14680個患者死于膀胱癌。目前膀胱癌分型中,最常見的是移行細胞癌,鱗癌、腺癌,其他篩檢的分型僅占一小部分。膀胱癌已經(jīng)嚴重的影響了人們的工作和生活。一方面,在膀胱癌診斷、治療、復(fù)發(fā)監(jiān)測和治療相關(guān)并發(fā)癥的過程中需要昂貴的費用,給患者帶來巨大的經(jīng)濟壓力;另一方面,膀胱癌具有很高的復(fù)發(fā)率,相當(dāng)一部分非肌層浸潤性膀胱癌在復(fù)發(fā)時,其分期和分級升高,并且約10%-20%發(fā)展成為肌層浸潤性膀胱癌,這時只能通過根治性膀胱全切和尿流改道術(shù)來治療。因此,盡早明確診斷和控制病情發(fā)展是膀胱癌治療中的關(guān)鍵所在。尿液修飾核苷是一種可靠的腫瘤標(biāo)記物,在多種腫瘤的早期診斷、病情評價和預(yù)后的評估方面具有十分重要的作用。我們之前的研究表明,m1A(1-甲基腺苷)和1-mel(1甲基次黃苷)聯(lián)合檢測具有很高的靈敏度(92.45%)和特異性(87.50%)。m1A58甲基轉(zhuǎn)移酶(h Trm6P/h Trm61P)是體內(nèi)產(chǎn)生m1A的一種蛋白酶,它是一種異源四聚體,由兩個亞基組成。它能夠把t RNA58位的腺苷(A)催化成1-甲基腺苷(m1A)。我們前期研究中發(fā)現(xiàn),膀胱癌患者與正常人相比,其膀胱癌組織和尿液中的m1A水平均明顯升高。h Trm61基因是m1A58甲基轉(zhuǎn)移酶合成的必須基因之一,當(dāng)敲除h Trm61基因后,m1A的表達水平降低。并且在篩選出高表達h Trm61基因的5637細胞株中,敲除h Trm61基因后,細胞的增殖受到抑制,凋亡增強。這說明h Trm61基因可能在膀胱癌的發(fā)病過程中有重要作用。本實驗在前一步的基礎(chǔ)上,進一步研究敲除h Trm61基因后5637細胞的侵襲能力的變化。把轉(zhuǎn)染h Trm61-si RNA的5637細胞和轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的5637細胞送檢做Affymetrix U133 plus 2.0 array芯片分析,以分析敲除h Trm61基因后,基因表達譜的差異基因,以此來研究敲除h Trm61后,可能影響到哪些信號通路�！痉椒ā�1化學(xué)合成h Trm61-si RNA、無效序列si RNA(Negative control)。實驗分3組:實驗組、陰性對照組、空白對照組。利用lipo2000分別將h Trm61-si RNA和無效序列si RNA瞬時轉(zhuǎn)染至5637細胞株作為實驗組和陰性對照組,不作任何處理的5637細胞株作為空白對照組。轉(zhuǎn)染24h后,熒光定量PCR測定h Trm61基因的敲除效率;然后用TRANSWELLL測定敲除h Trm61后,對5637細胞侵襲的影響。2利用基因芯片檢測hTrm61-siRNA轉(zhuǎn)染至5637細胞株后相對于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的5637細胞株的基因表達譜的改變,篩選出差異基因,利用PANTHER數(shù)據(jù)庫對這些差異基因進行GO功能分析,并初步探究這些基因可能影響到那些通路【結(jié)果】1空白組細胞穿膜數(shù)為:76±4.6,陰性對照組細胞穿膜數(shù)為:74±5.2,實驗組細胞穿膜數(shù)為:32±2.2。陰性對照組和空白組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),實驗組和空白對照組相比差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2基因芯片結(jié)果顯示:按差異差異(Foldchange)≥2.0倍或者≤0.5倍為顯著性差異標(biāo)準,差異基因有2423個,其中上調(diào)的有1337個,下調(diào)的有1086個;若將差異顯著性標(biāo)準上調(diào)至5倍,則差異基因有419個,其中上調(diào)的有221個,下調(diào)的有198個。這些差異基因能夠影響到許多信號通路�！窘Y(jié)論】1膀胱癌細胞株5637中敲除h Trm61基因,發(fā)現(xiàn)膀胱癌5637細胞株的侵襲能力變?nèi)?說明h Trm61基因能夠增加細胞株5637的侵襲性。這提示我們h Trm61基因在膀胱癌的侵襲發(fā)生機制中可能起到重要作用。2初步構(gòu)建沉默h Trm61基因的5637細胞相對于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組的差異基因表達譜。3利用基因芯片技術(shù),在敲除h Trm61基因組和空質(zhì)粒組對比中發(fā)現(xiàn)了多達上千個差異基因的表達,這些差異基因涉及到許多信號通路,可能為下一步繼續(xù)深究與膀胱癌有關(guān)的發(fā)生過程和機制打下基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：hTrm61 侵襲 基因芯片 差異基因 信號通路
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 中英文縮略詞11-12
• 1. 前言12-14
• 2. 對象、材料和方法14-20
• 2.1 研究對象14
• 2.2 實驗涉及到的材料14-15
• 2.3 方法15-20
• 3 結(jié)果20-29
• 3.1 細胞侵襲相關(guān)結(jié)果20-22
• 3.2 基因芯片的相關(guān)結(jié)果：22-29
• 4 討論29-31
• 5 結(jié)論31-32
• 6 參考文獻32-33
• 綜述33-49
• 參考文獻44-49
• 個人簡歷及攻讀碩士期間發(fā)表論文情況49-50
• 致謝50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 吳輝;劉宏民;楊松鵬;王慶偉;張玉瑞;袁璞;易強;劉剛;王少敏;宋東奎;;尿中修飾核苷水平在膀胱移行細胞癌診斷及預(yù)測預(yù)后中的意義[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年16期

2 姚華強,彭瑛,鐘世鎮(zhèn),何恢緒,李忠華;PDGFR及c-Fos的表達與膀胱癌臨床生物學(xué)特征的關(guān)系[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年02期

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本文編號：517529